高中生物选修一-DNA粗提取与鉴定.ppt

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1、沈丘县第一高级中学 李亚中 2018年3月17日一、基础知识：提取DNA的方法（1 1）DNADNA和蛋白质等成分和蛋白质等成分在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶解度不同；溶液中溶解度不同；（0.14mol/L0.14mol/L的的NaClNaCl溶液溶液,DNA,DNA溶解度最低，析出溶解度最低，析出）选择选择适当的盐浓度适当的盐浓度就能使就能使DNADNA充分溶解，充分溶解，而杂质沉淀而杂质沉淀，或者相反；，或者相反；1 1、DNADNA的的溶解性溶解性（2 2）DNADNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但是，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利

2、用这一原理，可以将利用这一原理，可以将DNADNA与蛋白与蛋白质进一步分离。质进一步分离。一、基础知识：提取DNA的方法（1 1）蛋白酶：）蛋白酶：水解蛋白质水解蛋白质，不能水解不能水解DNADNA。（2 2）高温：）高温：大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080的高温，而的高温，而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性。（3 3）洗涤剂：）洗涤剂：瓦解细胞膜（瓦解细胞膜（主要破坏膜主要破坏膜中的蛋白质分子中的蛋白质分子），），但对但对DNADNA没影响。没影响。2 2、DNADNA对酶、高温和洗涤剂的对酶、高温和洗涤剂的耐受性耐受性（1 1）二苯胺：）二苯胺：沸水浴

3、条件下，沸水浴条件下，DNADNA遇二苯胺沸水浴遇二苯胺沸水浴5min5min会染成蓝色会染成蓝色（2 2）甲基绿：将）甲基绿：将DNADNA染成染成绿色绿色3 3、DNADNA鉴定原理鉴定原理二、实验设计原则上只要含原则上只要含DNADNA的生物材料都可以，但是的生物材料都可以，但是选选取取DNADNA含量相对较高的生物组织含量相对较高的生物组织，成功率更大。，成功率更大。（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取 本实验材料：新鲜本实验材料：新鲜鸡血细胞液鸡血细胞液和鸡全血相比，和鸡全血相比，鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA相对含相对含量高量高，保证实验能提取到足够量的，保证实验能提取到

4、足够量的DNADNA。二、实验设计（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液 1.1.动物细胞：动物细胞：加蒸馏水加蒸馏水使细胞吸水胀破使细胞吸水胀破，玻璃棒，玻璃棒搅搅拌可加速细胞膜和核膜破裂拌可加速细胞膜和核膜破裂，过滤后过滤后收集滤液收集滤液 2.2.植物细胞：植物细胞：切碎切碎后加后加洗涤剂洗涤剂和和食盐食盐，然后，然后充分充分搅拌、研磨搅拌、研磨，过滤后收集，过滤后收集滤液滤液；（；（P55P55问题）问题）二、实验设计（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质 方案方案3 3：控制温度在：控制温度在60756075 方案方案2 2：滤液中加嫩肉粉（木瓜蛋

5、白酶）：滤液中加嫩肉粉（木瓜蛋白酶）方案方案1 1：控制：控制NaClNaCl溶液的浓度，反复地溶液的浓度，反复地 溶解与析出溶解与析出DNADNA，去除杂质，去除杂质 前面处理后的溶液过滤，加前面处理后的溶液过滤，加与滤液体积与滤液体积相等的相等的、冷却冷却的的酒精溶液酒精溶液(体积分数体积分数9595)，静置静置2 23min3min，溶液中会出现，溶液中会出现白色丝状物白色丝状物 粗提取粗提取DNADNA 用玻璃棒用玻璃棒沿一个方向沿一个方向搅拌，搅拌，卷起丝状物卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水并用滤纸吸取上面的水1、DNA的析出（的析出（进一步提纯进一步提纯DNA）（四）（四）DNAD

6、NA的析出与鉴定的析出与鉴定2.DNA的鉴定的鉴定 向两支试管中分别加入向两支试管中分别加入向两支试管中分别加入向两支试管中分别加入 2mol/L 2mol/L 2mol/L 2mol/L NaClNaClNaClNaCl 溶液溶液溶液溶液5ml5ml5ml5ml 其中一支试管中加其中一支试管中加其中一支试管中加其中一支试管中加DNADNADNADNA丝状物丝状物丝状物丝状物 各加入各加入各加入各加入二苯胺二苯胺二苯胺二苯胺试剂试剂试剂试剂4ml4ml4ml4ml 混匀后，混匀后，混匀后，混匀后，沸水浴沸水浴沸水浴沸水浴中加热中加热中加热中加热5min5min5min5min 待冷却后待冷却后

7、待冷却后待冷却后，比较两只试管中，比较两只试管中，比较两只试管中，比较两只试管中溶液的颜色变化溶液的颜色变化溶液的颜色变化溶液的颜色变化 观察现象：观察现象：观察现象：观察现象：溶解丝状物的溶液变为溶解丝状物的溶液变为蓝色蓝色（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定 观察观察DNADNA颜色，提取的是白色丝状物吗？颜色，提取的是白色丝状物吗？若不是，说明若不是，说明DNADNA中的杂质较多；中的杂质较多；用二苯胺鉴定的结果如何？用二苯胺鉴定的结果如何？若出现蓝色若出现蓝色,说明实验基本成功，说明实验基本成功，若不呈现蓝色，可能所提取的若不呈现蓝色，可能所提取的DNADNA含量低，含量低，或是实验操作中出现错误。或是实验操作中出现错误。四、课题成果评价四、课题成果评价三、操作提示（三、操作提示（P56P56）五、课题延伸五、课题延伸