第七章克隆基因的表达及基因干扰精选文档.ppt

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1、第七章 克隆基因的表达及基因干扰本讲稿第一页，共七十二页第七章第七章 克隆基因的表达及基因干扰克隆基因的表达及基因干扰第一节第一节 外源基因的表达外源基因的表达第二节第二节 表达产物的分离、纯化与鉴定表达产物的分离、纯化与鉴定第三节第三节 基因表达干扰技术基因表达干扰技术本讲稿第二页，共七十二页第一节第一节 外源基因的表达外源基因的表达本讲稿第三页，共七十二页第一节第一节 外源基因的表达外源基因的表达二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系一、原核生物表达体系一、原核生物表达体系本讲稿第四页，共七十二页一、原核生物表达体系一、原核生物表达体系（二）原核表达载体具有的特点（二）原核表达载体具有的

2、特点（四）包涵体（四）包涵体（一）对外源目的基因的要求（一）对外源目的基因的要求（三）真核生物基因在原核细胞中的表达（三）真核生物基因在原核细胞中的表达本讲稿第五页，共七十二页一、原核生物表达体系一、原核生物表达体系（一）对外源目的基因的要求（一）对外源目的基因的要求 不应具有不应具有5 5端非编码区以及内含子结构端非编码区以及内含子结构 本讲稿第六页，共七十二页 选择标志选择标志 启动子启动子 翻译起始点和终止序列翻译起始点和终止序列 多克隆位点多克隆位点 （二）原核表达载体具有的特点（二）原核表达载体具有的特点一、原核生物表达体系一、原核生物表达体系本讲稿第七页，共七十二页一、原核生物表达

3、体系一、原核生物表达体系（三）真核生物基因在原核细胞中的表达三）真核生物基因在原核细胞中的表达1.1.非融合型表达蛋白非融合型表达蛋白2.2.融合型表达蛋白融合型表达蛋白3.3.分泌型表达蛋白分泌型表达蛋白本讲稿第八页，共七十二页 1.1.非融合型表达蛋白非融合型表达蛋白 优点：表达的非融合蛋白与天然状态下存在优点：表达的非融合蛋白与天然状态下存在 的蛋白在结构、功能以及免疫原性等的蛋白在结构、功能以及免疫原性等 方面基本一致方面基本一致 缺点：易被细菌蛋白酶破坏缺点：易被细菌蛋白酶破坏 （三）真核生物基因在原核细胞中的表达（三）真核生物基因在原核细胞中的表达 一、原核生物表达体系一、原核生物

4、表达体系本讲稿第九页，共七十二页常用的非融合型表达蛋白表达原核载体常用的非融合型表达蛋白表达原核载体pKK223-3pKK223-3抗氨苄青霉素基因抗氨苄青霉素基因 TacTac启动子启动子 SDSD序列序列 AUGAUG起始密码起始密码转录终止序列转录终止序列T1T1和和T2 T2 一、原核生物表达体系一、原核生物表达体系本讲稿第十页，共七十二页一、原核生物表达体系一、原核生物表达体系2.2.融合型表达蛋白融合型表达蛋白 优点：融合蛋白具有抗原优点：融合蛋白具有抗原性可以作为抗原，可以抵性可以作为抗原，可以抵御细菌蛋白酶的破坏御细菌蛋白酶的破坏 本讲稿第十一页，共七十二页一、原核生物表达体系

5、一、原核生物表达体系融合型表达系统主要有融合型表达系统主要有HisHis系统系统GSTGST系统系统金黄色葡萄球菌蛋白金黄色葡萄球菌蛋白A A系统系统-半乳糖苷酶系统半乳糖苷酶系统麦芽糖结合蛋白系统麦芽糖结合蛋白系统本讲稿第十二页，共七十二页一、原核生物表达体系一、原核生物表达体系3.3.分泌型表达蛋白分泌型表达蛋白 可防止大肠杆菌对表达可防止大肠杆菌对表达产物的降解，而且能够减产物的降解，而且能够减轻大肠杆菌代谢负荷和易轻大肠杆菌代谢负荷和易于恢复表达产物天然构象于恢复表达产物天然构象 本讲稿第十三页，共七十二页（四）包涵体（四）包涵体1.1.包涵体的形成包涵体的形成 2.2.包涵体的分离与

6、纯化包涵体的分离与纯化 3.3.包涵体的复性包涵体的复性 一、原核生物表达体系一、原核生物表达体系本讲稿第十四页，共七十二页二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系（一）酵母表达体系（一）酵母表达体系 （二）哺乳动物细胞表达体系（二）哺乳动物细胞表达体系本讲稿第十五页，共七十二页二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系（一）酵母表达体系（一）酵母表达体系 1.1.酵母表达载体酵母表达载体2.2.酵母表达外源性基因的形式酵母表达外源性基因的形式 本讲稿第十六页，共七十二页二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系（一）酵母表达体系（一）酵母表达体系 1 1、酵母表达载体、酵母表达载体 选择性标志选

7、择性标志 复制子复制子 启动子启动子上游活性序列上游活性序列 终止序列终止序列 蛋白结构域蛋白结构域 本讲稿第十七页，共七十二页二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系2.2.酵母表达外源性基因的形式酵母表达外源性基因的形式 非分泌型非分泌型 分泌型分泌型 本讲稿第十八页，共七十二页二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系（二）哺乳动物细胞表达体系（二）哺乳动物细胞表达体系1.1.哺乳动物细胞表达载体哺乳动物细胞表达载体2.2.常用的外源基因转染哺乳动物细胞的方式常用的外源基因转染哺乳动物细胞的方式3.3.哺乳动物细胞的瞬时表达和稳定表达系统哺乳动物细胞的瞬时表达和稳定表达系统本讲稿第十九页，

8、共七十二页（二）哺乳动物细胞表达体系（二）哺乳动物细胞表达体系 1.1.哺乳动物细胞表达载体哺乳动物细胞表达载体 (1)(1)原核原核DNADNA序列序列 (2)(2)启动子启动子 (3)(3)增强子增强子 (4)(4)剪接信号剪接信号 (5)(5)遗传标记遗传标记 (6)(6)终止信号和多聚腺苷化的信号终止信号和多聚腺苷化的信号二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系本讲稿第二十页，共七十二页二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系细胞系细胞系DNADNA转染方式转染方式最初的应用最初的应用CV-1CV-1SV40SV40病毒感染病毒感染表达野生型、突变蛋白表达野生型、突变蛋白CV-1/29

9、3CV-1/293腺病毒感染腺病毒感染表达野生型、突变蛋白表达野生型、突变蛋白COSCOS瞬时瞬时DEAE-DEAE-葡聚糖葡聚糖在哺乳类细胞中表达，快速鉴定在哺乳类细胞中表达，快速鉴定cDNAcDNA克隆，表达突变蛋白。克隆，表达突变蛋白。NIH3T3NIH3T3逆转录病毒感染逆转录病毒感染转基因动物、在不同类型细胞中转基因动物、在不同类型细胞中表达表达鼠成纤维细胞鼠成纤维细胞MOPMOP瞬时瞬时DEAE-DEAE-葡聚糖葡聚糖快速鉴定快速鉴定cDNAcDNA克隆表达突变蛋白克隆表达突变蛋白CHO-DHFRCHO-DHFR稳定稳定DHFR+DHFR+转染转染用氨甲喋呤扩增用氨甲喋呤扩增高效稳

10、定表达高效稳定表达灵长灵长/啮齿类啮齿类痘病毒痘病毒疫苗疫苗神经元细胞神经元细胞EBEB病毒载体病毒载体HSVHSV病毒载体病毒载体克隆表达克隆表达基因转移基因转移2.2.常用的外源基因转染哺乳动物细胞的方式常用的外源基因转染哺乳动物细胞的方式本讲稿第二十一页，共七十二页 3.3.哺乳动物细胞的瞬时表达哺乳动物细胞的瞬时表达 和稳定表达系统和稳定表达系统（1 1）COSCOS细胞瞬时表达系统细胞瞬时表达系统 （2 2）CHOCHO细胞稳定表达系统细胞稳定表达系统 二、真核生物表达体系二、真核生物表达体系本讲稿第二十二页，共七十二页第二节第二节 表达产物的分离、纯化与鉴定表达产物的分离、纯化与鉴

11、定本讲稿第二十三页，共七十二页第二节第二节 表达产物的分离、纯化与鉴定表达产物的分离、纯化与鉴定二、酵母重组表达蛋白的分离与纯化二、酵母重组表达蛋白的分离与纯化三、表达产物的鉴定三、表达产物的鉴定一、大肠杆菌重组表达蛋白的分离与纯化一、大肠杆菌重组表达蛋白的分离与纯化本讲稿第二十四页，共七十二页一、大肠杆菌重组表达蛋白的分离与纯化一、大肠杆菌重组表达蛋白的分离与纯化 1.1.粗制品粗制品的分离纯化的分离纯化 2.2.精制品的分离纯化精制品的分离纯化 本讲稿第二十五页，共七十二页二、酵母重组表达蛋白的分离与纯化二、酵母重组表达蛋白的分离与纯化 1.1.酵母细胞内表达的重组蛋白质的分离纯化酵母细胞

12、内表达的重组蛋白质的分离纯化 2.2.酵母表达分泌型重组蛋白的分离与纯化酵母表达分泌型重组蛋白的分离与纯化 本讲稿第二十六页，共七十二页三、表达产物的鉴定三、表达产物的鉴定1.1.蛋白质样品的制备蛋白质样品的制备 2.SDS2.SDS聚丙烯耽胺凝胶电泳聚丙烯耽胺凝胶电泳 3.3.蛋白质的电转移蛋白质的电转移 本讲稿第二十七页，共七十二页四、表达产物的鉴定四、表达产物的鉴定 4.4.靶蛋白的免疫学检测靶蛋白的免疫学检测封闭封闭 靶蛋白与第一抗体反应靶蛋白与第一抗体反应 与第二抗体反应与第二抗体反应 显色显色 本讲稿第二十八页，共七十二页四、表达产物的鉴定四、表达产物的鉴定本讲稿第二十九页，共七十

13、二页四、表达产物的鉴定四、表达产物的鉴定本讲稿第三十页，共七十二页第三节第三节 基因表达干扰技术基因表达干扰技术本讲稿第三十一页，共七十二页第三节第三节 基因表达干扰技术基因表达干扰技术二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶三、小干扰三、小干扰RNA四、微四、微RNA一、反义核酸技术一、反义核酸技术本讲稿第三十二页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术 （二）反义（二）反义RNARNA技术技术 （三）反义核酸技术的应用（三）反义核酸技术的应用（一）反义寡核苷酸技术（一）反义寡核苷酸技术本讲稿第三十三页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术（一）反义寡核苷酸技术（一）反义寡核苷酸技术1

14、.1.反义寡核苷酸的作用机制反义寡核苷酸的作用机制2.2.反义寡核苷酸的设计与合成反义寡核苷酸的设计与合成 3.3.反义寡核苷酸的修饰反义寡核苷酸的修饰 4.4.反义寡核苷酸的给药途径反义寡核苷酸的给药途径 本讲稿第三十四页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术（一）反义寡核苷酸技术（一）反义寡核苷酸技术 1.1.反义寡核苷酸的作用机制反义寡核苷酸的作用机制 (1)(1)抑制抑制mRNAmRNA的翻译的翻译 (2)(2)抑制复制或转录抑制复制或转录 (3)(3)抑制蛋白质的加工、修饰及功能表达抑制蛋白质的加工、修饰及功能表达本讲稿第三十五页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术2

15、2、反义寡核苷酸的设计与合成、反义寡核苷酸的设计与合成 1 1）设计）设计 计算机软件预测计算机软件预测RNARNA的二级结构的二级结构 利用寡核苷酸随机文库鉴别利用寡核苷酸随机文库鉴别mRNAmRNA上的上的RNaseHRNaseH切割切割位点、寡核苷酸芯片的扫描分析、随机寡核苷酸库结合位点、寡核苷酸芯片的扫描分析、随机寡核苷酸库结合逆转录分析法等对自然折叠的逆转录分析法等对自然折叠的mRNAmRNA进行设计进行设计 本讲稿第三十六页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术 2 2）合成）合成 长度一般为长度一般为15152525个核苷酸个核苷酸 G-C G-C含量为含量为60%60%6

16、5%65%本讲稿第三十七页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术 3.3.反义寡核苷酸的修饰反义寡核苷酸的修饰 最常见的是对最常见的是对ASONASON的骨架中的磷酸基团进行修饰的骨架中的磷酸基团进行修饰 （1 1）硫原子代替磷酸二酯中的氧原子）硫原子代替磷酸二酯中的氧原子 （2 2）甲基修饰磷酸骨架）甲基修饰磷酸骨架 （3 3）聚酰胺键代替磷酸骨架）聚酰胺键代替磷酸骨架本讲稿第三十八页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术 4.4.反义寡核苷酸的给药途径反义寡核苷酸的给药途径 （1 1）直接作用于培养细胞）直接作用于培养细胞（2 2）结合）结合L-L-多聚赖氨酸或脂质体进入细胞多

17、聚赖氨酸或脂质体进入细胞（3 3）动物模型则可通过静脉、腹腔、皮下、肌）动物模型则可通过静脉、腹腔、皮下、肌 肉、瘤体内肉、瘤体内注射或气雾吸入等途径注射或气雾吸入等途径 本讲稿第三十九页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术（二）反义（二）反义RNARNA技术技术1.1.反义反义RNARNA的作用机制的作用机制 2.2.反义反义RNARNA的设计的设计 本讲稿第四十页，共七十二页（二）反义（二）反义RNARNA技术技术1.1.反义反义RNARNA的作用机制的作用机制 (1)(1)抑制抑制DNADNA复制复制 (2)(2)阻止目的阻止目的mRNAmRNA的成熟及向胞浆内转运的成熟及向胞浆

18、内转运 (3)(3)抑制抑制mRNAmRNA翻译翻译(4)(4)使使mRNAmRNA更易被核酸酶识别而降解更易被核酸酶识别而降解一、反义核酸技术一、反义核酸技术本讲稿第四十一页，共七十二页一、反义核酸技术一、反义核酸技术 2.2.反义反义RNARNA的设计的设计 与与ASONASON相比，反义相比，反义RNARNA的设计较为简单的设计较为简单本讲稿第四十二页，共七十二页（三）反义核酸技术的应用（三）反义核酸技术的应用需要完善或解决的问题：需要完善或解决的问题：防止被核酸酶降解防止被核酸酶降解 需要进一步了解寡核苷酸进入细胞的确切机制需要进一步了解寡核苷酸进入细胞的确切机制 很多寡核苷酸易发生序

19、列特异性和非序列特异性的很多寡核苷酸易发生序列特异性和非序列特异性的结合结合 ASON ASON是否会影响正常细胞的基因表达是否会影响正常细胞的基因表达 用载体导入反义用载体导入反义RNARNA在体内表达时，存在安全性和转染效在体内表达时，存在安全性和转染效率不高等问题率不高等问题 一、反义核酸技术一、反义核酸技术本讲稿第四十三页，共七十二页二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶（一）核酶（一）核酶（二）脱氧核酶（二）脱氧核酶本讲稿第四十四页，共七十二页二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶（一）核酶（一）核酶1.1.核酶的分类核酶的分类 2.2.核酶的结构核酶的结构3.3.核酶的设计与修饰核酶的

20、设计与修饰 4.4.核酶转移方法核酶转移方法5.5.核酶的应用核酶的应用本讲稿第四十五页，共七十二页二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶（一）核酶（一）核酶 1.1.核酶的分类核酶的分类 （1 1）大分子核酶：）大分子核酶：第第类内含子、第类内含子、第类内含子、核糖核酸酶类内含子、核糖核酸酶P P （2 2）小分子核酶）小分子核酶 ：锤头状锤头状RNARNA、发夹形、发夹形RNARNA、肝炎、肝炎D D病毒病毒RNARNA和和 neurospora Varkud satellite neurospora Varkud satellite核酶核酶 本讲稿第四十六页，共七十二页 2.2.核酶的结构

21、核酶的结构（1 1）锤头状核酶：）锤头状核酶：二级结构有三个二级结构有三个 螺旋环结构区和螺旋环结构区和 一个催化中心一个催化中心 二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶本讲稿第四十七页，共七十二页（2 2）发夹形核酶：）发夹形核酶：每个结构域由每个结构域由 螺旋螺旋-环环-螺旋组成螺旋组成 二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶本讲稿第四十八页，共七十二页二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶（二）脱氧核酶（二）脱氧核酶 1.1.脱氧核酶的结构种类及特征脱氧核酶的结构种类及特征 2.2.脱氧核酶的催化特性脱氧核酶的催化特性 3.3.设计合成脱氧核酶的原则设计合成脱氧核酶的原则 4.4.脱氧核酶的应

22、用脱氧核酶的应用本讲稿第四十九页，共七十二页二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶（二）脱氧核酶（二）脱氧核酶 1.1.脱氧核酶的结构种类及特征脱氧核酶的结构种类及特征 （1 1）10-2310-23型脱氧核酶：型脱氧核酶：本讲稿第五十页，共七十二页二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶 （2 2）8-178-17型脱氧核酶：型脱氧核酶：本讲稿第五十一页，共七十二页二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶2.2.脱氧核酶的催化特性脱氧核酶的催化特性 （1 1）RNARNA切割活性切割活性 （2 2）DNADNA连接酶活性连接酶活性 （3 3）卟啉金属化酶和过氧化酶活性）卟啉金属化酶和过氧化酶活性 （4

23、 4）DNADNA切割活性切割活性 （5 5）N-N-糖基化酶活性糖基化酶活性 （6 6）DNADNA激酶活性激酶活性 （7 7）DNADNA戴帽活性戴帽活性 本讲稿第五十二页，共七十二页二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶3.3.设计合成脱氧核酶的原则设计合成脱氧核酶的原则 （1 1）总核苷酸数不超过）总核苷酸数不超过5050 （2 2）催化效率不低于核酶）催化效率不低于核酶 （3 3）具有广泛的）具有广泛的RNARNA切割功能切割功能 （4 4）能通过碱基配对与底物结合）能通过碱基配对与底物结合 （5 5）具有可重复性）具有可重复性本讲稿第五十三页，共七十二页4.4.脱氧核酶的应用脱氧核酶

24、的应用 为治疗为治疗RNARNA病毒感染的疾病提供了一条新途径病毒感染的疾病提供了一条新途径 二、核酶与脱氧核酶二、核酶与脱氧核酶本讲稿第五十四页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA （二）（二）RNAiRNAi的作用机制的作用机制 （三）（三）siRNA的设计原则的设计原则 （四）（四）siRNA的制备方法的制备方法（六）（六）RNAi沉默效果的检测沉默效果的检测 （一）一般研究路线（一）一般研究路线（七）（七）RNAiRNAi的应用的应用（五）（五）siRNAsiRNA的导入的导入本讲稿第五十五页，共七十二页（一）一般研究路线（一）一般研究路线三、小干扰三、小干扰RNARNA本讲稿

25、第五十六页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA（二）（二）RNAiRNAi的作用机制的作用机制 1.1.起始阶段起始阶段 2.2.效应阶段效应阶段 3.3.倍增阶段倍增阶段 本讲稿第五十七页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA本讲稿第五十八页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA本讲稿第五十九页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA（三）（三）siRNAsiRNA的设计原则的设计原则 1.siRNA 1.siRNA中中G+CG+C碱基含量碱基含量 2.siRNA 2.siRNA作用位点作用位点 3.siRNA 3.siRNA序列序列 4.siRNA 4.siRNA碱

26、基数碱基数 5.5.环碱基数环碱基数 6.6.对照系统对照系统本讲稿第六十页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA（四）（四）siRNAsiRNA的制备方法的制备方法 1.1.化学合成法化学合成法 2.2.体外转录法体外转录法 3.RNase 3.RNase 消化法消化法 4.siRNA 4.siRNA表达载体法表达载体法 5.siRNA 5.siRNA表达框架法表达框架法 本讲稿第六十一页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA本讲稿第六十二页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA本讲稿第六十三页，共七十二页siRNAsiRNA的合成方式及特点的合成方式及特点化学合成法化学合

27、成法体外转录法体外转录法RNase RNase 消化消化法法siRNAsiRNA表达载体法表达载体法siRNAsiRNA表达框架法表达框架法核酸特征核酸特征212123nt23nt双双链链RNARNA29nt29nt双链双链DNADNAT T7 7启动子后启动子后200200800 bp800 bp的转录模板的转录模板555560bp60bp双链双链DNADNA50bp50bp双链双链DNADNA制备时间制备时间4 4天天制备制备DNADNA双链后双链后2424小时小时制备转录模板制备转录模板后后2424小时小时制备双链制备双链DNADNA后后5 5天天制备制备DNADNA后约后约6 6小小时

28、时转染时间转染时间短短中等中等中等中等长长中等中等测序测序需要需要需要需要不必不必需要需要需要需要标志标志可以可以可以可以可以可以不可不可不可不可转染难易程度转染难易程度容易容易容易容易容易容易非常容易非常容易非常容易非常容易大规模制备大规模制备可以可以有限有限有限有限可以可以有限有限抗性筛选抗性筛选不可不可不可不可不可不可可以可以不可不可抑制作用时间抑制作用时间短短短短短短长长短短费用费用较高较高中等中等较低较低中等中等中等中等三、小干扰三、小干扰RNARNA本讲稿第六十四页，共七十二页三、小干扰三、小干扰RNARNA（五）（五）siRNAsiRNA的导入的导入 1.1.脂质体或电穿孔脂质体

29、或电穿孔 2.2.病毒携带病毒携带 3.3.细胞穿透肽细胞穿透肽 （六）（六）RNAiRNAi沉默效果的检测沉默效果的检测 （七）（七）RNAiRNAi的应用的应用本讲稿第六十五页，共七十二页四、微四、微RNARNA（二）（二）miRNAmiRNA的作用机制的作用机制（三）（三）siRNAsiRNA与与microRNAmicroRNA的区别的区别（四）（四）miRNAmiRNA的生物学功能的生物学功能（一）（一）miRNAmiRNA的命名的命名本讲稿第六十六页，共七十二页四、微四、微RNARNAmiR-#miR-#（#代表数字）表示代表数字）表示miRNAmiRNAmir-#mir-#（#代表

30、数字）表示相应的编码基因代表数字）表示相应的编码基因 （一）（一）miRNA miRNA的命名的命名本讲稿第六十七页，共七十二页四、微四、微RNARNA（二）（二）miRNAmiRNA的作用机制的作用机制 1.1.起始阶段起始阶段 2.2.成熟阶段成熟阶段 3.3.功能阶段功能阶段 本讲稿第六十八页，共七十二页四、微四、微RNARNA本讲稿第六十九页，共七十二页四、微四、微RNARNA（三）（三）siRNAsiRNA与与microRNAmicroRNA的区别的区别 共同点共同点 由由2222个左右的核苷酸组成个左右的核苷酸组成 是是DicerDicer酶的产物酶的产物 需需ArgonateAr

31、gonate家族蛋白的存在家族蛋白的存在 与与RISCRISC形成复合物起干扰、调节作用形成复合物起干扰、调节作用 可在转录后、翻译水平上干扰靶可在转录后、翻译水平上干扰靶mRNA mRNA 本讲稿第七十页，共七十二页siRNAsiRNA与与microRNAmicroRNA的不同的不同siRNAsiRNAmicroRNAmicroRNA外源性外源性内源性内源性由长由长dsRNAdsRNA经经DicerDicer酶切割得到酶切割得到由由pre-miRNApre-miRNA经经DicerDicer酶切割而来酶切割而来双链双链单链单链与靶与靶mRNAmRNA完全互补配对完全互补配对与靶与靶mRNAm

32、RNA并不完全互补并不完全互补AGO2AGO2蛋白蛋白AGO1AGO1蛋白蛋白降解降解mRNAmRNA而抑制蛋白质翻译而抑制蛋白质翻译 阻止阻止mRNAmRNA的翻译而不降解靶的翻译而不降解靶mRNAmRNA抑制转座子活性和病毒感染抑制转座子活性和病毒感染还可作为合成蛋白质的模板；表达还可作为合成蛋白质的模板；表达具有时序性、保守性和组织特异性具有时序性、保守性和组织特异性四、微四、微RNARNA本讲稿第七十一页，共七十二页四、微四、微RNARNA（四）（四）miRNAmiRNA的生物学功能的生物学功能 miRNA miRNA与生物体的阶段性发育密切相关，可以使与生物体的阶段性发育密切相关，可以使特异基因在翻译水平被抑制特异基因在翻译水平被抑制 本讲稿第七十二页，共七十二页