【教学课件】第二十章病原性真菌.ppt

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1、第二十章 病原性真菌 第一节 浅部感染真菌 浅部感染真菌包括表面感染真菌、浅部感染真菌包括表面感染真菌、皮肤癣真菌和皮下组织感染真菌。皮肤癣真菌和皮下组织感染真菌。一、表面感染真菌一、表面感染真菌 主主要要寄寄居居于于人人体体皮皮肤肤和和毛毛干干的的最最表表层层，在在我我国国主主要要是是糠糠秕秕马马拉拉色色菌菌，为为条条件件致致病病菌菌，是是一一种种嗜嗜脂脂性性酵酵母母样样菌菌。它它侵侵犯犯皮皮肤肤角角质质层层引引起起一一种种慢慢性性、无无症症状状的的浅浅部部真真菌菌病病，即即汗汗斑斑，无无明明显显炎炎症症反反应应。主主要要是是色色素素异异常常性性改改变变，由由淡淡变变深深，而而老老斑斑疹疹色

2、色素素由由深深转转浅浅，成成为为白白斑斑。还还可可引引起起毛毛囊囊炎炎、脂脂溢溢性皮炎等。性皮炎等。微生物检验微生物检验 1直直接接显显微微镜镜检检查查 可可采采用用透透明明胶胶带带粘粘贴贴取取材材法法，将将透透明明胶胶带带直直接接贴贴于于皮皮肤肤表表面面，数数分分钟钟后后揭揭下下，直直接接贴贴于于载载玻玻片片上上镜镜检检或或经经棉棉蓝蓝染染色色或或革革兰兰染染色色后后镜镜检检。可可见见孢孢子子和和菌菌丝丝。孢孢子子为为圆圆形形或或卵卵形形，厚厚壁壁，芽芽颈颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈腊肠样。较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈腊肠样。2分分离离培培养养与与鉴鉴定定 将将鳞鳞屑屑接接种种于于含含

3、菜菜籽籽油油的的培培养养基基，37孵孵育育3d后后，在在培培养养基基上上开开始始生生长长，20d左左右右菌菌落落约约lOmm乳乳酪酪色色酵酵母母型型菌菌落落，表表面面光光滑滑。取取菌菌落落作作涂涂片片染染色色镜镜检，观察真菌形态。检，观察真菌形态。二、皮肤癣真菌二、皮肤癣真菌n寄寄生生于于皮皮肤肤角角蛋蛋白白组组织织的的浅浅部部真真菌菌称称为为皮皮肤肤癣癣菌菌，又又称称皮皮肤肤丝丝状状菌菌。约约有有4545种种，一一部分仅感染动物，对人致病的约有部分仅感染动物，对人致病的约有2020余种。余种。n无无性性阶阶段段属属于于半半知知菌菌门门，而而有有性性型型则则属属于于子囊菌门。子囊菌门。n分分为

4、为毛毛癣癣菌菌属属、表表皮皮癣癣菌菌属属和和小小孢孢子子癣癣菌菌属等三个菌属。属等三个菌属。(一一)临床意义临床意义皮肤癣菌易侵犯人体皮肤、指甲、毛发的皮肤癣菌易侵犯人体皮肤、指甲、毛发的角蛋白组织并生长繁殖致病，是因为其能角蛋白组织并生长繁殖致病，是因为其能产生角质溶解酶。皮肤癣菌是接触传染，产生角质溶解酶。皮肤癣菌是接触传染，只要反复接触患者均有可能被感染。在同只要反复接触患者均有可能被感染。在同一病人有不同的临床表现，如毛癣菌属可一病人有不同的临床表现，如毛癣菌属可引起发癣、体癣、甲癣；而相同部位的病引起发癣、体癣、甲癣；而相同部位的病可由不同皮肤癣菌引起，如甲癣可由不同皮肤癣菌引起，如

5、甲癣(俗称灰指俗称灰指甲甲)可由毛癣菌属和表皮癣菌属引起可由毛癣菌属和表皮癣菌属引起 。1毛癣菌属毛癣菌属有有20种，其中有种，其中有13种对人致病。常见的有红种对人致病。常见的有红色毛癣菌、紫色毛癣菌、须毛癣菌、断发毛色毛癣菌、紫色毛癣菌、须毛癣菌、断发毛癣菌和许兰毛癣菌等。毛癣菌感染的皮屑、癣菌和许兰毛癣菌等。毛癣菌感染的皮屑、甲屑或病发甲屑或病发10KOH溶液消化后镜检，可见溶液消化后镜检，可见有菌丝，病发内、外可见菌丝或孢子。在沙有菌丝，病发内、外可见菌丝或孢子。在沙氏培养基上可白、红、橙或棕色，表面呈绒氏培养基上可白、红、橙或棕色，表面呈绒毛状、粉末状或蜡状菌落。镜下可见梳状、毛状、

6、粉末状或蜡状菌落。镜下可见梳状、球拍、螺旋或鹿角菌丝；葡萄状或梨状小分球拍、螺旋或鹿角菌丝；葡萄状或梨状小分生孢子，细长薄壁大分生孢子生孢子，细长薄壁大分生孢子。2.表皮癣菌属表皮癣菌属n对人致病的只有絮状表皮癣菌对人致病的只有絮状表皮癣菌,感染的皮感染的皮屑和甲屑经屑和甲屑经1010KOHKOH液消化后镜检，可见分液消化后镜检，可见分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子。枝断裂的有隔菌丝，少见孢子。n在沙氏培养基上培养后，菌落初为白色鹅在沙氏培养基上培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见毛状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见球拍状菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分球拍状菌丝、卵圆形或巨大

7、棒状薄壁大分生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中可见厚膜孢子。可见厚膜孢子。3小孢子癣菌属小孢子癣菌属有有15种，对人致病的有种，对人致病的有8种，常见的有铁锈色种，常见的有铁锈色小孢子菌、石膏样小孢子菌和狗小孢子菌等。小孢子菌、石膏样小孢子菌和狗小孢子菌等。小孢子菌感染的皮屑和毛发经小孢子菌感染的皮屑和毛发经10KOH处理处理后镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中后镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢子镶嵌的鞘包裹着发干。在沙氏培呈现小孢子镶嵌的鞘包裹着发干。在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或黄褐色、粉末或养基中可见白色、棕黄色或黄褐色、粉末或绒毛状

8、菌落。镜下可见梳状、球拍状或结节绒毛状菌落。镜下可见梳状、球拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚壁梭形状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚壁梭形(纺锤纺锤形形)大分生孢子。大分生孢子。(三三)微生物检验微生物检验1标标本本采采集集 采采集集新新发发生生的的皮皮肤肤损损害害边边缘缘皮皮屑屑；指指甲甲近近尖尖端端下下面面甲甲屑屑；拔拔取取无无光光泽泽病病发发，黄黄癣癣采采集集黄黄癣癣痂痂。将将标标本本盛盛于于清洁纸袋，鳞屑要用黑纸包好。清洁纸袋，鳞屑要用黑纸包好。2直直接接显显微微镜镜检检查查 皮皮屑屑标标本本用用10KOH液液制制成成湿湿片片，指指甲甲用用25KOH或或25NaOH含含 5甘甘油油处处

9、理理。镜镜检检可可见见透透明明、有有隔隔，常常有有分分支支的的菌菌丝丝及及成成链链的的关关节节孢孢子子，三三个个癣癣菌菌属属难难以以鉴鉴别别。毛毛癣癣菌菌属属感感染染病病发发有有发发外外型型和和发发内内型型孢孢子子，而而小小孢孢子子菌菌属属只只有发外型孢子。有发外型孢子。3分离培养与鉴定分离培养与鉴定 皮屑、甲屑和病发标本，先用皮屑、甲屑和病发标本，先用70乙醇或乙醇或在青、链霉素混合液内处理在青、链霉素混合液内处理 5min，再用再用生理盐水洗生理盐水洗3次，然后接种沙氏琼脂斜面，次，然后接种沙氏琼脂斜面，25培养，每周观察菌落形态及颜色，直培养，每周观察菌落形态及颜色，直至第四周。挑取菌落

10、镜检菌丝和孢子，也至第四周。挑取菌落镜检菌丝和孢子，也可作棉兰染色后镜检或作小培养后镜检。可作棉兰染色后镜检或作小培养后镜检。必要时作其他鉴定如毛发穿孔试验、脲酶必要时作其他鉴定如毛发穿孔试验、脲酶试验和特殊营养需要试验等来鉴定皮肤癣试验和特殊营养需要试验等来鉴定皮肤癣菌。菌。毛发穿孔试验毛发穿孔试验是将头发发剪成是将头发发剪成lcm长，置于已加入长，置于已加入25ml蒸馏水和蒸馏水和23滴滴10酵母浸膏液的平皿内，酵母浸膏液的平皿内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，置置25孵育四周，每周检查一次，每次取孵育四周，每周检查一次，每次取数根毛发置载玻片

11、上，经乳酚棉蓝染色后，数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后，置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者为阳性，否则为阴性。为阳性，否则为阴性。4 4药物敏感试验药物敏感试验皮肤癣菌对灰黄霉素、伊曲康唑等皮肤癣菌对灰黄霉素、伊曲康唑等药物敏感。药物敏感。三、皮下组织感染真菌三、皮下组织感染真菌主要有着色真菌和孢子丝菌。一般经外伤主要有着色真菌和孢子丝菌。一般经外伤感染后，在局部皮下组织繁殖，并缓慢向感染后，在局部皮下组织繁殖，并缓慢向周围组织扩散，还可经淋巴、血液向全身周围组织扩散，还可经淋巴、血液向全身扩散。扩散。(一一)着色真菌着色真菌是自然界的腐生菌，经破损皮

12、肤而感染，是自然界的腐生菌，经破损皮肤而感染，引起病损皮肤变黑，引起着色真菌病。主引起病损皮肤变黑，引起着色真菌病。主要真菌有卡氏枝孢霉、裴氏着色真菌、紧要真菌有卡氏枝孢霉、裴氏着色真菌、紧密着色真菌和疣状瓶霉。密着色真菌和疣状瓶霉。1临床意义临床意义常在患者外伤后感染，多发生四肢暴露部常在患者外伤后感染，多发生四肢暴露部位，开始为小丘疹，表面干燥或湿润，有位，开始为小丘疹，表面干燥或湿润，有鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，呈疣状鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，呈疣状增殖。皮损反复发生，且长期不愈，可致增殖。皮损反复发生，且长期不愈，可致畸致残。免疫功能低下时可侵犯中枢神经畸致残。免疫功能低下时可

13、侵犯中枢神经系统或经血流扩散。病理变化主要为角化系统或经血流扩散。病理变化主要为角化过度及角化不全。过度及角化不全。2微生物特性微生物特性 着色真菌菌丝短粗分隔，呈棕色，有三型着色真菌菌丝短粗分隔，呈棕色，有三型分生孢子：分生孢子：树枝型：菌丝末端有分生孢树枝型：菌丝末端有分生孢子柄，柄端分叉长出孢子；子柄，柄端分叉长出孢子；剑顶型：围剑顶型：围绕菌丝末端或菌丝横隔处长有一圈分生孢绕菌丝末端或菌丝横隔处长有一圈分生孢子；子；花瓶型：在菌丝分隔处长出花瓶状花瓶型：在菌丝分隔处长出花瓶状的分生孢子柄，在瓶口长出成丛的小分生的分生孢子柄，在瓶口长出成丛的小分生孢子。在葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上培养孢子

14、。在葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上培养1 1周，出现灰黑色菌落，随之菌落表面出现周，出现灰黑色菌落，随之菌落表面出现绒毛状或天鹅绒状气生菌丝，菌落色素加绒毛状或天鹅绒状气生菌丝，菌落色素加深。深。3.微生物检验微生物检验(1)直接显微镜检查直接显微镜检查 皮屑用皮屑用1020KOH溶液加热处理后镜溶液加热处理后镜检，可见单个或成群厚壁孢子，有横隔或中检，可见单个或成群厚壁孢子，有横隔或中间十字分隔。取乳头状增殖的病损挤压出的间十字分隔。取乳头状增殖的病损挤压出的分泌物镜检阳性率最高。脓汁、脑脊液或活分泌物镜检阳性率最高。脓汁、脑脊液或活组织也可做镜检。镜检结果结合临床可确定组织也可做镜检。镜检结果结

15、合临床可确定诊断。诊断。(2)分离培养与鉴定分离培养与鉴定1)1)将将标标本本接接种种沙沙氏氏培培养养基基，生生长长缓缓慢慢，菌菌落落从从灰灰黑黑色色至至黑黑色色，有有气气生生菌菌丝丝。菌菌落落涂涂片片镜镜检检可可见见三三种种类类型型的的分分生生孢孢子子，有有鉴鉴定定价价值。值。2)2)明胶液化试验：致病性菌株均不液化明胶。明胶液化试验：致病性菌株均不液化明胶。3)3)其其他他生生化化反反应应：不不能能水水解解淀淀粉粉，不不凝凝固固牛牛奶，能同化硝酸盐，需维生素奶，能同化硝酸盐，需维生素B1B1。4 4药物敏感试验药物敏感试验对对5-5-FCFC、伊曲康唑、氟康唑敏感，伊曲康唑、氟康唑敏感，但

16、易产生耐药性。但易产生耐药性。(二二)孢孢子子丝菌丝菌n孢孢子子丝丝菌菌属属于于腐腐生生性性真真菌菌，广广泛泛分分布布于于土土壤壤、尘尘埃埃、木木材材上上。主主要要病病原原真真菌菌是是申克孢子丝菌申克孢子丝菌。n孢孢子子丝丝菌菌病病是是人人兽兽共共患患性性疾疾病病，传传染染源源是是人人和和动动物物，传传播播途途径径主主要要经经破破损损皮皮肤肤接接触触感感染染。经经微微小小创创口口侵侵入入皮皮肤肤后后，创创口口局局部部出出现现炎炎症症性性小小结结，增增大大形形成成炎炎症症性性斑斑块块或或增增生生性性糜糜烂烂。可可沿沿淋淋巴巴管管分分布布，引引起起亚亚急急性性和和慢慢性性肉肉芽芽肿肿，称称为为孢孢

17、子子丝丝菌菌性性下下疳疳。经经呼呼吸吸道道引引起起肺肺孢孢子子丝丝菌菌病病，并并可可沿沿血血行行播散至其他器官如骨、眼等。播散至其他器官如骨、眼等。申克孢子丝菌是二相性真菌。在自然环申克孢子丝菌是二相性真菌。在自然环境中或沙氏培养基上境中或沙氏培养基上25252828培养时呈霉培养时呈霉菌型菌型(菌丝相菌丝相)，而在组织内或在营养丰富的，而在组织内或在营养丰富的培养基上培养时为酵母型培养基上培养时为酵母型(组织相组织相)。菌丝相。菌丝相可见菌丝两侧伸出细长分生孢子柄，末端长可见菌丝两侧伸出细长分生孢子柄，末端长出成群梨状小分生孢子。组织相则可见卵圆出成群梨状小分生孢子。组织相则可见卵圆形小体，

18、形似雪茄烟状，常位于中性粒细胞形小体，形似雪茄烟状，常位于中性粒细胞或单核细胞内。在沙氏培养基上形成黑褐皱或单核细胞内。在沙氏培养基上形成黑褐皱褶薄膜菌落，而在胱氨酸葡萄糖血琼脂培养褶薄膜菌落，而在胱氨酸葡萄糖血琼脂培养基上则形成灰黄色柔软的类酵母型菌落。基上则形成灰黄色柔软的类酵母型菌落。3微生物检验微生物检验(1)直直接接昆昆微微镜镜检检查查：取取患患者者脓脓、痰痰、血血、痂痂皮皮或或病病理理组组织织块块等等作作涂涂片片或或切切片片，革革兰兰或或 PAS染染色色，在在巨巨噬噬细细胞胞或或中中性性粒粒细细胞胞内内、外外，可可见见G+或或PAS阳阳性性(紫紫红红色色)卵圆形的孢子。卵圆形的孢子

19、。(2)分分离离培培养养与与鉴鉴定定：将将标标本本接接种种于于沙沙氏氏培培养养基基上上25培培养养，2-3d开开始始生生长长，初初为为白白色色湿湿润润的的酵酵母母型型菌菌落落，以以后后变变为为淡淡咖咖啡啡色色至至深深褐褐色色。涂涂片片染染色色镜镜检检，可可见见典典型型的的菌菌丝丝相相的的申申克克孢孢子子丝丝菌菌。接接种种于于胱胱氨氨酸酸葡葡萄萄糖糖血血琼琼脂脂培培养养基基上上，37培培养养2-3d，可可形形成成乳乳白白色色或或淡淡褐褐色色酵酵母母型型菌菌落落。镜镜下下可可见见G+卵圆形的孢子。卵圆形的孢子。(3)药物敏感试验：对碘化钾、伊曲康唑、特比药物敏感试验：对碘化钾、伊曲康唑、特比 萘芬

20、等药物敏感。萘芬等药物敏感。(4)抗体检测：取患者血清做凝集试验，若抗体抗体检测：取患者血清做凝集试验，若抗体 效价大于效价大于l：320有诊断意义。有诊断意义。(5)动动物物接接种种：将将标标本本接接种种小小白白鼠鼠腹腹腔腔内内，2周周内内 引起腹腔炎，取脓汁作涂片染色镜枪，可见引起腹腔炎，取脓汁作涂片染色镜枪，可见 革兰阳性、卵圆形或梭形小体。革兰阳性、卵圆形或梭形小体。第二节 深部感染真菌 深深部部感感染染真真菌菌是是指指能能侵侵袭袭深深部部组组织织和和内内脏脏及及全全身身的的真真菌菌，主主要要有有假假丝丝酵酵母母菌菌、隐隐球球菌菌、曲曲霉霉、毛毛霉霉、组组织织胞胞浆浆菌菌和和卡卡氏氏肺

21、肺孢孢菌菌等等，其中以隐球菌感染较常见。其中以隐球菌感染较常见。组组织织胞胞浆浆菌菌为为二二相相性性真真菌菌，假假丝丝酵酵母母菌菌、曲曲霉霉、毛毛霉霉和和卡卡氏氏肺肺孢孢菌菌等等为为条条件件致致病病性性真真菌菌，只有在一定的条件下才引起机体致病。只有在一定的条件下才引起机体致病。一、假丝酵母菌一、假丝酵母菌俗称念珠菌，有俗称念珠菌，有8181个种，其中有个种，其中有1111种对人种对人有致病性：白假丝酵母菌、为最常见的致有致病性：白假丝酵母菌、为最常见的致病菌。此外，热带假丝酵母菌、克柔假丝病菌。此外，热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌也较多引起疾病。酵母菌和光滑假丝酵母菌也较多引

22、起疾病。(一一)白假丝酵母菌白假丝酵母菌 通通常常存存在在于于人人的的口口腔腔、上上呼呼吸吸道道、肠肠道道和和阴阴道道粘粘膜膜上上，当当机机体体发发生生菌菌群群失失调调或或抵抵抗抗力力降降低低时时，可可引引起起念念珠珠菌菌病病。如如婴婴儿儿的的鹅鹅口口疮疮、假假丝丝酵酵母母菌菌性性阴阴道道炎炎、龟龟头头炎炎、肠肠炎炎、肺肺炎炎、膀膀胱胱炎炎、肾肾孟孟肾肾炎炎和和中中枢枢神神经经系系统统白白假假丝丝酵酵母母菌菌病病，如如脑脑膜膜炎炎、脑脑膜膜脑脑炎炎、脑脑脓脓肿肿等等。此此外外，因因心心瓣瓣膜膜手手术术而而引引发发心心内内膜膜炎炎、长长期期用用静静脉脉内内导导管管而而引引起起全全身性假丝酵母菌病

23、，病死率极高。身性假丝酵母菌病，病死率极高。1微生物特性微生物特性 白假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径白假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径3-63-6m m。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。2 2微生物检验微生物检验 1)直直接接显显微微镜镜检检查查：取取脓脓汁汁、痰痰和和局局部部炎炎症症性性分分泌泌物物直直接接涂涂片片，革革兰兰染染色色后后镜镜检检，显显微微镜镜见见到到革革兰兰阳阳性性(着着色色不不均均匀匀)、圆圆形形或

24、或卵卵圆圆形形菌菌体体或或孢孢子子及及假假菌菌丝丝，可可确确认认为为假假丝酵母菌感染。丝酵母菌感染。2)抗抗原原检检测测：取取病病人人血血清清作作ELISA、免免疫疫印印迹法等检测白假丝酵母菌抗原。迹法等检测白假丝酵母菌抗原。3)核酸检测：用核酸检测：用PCR法将白假丝酵母菌法将白假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具有较好的分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏性和特异性。敏性和特异性。4)分离培养分离培养将标本接种在沙氏培养基上，将标本接种在沙氏培养基上，2525或或3737培养培养1 1d d后，可出现奶油色类酵母型菌后，可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。落。镜检

25、可见假菌丝和芽生孢子。鉴定鉴定1)芽芽管管形形成成试试验验：将将假假丝丝酵酵母母菌菌接接种种于于0.20.5m|血血清清中中，37孵孵育育1.5h观观察察有有无无芽芽管管形形成成。白白假假丝丝酵酵母母菌菌可可形形成成芽芽管管，其其他他假假丝酵母菌不形成芽管。丝酵母菌不形成芽管。2)厚厚膜膜孢孢子子形形成成试试验验：将将假假丝丝酵酵母母菌菌接接种种于于玉玉米米粉粉培培养养基基25孵孵育育1-2d后后，白白假假丝丝酵酵母母菌菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子。在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子。3)3)糖同化或发酵试验糖同化或发酵试验凡发酵某种糖一定能同化该糖，故只需做凡发酵某种糖一定能同化该糖

26、，故只需做那些不发酵糖的同化试验。将假丝酵母菌那些不发酵糖的同化试验。将假丝酵母菌接种糖发酵管，接种糖发酵管，25孵育，一般观察孵育，一般观察23d，对不发酵或弱发酵管可延长至对不发酵或弱发酵管可延长至10d或或24周。周。观察有无酵母生长或液体培养基是否变混观察有无酵母生长或液体培养基是否变混浊。现在商品化的产色培养基可快速鉴定浊。现在商品化的产色培养基可快速鉴定白假丝酵母菌和其他假丝酵母菌。白假丝酵母菌和其他假丝酵母菌。(3)药物敏感试验：对二性霉素药物敏感试验：对二性霉素B、5-FC等药等药 物敏感，但对物敏感，但对5-FC极易产生耐药性。极易产生耐药性。(4)抗体检测：早期诊断可用抗体

27、检测：早期诊断可用ELlSA夹心法、夹心法、免疫酶斑点试验，方法简便。也可用乳胶免疫酶斑点试验，方法简便。也可用乳胶 凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清 中抗白假丝酵母菌抗体。中抗白假丝酵母菌抗体。(5)动动物物试试验验：将将假假丝丝酵酵母母菌菌悬悬液液注注射射1ml于于家家 兔耳静脉或注射兔耳静脉或注射0.2ml于小白鼠尾静脉，假于小白鼠尾静脉，假 丝酵母菌对动物无致病性。丝酵母菌对动物无致病性。(二二)热带假丝酵母菌热带假丝酵母菌 广泛分布于自然界，在人体表和外界相广泛分布于自然界，在人体表和外界相通的腔道中也存在。热带假丝酵母菌可通的腔道中也存在。热

28、带假丝酵母菌可引起皮肤、粘膜和内脏假丝酵母菌病。引起皮肤、粘膜和内脏假丝酵母菌病。它除可在粘膜细胞上增殖引起感染外，它除可在粘膜细胞上增殖引起感染外，其产生的毒素可引起过敏反应及产生的其产生的毒素可引起过敏反应及产生的水解酶类引起组织损伤。水解酶类引起组织损伤。微生物检验微生物检验(1)直接显微镜检查：将标本作涂片革兰直接显微镜检查：将标本作涂片革兰 染色后镜检，观察染色后镜检，观察+假丝酵母菌。假丝酵母菌。(2)分离培养与鉴定：将标本接种在沙氏分离培养与鉴定：将标本接种在沙氏 培养基上形成色暗而干燥的菌落培养基上形成色暗而干燥的菌落,取取 菌落作菌落作TZC反应。反应。TZC反应反应即在葡萄

29、糖蛋白胨琼脂内加入即在葡萄糖蛋白胨琼脂内加入0 00505g gL L氯化氯化三苯基四氮唑三苯基四氮唑(TZC)TZC)，热带假丝酵母菌在此培热带假丝酵母菌在此培养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，而白假丝酵母菌不使培养基变色而白假丝酵母菌不使培养基变色(淡红淡红)，其，其他假丝酵母菌使培养基变为红色。再取菌落他假丝酵母菌使培养基变为红色。再取菌落做糖发酵或同化试验、芽管形成较迟做糖发酵或同化试验、芽管形成较迟(血清中血清中6 6h h以上以上)，不形成厚膜孢子、动物试验阴性。，不形成厚膜孢子、动物试验阴性。二、隐球菌属二、隐球菌属 包括包括1717个种

30、和个种和7 7个变种，广泛分布于自然个变种，广泛分布于自然界，人体体表、口腔和肠道中。外源性界，人体体表、口腔和肠道中。外源性感染感染,经呼吸道侵入，由肺经血行播散经呼吸道侵入，由肺经血行播散,可侵犯肺、脑及脑膜、皮肤、骨和关节。可侵犯肺、脑及脑膜、皮肤、骨和关节。好发于细胞免疫功能低下者，如好发于细胞免疫功能低下者，如AIDSAIDS、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者。使用糖皮质激素者。现已发现现已发现新生隐球新生隐球菌、菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌有致病性。浅白隐球菌和罗伦隐球菌有致病性。()微生物特性微生物特性 在在组组织织中中呈呈圆圆形

31、形或或卵卵圆圆形形，直直径径一一般般在在4 46 6mm，外外周周有有宽宽厚厚荚荚膜膜，荚荚膜膜较较菌菌大大1 13 3倍倍，折折光光性性强强，一一般般染染色色法法不不易易着着色色而而难难以以发发现现而而得得名名。常常采采用用墨墨汁汁负负染染色色法法，在在黑黑色色景景下下可可镜镜检检到到透透亮亮菌菌体体和和宽宽厚厚荚荚膜膜。非非致致病病性性隐隐球菌无荚膜。球菌无荚膜。（）生物学多态性（）生物学多态性n有有A A、B B、C C、D D等等4 4个血清型，归入两个变个血清型，归入两个变种组：种组：新生隐球菌新生变种，有性阶新生隐球菌新生变种，有性阶段为新生线黑粉菌，血清型为段为新生线黑粉菌，血清

32、型为A A、D D；新生隐球菌格特变种，有性阶段为棒杆新生隐球菌格特变种，有性阶段为棒杆孢线黑粉菌，血清型为孢线黑粉菌，血清型为B B、C C。n用含刀豆氨酸、甘氨酸、溴麝香草酚蓝用含刀豆氨酸、甘氨酸、溴麝香草酚蓝培养基可区分两个种，培养基可区分两个种，B B、C C型可使培养型可使培养基由黄色变蓝色，而基由黄色变蓝色，而A A、D D型则无此作用。型则无此作用。在沙氏培养基上形成白色粘稠菌落。在沙氏培养基上形成白色粘稠菌落。()微生物检验微生物检验(1)标标本本直直接接镜镜检检：用用病病人人脑脑脊脊液液作作墨墨汁汁负负染染色色检检查查是是诊诊断断隐隐球球菌菌脑脑膜膜炎炎最最简简便便、快快速速

33、方方法法。常常规规细细胞胞染染色色可可发发现现隐隐球球菌菌，但但易易误误诊诊和和漏漏诊诊。如如用用PAS染染色色后后新新生生隐隐球菌呈红色。球菌呈红色。(2)抗原检测抗原检测用乳胶凝集试验、用乳胶凝集试验、ELISAELISA、和单克隆抗体法和单克隆抗体法等免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异性等免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原，已成为临床上的常规诊断方法，其抗原，已成为临床上的常规诊断方法，其中以乳胶凝集试验最为常用，此法简便、中以乳胶凝集试验最为常用，此法简便、快速。特别对直接镜检和分离鉴定阴性者快速。特别对直接镜检和分离鉴定阴性者更有诊断价值。更有诊断价值。ELISAELISA敏感性和

34、特异敏感性和特异性都较性都较高。单克隆抗体法除有较高敏感性和特异高。单克隆抗体法除有较高敏感性和特异性外，标本无须稀释和预先处理的优点。性外，标本无须稀释和预先处理的优点。(3)核酸检测核酸检测n可用痰液、支气管吸出物等标本核酸检测可用痰液、支气管吸出物等标本核酸检测方法有方法有DNADNA探针法、探针法、PCRPCR探针法等，用于检探针法等，用于检测的探针、引物主要选自保守区的重复序测的探针、引物主要选自保守区的重复序列。列。n可检出新生隐球菌，并可区别类型，是新可检出新生隐球菌，并可区别类型，是新生变种还是格特变种。非致病性隐球菌不生变种还是格特变种。非致病性隐球菌不被检出。被检出。n此方

35、法不受药物治疗的影响，还能正确评此方法不受药物治疗的影响，还能正确评价临床疗效和预后等。价临床疗效和预后等。（）分离培养（）分离培养n 将将标标本本接接种种在在沙沙氏氏培培养养基基上上，病病原原性性隐隐球球菌菌在在2525和和3737生生长长，而而非非病病原原性性隐隐球球菌菌在在3737时时不不生生长长。培培养养2525d d后后观观察察菌菌落落形形态态特特点点，并并取取菌菌落落作作印印度度墨墨汁汁负负染色镜检。染色镜检。()鉴定鉴定1）酚氧化酶试验：接种）酚氧化酶试验：接种L-多巴枸橼酸铁和咖多巴枸橼酸铁和咖 啡酸培养基中，经啡酸培养基中，经25d培养，呈棕黑色培养，呈棕黑色 菌落。菌落。2

36、）脲酶试验：能产生脲酶分解尿素琼脂培养）脲酶试验：能产生脲酶分解尿素琼脂培养 基中的尿素形成基中的尿素形成NH4和和CO2，使使pH升高，升高，培养基可由黄色变粉红色，而白假丝酵母培养基可由黄色变粉红色，而白假丝酵母 菌为阴性。菌为阴性。3）糖同化及发酵试验：能同化葡萄糖、）糖同化及发酵试验：能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖 类，不能同化硝酸盐。非致病性隐球类，不能同化硝酸盐。非致病性隐球 菌不能同化肌醇。菌不能同化肌醇。三、曲霉三、曲霉广广泛泛分分布布于于自自然然界界，达达900余余种种，分分为为18个个群群，对对工工业业和和医医药药的的用用途途

37、很很大大。酿酿酒酒造造酱酱。生生产产有有机机酸酸及及酶酶制制剂剂，抗抗生生素素等等。人人体体对对曲曲霉霉有有极极强强免免疫疫力力，只只有有在在免免疫疫功功能能降降低低时时才才能能致致病病，如如使使用用免免疫疫抑抑制制剂剂、肾肾上上腺腺皮皮质质激激素素，放放疗疗化化疗疗，各各种种恶恶性性肿肿瘤瘤、糖糖尿尿病病、AIDS等等可可诱诱发发曲曲霉霉病病。曲曲霉霉可可侵侵犯犯许许多多部部位位，呼呼吸吸系系统统曲曲霉霉病病主主要要有有三三种种：过过敏敏型型、曲曲霉霉球球和和肺肺炎炎。全全身身性性曲曲霉霉病病多多发发生生败败血血症症，危危及及生生命命。曲曲霉霉产产生生黄黄曲曲霉霉毒毒素素、杂杂色色曲曲霉霉毒

38、毒素素与与原原发发性性肝肝癌癌有有关关。微生物特性微生物特性 由由分分生生孢孢子子头头和和足足细细胞胞两两部部分分组组成成特特征征性性结结构构。分分子子孢孢子子头头包包括括分分生生孢孢梗梗茎茎、顶顶囊囊、瓶瓶梗梗、梗梗基基和和分分生生孢孢子子链链。足足细细胞胞为为特特化化的的厚厚壁壁膨膨大大的的菌菌丝丝细细胞胞。向向上上形成孢梗茎。形成孢梗茎。微生物检验微生物检验(1)直接显微镜检查：取痰液等被检材料涂直接显微镜检查：取痰液等被检材料涂 于载玻片上，在镜下可见分枝的菌丝、于载玻片上，在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶囊，较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗

39、上有许多小分生孢顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢 子。子。(2)抗原检测：用竞争性抗原检测：用竞争性ELISA测定病人血测定病人血 清中曲霉抗原。清中曲霉抗原。(3)分离培养与鉴定分离培养与鉴定 标本接种沙氏琼脂，标本接种沙氏琼脂，室温培养后菌落形成快，呈毛状，一般室温培养后菌落形成快，呈毛状，一般 为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特征性为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特征性 的分子孢子头和足细胞。的分子孢子头和足细胞。(4)药物敏感试验药物敏感试验 对制霉菌素和两性霉素对制霉菌素和两性霉素B 敏感。敏感。(5)抗体检测抗体检测 检测病人血清中抗曲霉抗体。检测病人血清中抗曲霉抗体。常用免疫扩散检测，

40、其敏感性和特异性常用免疫扩散检测，其敏感性和特异性 较高，也可用对流免疫电泳、较高，也可用对流免疫电泳、ELISA、生物素生物素亲和素联免疫吸附测定亲和素联免疫吸附测定(BALISA)、放射免疫测定放射免疫测定(R1A)及间接免疫荧光法等。及间接免疫荧光法等。菌丝和培养滤液可作菌丝和培养滤液可作ELISA抗原。抗原。(6)皮肤试验皮肤试验 对过敏性支气管肺炎病人可对过敏性支气管肺炎病人可 用曲霉抗原提取液作皮试。用曲霉抗原提取液作皮试。型超敏反应在型超敏反应在 15-20min发生阳性反应。发生阳性反应。型超敏反应在型超敏反应在4-10h出现阳性反应。出现阳性反应。型超敏反应可出现于超敏反应型

41、肺炎病人。型超敏反应可出现于超敏反应型肺炎病人。四、毛霉四、毛霉n引引起起毛毛霉霉病病的的病病原原菌菌，以以根根霉霉属属最最为为常常见见，尤其是少根根霉和米根霉两种最多见。尤其是少根根霉和米根霉两种最多见。n毛毛霉霉病病是是一一种种发发病病急急，进进展展快快、病病死死率率极极高高的的系系统统性性条条件件致致病病性性真真菌菌感感染染。尤尤其其是是慢慢性性消消耗耗性性疾疾病病如如糖糖尿尿病病、白白血血病病、长长期期应应用用化化疗疗、皮皮质质类类固固醇醇激激素素的的患患者者。临临床床上上常常见见的的是是眼眼眶眶及及中中枢枢神神经经系系统统的的毛毛霉霉病病。起起初初多多发发于于鼻鼻粘粘膜膜或或鼻鼻窦窦

42、，继继则则眼眼眶眶软软组组织织及及脑脑，也也可可全全身身性性播播散散，预预后后较较为为严严重重。常在病死后尸检才明确。常在病死后尸检才明确。微生物特性微生物特性n有有无无隔隔菌菌丝丝，在在一一些些陈陈旧旧培培养养基基中中偶偶见见有有隔隔菌菌丝丝。有有些些霉霉菌菌有有匍匍匐匐菌菌丝丝，在在培培养养基基表表面面横横向向生生长长，其其产产生生的的假假根根伸伸入入培培养养基基内内，孢孢囊囊梗梗与与假假根根对对生生，在在孢孢囊囊梗顶端形成孢子囊，内生孢子囊孢子。梗顶端形成孢子囊，内生孢子囊孢子。微生物检验微生物检验（1）直接镜检直接镜检 取皮屑、脓液、血液、痰、鼻取皮屑、脓液、血液、痰、鼻 窦抽取物等标

43、本，用窦抽取物等标本，用20%KOH制成湿片，制成湿片，直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，直直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，直 径径615m，无隔或少数分隔、壁薄、无隔或少数分隔、壁薄、偶见孢子囊及孢子囊梗。偶见孢子囊及孢子囊梗。()分离培养分离培养将临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖将临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖培养基、马铃薯培养基及沙氏琼脂培养基，培养基、马铃薯培养基及沙氏琼脂培养基，2525或或3737培养，毛霉生长较快，初起菌落培养，毛霉生长较快，初起菌落表面呈棉花样、白色，渐变为灰褐色，顶端表面呈棉花样、白色，渐变为灰褐色，顶端有黑色小点。镜检菌丝无隔或极少分隔，孢有黑色小点。镜

44、检菌丝无隔或极少分隔，孢囊梗直接由菌丝长出，常单生，分枝或极少囊梗直接由菌丝长出，常单生，分枝或极少不分枝。因毛霉常污染环境，故直接镜检较不分枝。因毛霉常污染环境，故直接镜检较培养更有意义。培养更有意义。鉴定鉴定 依据是菌落形态、色泽。分枝状态：有无结依据是菌落形态、色泽。分枝状态：有无结合孢子及结合孢子的特点。孢子囊的形态，合孢子及结合孢子的特点。孢子囊的形态，有无囊轴、囊领和囊托。生长温度，有无厚有无囊轴、囊领和囊托。生长温度，有无厚壁孢子等壁孢子等 。1)少少根根根根霉霉：生生长长快快，在在3740能能生生长长。菌菌落落初初为为白白色色，后后变变为为灰灰褐褐色色。镜镜检检见见匍匍匐匐菌菌

45、丝丝和和假假根根。孢孢囊囊梗梗单单生生或或分分枝枝，淡淡褐褐色色或或黄黄褐褐色色，常常从从菌菌丝丝膨膨胀胀处处生生出出。囊囊轴轴卵卵圆圆形形或或球球形形，无无色色或或淡淡黄黄色色。孢孢囊囊孢孢子子圆圆形形，表表面面有有棘棘刺刺。偶偶有有厚壁孢子。厚壁孢子。2)米米根根霉霉：菌菌落落同同少少根根根根霉霉。镜镜检检见见孢孢囊囊梗梗单单生生或或分分枝枝，孢孢子子囊囊孢孢子子淡淡褐褐色色有有条条纹纹，形形态态不不规规则则。假假根根发发达达。厚厚壁壁孢孢子子极多。在室温及极多。在室温及40均可生长。均可生长。3)总总状状毛毛霉霉：生生长长迅迅速速，菌菌落落呈呈毛毛状状，高高可可达达1cm，灰灰色色疏疏松

46、松。镜镜检检见见孢孢囊囊梗梗最最初初不不分分枝枝，以以后后不不规规则则分分枝枝。孢孢子子囊囊球球形形，淡淡黄黄色色。成成熟熟时时孢孢囊囊壁壁消消解解，囊囊轴轴球球形形。孢孢囊孢子卵形。囊孢子卵形。4)伞伞梨梨头头霉霉：异异名名为为伞伞状状毛毛霉霉。菌菌落落呈呈毛毛状状、生生长长快快，数数日日可可长长满满斜斜面面和和琼琼脂脂平平板板。菌菌落落粗粗糙糙，初初为为白白色色，后后变变为为淡淡蓝蓝灰灰色色，背背面面深深灰灰至至黄黄绿绿色色。孢孢囊囊梗梗长长并并呈呈伞伞形形分分枝枝，孢孢子子囊囊灰灰色色，囊囊轴轴圆圆形形光光滑滑，有有囊囊托托。孢孢囊孢子近球形，表面光滑。无厚壁孢子。囊孢子近球形，表面光滑

47、。无厚壁孢子。3药物敏感试验药物敏感试验 对两性霉素对两性霉素B敏感，静敏感，静 脉滴注疗效较好。脉滴注疗效较好。4抗体检测抗体检测 用琼脂双扩散、用琼脂双扩散、ELISA法检法检 测病人体内特异性抗体。即用匀浆抗原测病人体内特异性抗体。即用匀浆抗原 检测毛霉抗体的敏感性和特异性都较高。检测毛霉抗体的敏感性和特异性都较高。也可用免疫荧光技术在组织切片中检测也可用免疫荧光技术在组织切片中检测 和鉴定毛霉。和鉴定毛霉。五、组织胞浆菌五、组织胞浆菌有荚膜组织胞浆菌和杜波组织胞浆菌两个种。有荚膜组织胞浆菌和杜波组织胞浆菌两个种。主要侵犯网状内皮系统，荚膜组织胞浆菌引起：主要侵犯网状内皮系统，荚膜组织胞

48、浆菌引起：原发急性型组织胞浆菌病，仅皮肤试验阳性。原发急性型组织胞浆菌病，仅皮肤试验阳性。慢性空洞型，引起肺损害，常被误诊为肺结慢性空洞型，引起肺损害，常被误诊为肺结 核。核。严重播散型，全身器官均可损伤，预后严重。严重播散型，全身器官均可损伤，预后严重。淋巴瘤、白血病、霍奇金病、淋巴瘤、白血病、霍奇金病、AIDS或用肾上或用肾上 腺皮质激素治疗者常可感染本菌。腺皮质激素治疗者常可感染本菌。微生物特性微生物特性组织胞浆菌是一种双相型真菌，在组织胞浆菌是一种双相型真菌，在25培养时培养时呈典型菌丝体，在呈典型菌丝体，在37培养时为酵母型，位于培养时为酵母型，位于细胞内或外。卵圆形，直径为细胞内或

49、外。卵圆形，直径为24m、芽生芽生孢子，一端较尖，一端较圆，自细，有荚膜。孢子，一端较尖，一端较圆，自细，有荚膜。杜波组织胞浆菌圆形，直径为杜波组织胞浆菌圆形，直径为1215m、薄薄壁的芽生孢子。壁的芽生孢子。微生物检验微生物检验(1)标本直接显微镜检查标本直接显微镜检查痰液标本涂片后先用甲醇固定痰液标本涂片后先用甲醇固定10 min，再用再用 姬姆萨染色镜检，如巨噬细胞发现卵圆形，姬姆萨染色镜检，如巨噬细胞发现卵圆形，直径直径24m的较小，一端有出芽，可疑为的较小，一端有出芽，可疑为 荚膜组织胞浆菌。荚膜组织胞浆菌。皮损、脓液标本，用皮损、脓液标本，用20KOH涂片后镜检，涂片后镜检，可见可

50、见12-15m直径的厚壁酵母细胞，细胞内直径的厚壁酵母细胞，细胞内 可见脂肪小滴，可疑为杜波组织胞浆菌。可见脂肪小滴，可疑为杜波组织胞浆菌。(2)抗原检测抗原检测取患者痰液作免疫荧光法染色后镜检，可取患者痰液作免疫荧光法染色后镜检，可快速检测其抗原，但特异性差，仅作组织快速检测其抗原，但特异性差，仅作组织胞浆菌初筛试验。胞浆菌初筛试验。(3)分离培养分离培养将临床标本接种于含抗生素的沙氏培养基将临床标本接种于含抗生素的沙氏培养基上，上，25培养，生长缓慢，培养，生长缓慢，46周才开始周才开始生长，逐渐形成白色至棕色绒毛状菌落。生长，逐渐形成白色至棕色绒毛状菌落。当转种于血琼脂培养基上，当转种于