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1、实实 验验 诊诊 断断 学学Laboratory Diagnostics第一节第一节 止血、凝血和纤溶机制止血、凝血和纤溶机制第二节第二节 血管壁检测血管壁检测第三节第三节 血小板检测血小板检测第四节第四节 凝血因子检测凝血因子检测第五节第五节 抗凝血功能检测抗凝血功能检测第六节第六节 纤维蛋白溶解检测纤维蛋白溶解检测第七节第七节 血液流变学检测血液流变学检测第八节第八节 检测项目的选择和应用检测项目的选择和应用第三章第三章 血栓与止血检测血栓与止血检测第一节第一节 止血、凝血和纤溶机制止血、凝血和纤溶机制 血管壁受损血管壁受损 神经反射神经反射 体液因素体液因素 胶原暴露胶原暴露 TF释放释
2、放 血管收缩血管收缩 血小板粘附血小板粘附 内源性内源性 外源性外源性 聚集,释放聚集,释放 凝血途径凝血途径 凝血途径凝血途径 血流减慢血流减慢 血小板血栓血小板血栓 凝血酶凝血酶 初期止血血栓初期止血血栓 纤维蛋白沉积纤维蛋白沉积 二期止血血栓二期止血血栓 血管壁的止血作用血管壁的止血作用 第一节第一节 止血、凝血和纤溶机制止血、凝血和纤溶机制一、血管壁的止血作用一、血管壁的止血作用二、血小板的止血作用二、血小板的止血作用三、凝血因子的作用三、凝血因子的作用四、抗凝系统的作用四、抗凝系统的作用1.粘附功能:粘附功能:5.血块收缩功能:血块收缩功能:4.促凝功能:促凝功能:3.释放功能:释放
3、功能:2.聚集功能:聚集功能:二、血小板的止血作用二、血小板的止血作用第一节第一节 止血、凝血和纤溶机制止血、凝血和纤溶机制内皮下组分、内皮下组分、vWFvWF和和GPIb-GPIb-巨大血小板综合症巨大血小板综合症(BBS)FgFg、Ca2+Ca2+、GPb/aGPb/a血小板无力症血小板无力症(GT)ADPADP、PF4PF4a-PFa-PF3 3-Ca-Ca2 2-a;a-PF3-Ca2-a;a-PF3-Ca2-a-a肌动球蛋白收缩肌动球蛋白收缩第一节第一节 止血、凝血和纤溶机制止血、凝血和纤溶机制三、凝血因子的作用三、凝血因子的作用凝血机制凝血机制-XIIXIIa XIXIa IXIX
4、aXXaVIIIII PF3 Ca2+IIIIaFib接触激活接触激活Ca2+PF3 VIIIaVaVIIa传统瀑布学说传统瀑布学说内源凝血途径外源凝血途径共同途径APTTPTTTFg第一节第一节 止血、凝血和纤溶机制止血、凝血和纤溶机制四、抗凝系统的作用四、抗凝系统的作用(the function of anticoagulation system)细胞抗凝细胞抗凝 单核单核-巨噬细胞巨噬细胞内皮细胞内皮细胞 吞噬清除吞噬清除TF,a,FDPsTF,a,FDPs;分泌分泌 2 2-MG-MG,1 1-AT-AT,摄取和灭活活化因子摄取和灭活活化因子;分泌抗凝物质分泌抗凝物质:AT-AT-、P
5、CPC系统系统、HC-HC-、TFPITFPI合成释放合成释放PGIPGI2 2、TMTM、AT-AT-、TFPITFPI抗凝血酶抗凝血酶及肝素,及肝素,HC-HC-蛋白系统蛋白系统肝细胞肝细胞体液抗凝体液抗凝血管内皮细胞合成血管内皮细胞合成vWFvWF、内皮素、内皮素、6-6-酮前列腺素酮前列腺素F1aF1a一、筛检试验一、筛检试验 (一一)出血时间出血时间(BT)(BT)(二二)束臂试验(毛细血管抵抗力试验)束臂试验(毛细血管抵抗力试验)二、诊断试验二、诊断试验 (一一)血管性血友病因子抗原及活性测定血管性血友病因子抗原及活性测定 (二二)血浆血浆6-6-酮前列腺素酮前列腺素F1aF1a测
6、定测定 (三三)血浆凝血酶调节蛋白抗原测定血浆凝血酶调节蛋白抗原测定 (四四)血浆内皮素血浆内皮素-1-1测定测定第二节第二节 血管壁检测血管壁检测第三节第三节 血小板检测血小板检测一、筛检试验一、筛检试验 (一一)血小板计数血小板计数 (二二)血块退缩试验血块退缩试验二、诊断试验二、诊断试验 (一一)血小板相关血小板相关IgIg测定测定 (二二)血小板粘附试验血小板粘附试验 (三三)血小板聚集试验血小板聚集试验 (四四)血小板血小板P-P-选择素选择素 (五五)血小板促凝活性测定血小板促凝活性测定 (六六)血浆血栓烷血浆血栓烷B2B2测定测定一、筛检试验一、筛检试验 (一一)活化部分凝血活酶
7、时间测定(活化部分凝血活酶时间测定(APTTAPTT)(二二)凝血时间(凝血时间(CTCT)(三三)血浆凝血酶原时间测定血浆凝血酶原时间测定(PTPT)二、诊断试验二、诊断试验 (一一)血浆凝血因子促凝活性血浆凝血因子促凝活性 (二二)血浆纤维蛋白原测定(血浆纤维蛋白原测定(FgFg)(三三)血浆因子血浆因子定性试验定性试验 (四四)可溶性纤维蛋白单体复合物测定可溶性纤维蛋白单体复合物测定(sFMC)(sFMC)第四节第四节 凝血因子检测凝血因子检测 IIIIFg液相激活液相激活aa内源凝血途径内源凝血途径(TFTF)TF TF CaCa2+2+aa外源凝血途径外源凝血途径共共同同凝凝血血途途
8、径径aPF3Ca2aaaCaCa2 2CaCa2 2aPF3Ca2aIIaIIaFMFbCaCa2 2CaCa2 2CaCa2 2CaCa2 2血管损伤血管损伤K,aaa,a,IIa,IIa,CaCa2 2TFPITFPI凝血酶原酶凝血酶原酶PKKHMWKaaaaaa 固相激活固相激活APTTAPTTPTPTTTTTFgFg定量定量XIIIaXIIIaXIIIXIII“凝血四项凝血四项”一、病理性抗凝物质的筛检试验一、病理性抗凝物质的筛检试验 (一一)血浆凝血酶时间测定血浆凝血酶时间测定 (二二)甲苯胺蓝纠正试验甲苯胺蓝纠正试验或血浆游离肝素时间测定或血浆游离肝素时间测定 (三三)APTT)A
9、PTT交叉试验交叉试验二、病理性抗凝物质的诊断试验二、病理性抗凝物质的诊断试验 (一一)狼疮抗凝物质测定狼疮抗凝物质测定 (二二)抗心磷脂抗体测定抗心磷脂抗体测定三、生理性抗凝因子测定三、生理性抗凝因子测定 (一一)血浆血浆AT-AT-活性测定(活性测定(AT-:A AT-:A)(二二)PC)PC活性测定(活性测定(PC:APC:A)(三三)血浆游离血浆游离PSPS测定测定(FPS)(FPS)(四四)血浆凝血酶血浆凝血酶-抗凝血酶测定(抗凝血酶测定(ATAATA)第五节第五节 抗凝系统检测抗凝系统检测一、筛检试验一、筛检试验(一一)血浆血浆D-D-二聚体(二聚体(D-DD-D)定性试验)定性试
10、验(二二)血浆纤维蛋白血浆纤维蛋白(原原)降解产物降解产物(FDP)(FDP)定性试验定性试验(三三)优球蛋白溶解时间测定(优球蛋白溶解时间测定(ELTELT)二、诊断试验二、诊断试验(一一)血浆组织型纤溶酶原激活物血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)(t-PA)测定测定(二二)血浆纤溶酶原活性测定血浆纤溶酶原活性测定(三三)血浆纤溶酶原激活抑制物血浆纤溶酶原激活抑制物-1-1活性测定活性测定(四四)3P)3P试验试验(五五)血浆纤溶酶血浆纤溶酶-抗纤溶酶复合物测定抗纤溶酶复合物测定(六六)血浆纤维蛋白血浆纤维蛋白(原原)降解产物降解产物(FDP)(FDP)定量测定定量测定(七七)血浆血浆D-
11、D-二聚体(二聚体(D-DD-D)定量测定)定量测定第六节第六节 纤溶活性检测纤溶活性检测第七节 血液流变学检测(一)全血粘度 :见于冠心病、心梗、高血压、脑血栓形成、DVT、糖尿病、高脂血症、恶性肿瘤、肺源性心脏病、真红、MM、原发性巨球蛋白血症、烧伤等。:见于贫血、重度纤维蛋白原或其他凝血因子缺乏。第七节 血液流变学检测(二)血浆粘度测定 :见于血浆蛋白和(或)血脂增高的疾病,如糖尿病、高脂血症、MM、原发性巨球蛋白血症、动脉粥样硬化等。1.血液凝固时间(CT):定义:血液离体后至凝固所需的时间 反映因子被负电荷表面激活至纤维蛋白形成,一连串酶促反应所需的时间 主要反映内源性凝血过程第一期
12、有无异常二、二期止血缺陷筛选实验1.血液凝固时间(CT):CT延长:血友病 血管性血友病 严重的因子、减少或缺乏 纤溶亢进或抗凝物质增多二、二期止血缺陷筛选实验1.血液凝固时间(CT):CT缩短:血栓前状态 血栓性疾病ACT可用于体外循环肝素用量的监护指标二、二期止血缺陷筛选实验2.活化部分凝血活酶时间测定(APTT)是在抗凝的少血小板血浆中,加入足够量的活化是在抗凝的少血小板血浆中,加入足够量的活化接触因子激活剂(白陶土)和部分凝血活酶(代接触因子激活剂(白陶土)和部分凝血活酶(代替血小板磷脂),再加钙以满足内源凝血的全部替血小板磷脂),再加钙以满足内源凝血的全部条件,观察血浆凝固所需时间,
13、即条件,观察血浆凝固所需时间,即APTTAPTT二、二期止血缺陷筛选实验 检查内源性凝血更为敏感检查内源性凝血更为敏感 血小板异常不影响结果血小板异常不影响结果2.活化部分凝血活酶时间测定(APTT)参考值:参考值:33.6833.6840.3240.32延长延长10s10s以上即有意义以上即有意义二、二期止血缺陷筛选实验2.活化部分凝血活酶时间测定(APTT)临床意义:临床意义:监测肝素治疗首选指标监测肝素治疗首选指标延长:延长:先天性凝血因子异常:甲、乙型血友病先天性凝血因子异常:甲、乙型血友病 凝血因子缺乏:凝血因子缺乏:、抗凝物或凝血因子抑制物增多:抗凝物或凝血因子抑制物增多:SLES
14、LE二、二期止血缺陷筛选实验2.活化部分凝血活酶时间测定(APTT)临床意义:临床意义:监测肝素治疗首选指标监测肝素治疗首选指标缩短:缩短:血栓前状态,如血栓前状态,如DICDIC及血栓性疾病及血栓性疾病肝素治疗的监测:维持在正常的肝素治疗的监测:维持在正常的1.51.52.52.5倍倍二、二期止血缺陷筛选实验3.血浆凝血酶原时间测定(PT)被检血浆中加入组织凝血活酶(组织因子)和被检血浆中加入组织凝血活酶(组织因子)和CaCa2+2+,观察血浆凝固所需的时间,观察血浆凝固所需的时间检测外源性凝血系统的筛选试验反映因子、X、V、I的水平二、二期止血缺陷筛选实验3.血浆凝血酶原时间测定(PT)参
15、考值参考值:PTPT:11:1113s;13s;正常对照正常对照3s3s以上以上有意义有意义凝血酶原时间比值凝血酶原时间比值(PTR):10.15(PTR):10.15 PTRPTR=受检者受检者PT/PT/正常对照正常对照PT(PT(秒秒)二、二期止血缺陷筛选实验3.血浆凝血酶原时间测定(PT)临床意义临床意义:延长:凝血因子延长:凝血因子、V V、X X 缺乏如严重肝病、缺乏如严重肝病、VitKVitK缺乏、纤溶亢进缺乏、纤溶亢进缩短:先天性因子缩短:先天性因子V V增多,高凝状态及血栓性疾增多,高凝状态及血栓性疾病病监测口服抗凝剂治疗的首选指标监测口服抗凝剂治疗的首选指标二、二期止血缺陷
16、筛选实验优球蛋白溶解时间测定(ELT)血清(浆)纤维蛋白(原)降解产物(FDP)测定血浆D-二聚体(D-D)测定三、纤溶活性增强筛选实验1.优球蛋白溶解时间测定(优球蛋白溶解时间测定(ELTELT)包括血浆纤维蛋白原、纤溶酶原和纤溶酶原激活物包括血浆纤维蛋白原、纤溶酶原和纤溶酶原激活物在酸性在酸性(pH4.5)(pH4.5)低离子强度溶液中可被沉淀,并溶解低离子强度溶液中可被沉淀,并溶解于缓冲液中于缓冲液中当加入钙或凝血酶使其凝固后,在当加入钙或凝血酶使其凝固后,在3737下观察凝块下观察凝块完全溶解的时间,即为完全溶解的时间,即为ELTELT三、纤溶活性增强筛选实验1.优球蛋白溶解时间测定(
17、优球蛋白溶解时间测定(ELTELT)参考值:参考值:加钙法:加钙法:129.841.1 min129.841.1 min 加酶法:加酶法:157.559.1 min157.559.1 min三、纤溶活性增强筛选实验1.优球蛋白溶解时间测定(优球蛋白溶解时间测定(ELTELT)临床意义:临床意义:延长:纤溶活性减低,如血栓前状态、应用抗纤溶延长:纤溶活性减低,如血栓前状态、应用抗纤溶药物药物缩短:短于缩短:短于70min70min说明纤溶活性增强,原发性或继说明纤溶活性增强,原发性或继发性纤溶亢进发性纤溶亢进(DIC)(DIC)三、纤溶活性增强筛选实验2.血清(浆)纤维蛋白(原)降解产物(血清(
18、浆)纤维蛋白(原)降解产物(FDPFDP)测定)测定血浆FDP可与FDP抗体发生肉眼可见的凝集反应 参考值:ELISA法 血浆 5 mg/L;血清 10 mg/L三、纤溶活性增强筛选实验2.血清(浆)纤维蛋白(原)降解产物(血清(浆)纤维蛋白(原)降解产物(FDPFDP)测定)测定临床意义:轻度增高(1040 mg/L):急性静脉血栓形成、急性心梗、手术后明显增高(40 mg/L):DIC、原发性纤溶亢进、急性早幼粒细胞白血病三、纤溶活性增强筛选实验3.血浆D-二聚体(D-D)测定是FDP的成分,继发性纤溶亢进的标志参考值:ELISA法 0.4g/L 临床意义:增高:(1)DIC、血栓形成 (
19、2)溶栓治疗有效的指标三、纤溶活性增强筛选实验出血性疾病的诊断一期止血缺陷筛选实验的应用二期止血缺陷筛选实验的应用纤溶活性亢进筛选实验的应用第八节 实验项目的选择和应用1.一期止血缺陷筛选实验的应用BT N、PLT N:正常人、单纯性紫癜、过敏性紫癜BT、PLT:原发性或继发性血小板减少性紫癜BT、PLT:原发性或继发性血小板增多症BT、PLT N:血小板功能异常、vWD 低(无)纤维蛋白血症第八节 实验项目的选择和应用2.二期止血缺陷筛选实验的应用APTT N、PT N:正常人、因子X缺乏症APTT、PT N:血友病、缺乏症APTT N、PT:因子、X缺乏症APTT、PT:因子X、V、I缺乏症第八节 实验项目的选择和应用3.纤溶活性亢进筛选实验的应用FDP N、D-D N:纤溶活性正常 FDP阳性、D-D阳性:继发性纤溶,如DIC FDP阳性、D-D阴性:原发性纤溶、多为FDP假阳性FDP阴性、D-D阳性:继发性纤溶、多为FDP假阴性第八节 实验项目的选择和应用凝血机制凝血机制-XIIXIIa XIXIa IXIXaXXaVIIIII PF3 Ca2+IIIIaFib接触激活接触激活Ca2+PF3 VIIIaVaVIIa传统瀑布学说传统瀑布学说内源凝血途径外源凝血途径共同途径APTTPTTTFg
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