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1、课题课题2 2 月季的花药培养月季的花药培养课题课题2 2 月季的花药培养月季的花药培养课题目标:课题目标:说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产生花粉植株的两种途径,生花粉植株的两种途径,说出影响花药培养的因素,说出影响花药培养的因素,学习花药培养的基本技术,学习花药培养的基本技术,尝试用月季或其他植物的花药进行培养。尝试用月季或其他植物的花药进行培养。课题重点和难点:课题重点和难点:选取适宜的培养材料和培养基。选取适宜的培养材料和培养基。花的结构:花的结构:花柄、花柄、花托、萼片、花瓣、花托、萼片、花瓣、和和雌蕊雌蕊雄蕊雄蕊柱头柱头花柱花柱子房子房花药
2、花药花丝花丝雄蕊雄蕊雌蕊雌蕊萼片萼片花托花托花柄花柄花瓣花瓣一、基础知识一、基础知识1.1.被子植物的花粉发育被子植物的花粉发育(1)(1)被子植物雄蕊由被子植物雄蕊由 和和 两部分组成。两部分组成。花药花药花丝花丝(2)(2)花粉是由花粉母细胞经过花粉是由花粉母细胞经过 而形成,因此,而形成,因此,花粉是花粉是 的生殖细胞。的生殖细胞。减数分裂减数分裂单倍体单倍体小孢子母细胞小孢子母细胞(2n2n)时期时期(n n)单核单核 期期(n n)双双 核核 期期 细胞核细胞核(n n)细细 胞胞 核核(n n)细胞细胞(n n)细胞细胞(n n)个精子个精子(n)(n)分裂分裂 分裂分裂单核单核
3、期期(n n)分裂分裂减数减数四分体四分体居中居中靠边靠边有丝有丝生殖生殖有丝有丝花粉管花粉管生殖生殖营养营养2 2结合教材内容填下列示意图结合教材内容填下列示意图 (3)(3)被子植物花粉的发育要经历被子植物花粉的发育要经历小孢子小孢子 、和和 等阶段。等阶段。四分体时期四分体时期单核期单核期双核期双核期注意:两个精子和一个营养核的基因型相同。注意:两个精子和一个营养核的基因型相同。花花花花雄雄雄雄蕊蕊蕊蕊雌雌雌雌蕊蕊蕊蕊花花花花药药药药花花花花粉粉粉粉粒粒粒粒精子精子精子精子精子精子精子精子子子子子 房房房房胚胚胚胚珠珠珠珠胚胚胚胚囊囊囊囊子房壁子房壁子房壁子房壁珠被珠被珠被珠被卵细胞卵细
4、胞卵细胞卵细胞两个极核两个极核两个极核两个极核受受受受精精精精卵卵卵卵受受受受精精精精极极极极核核核核胚胚胚胚胚胚胚胚乳乳乳乳种皮种皮种皮种皮种种种种子子子子果皮果皮果皮果皮果果果果实实实实有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂n n n nn n n n2n2n2n2nn n n n3n3n3n3n2n2n2n2n2n2n2n2n2n2n2n2n2n2n2n2n拓展:发育结果拓展:发育结果2.2.产生花粉植株的两条途径产生花粉植株的两条途径:途径一:花粉通过途径一:花粉通过胚状体阶段胚状体阶段发育为植株;发育为植株;途径二:花粉在诱导培养基上途径二:花粉在诱导培养基
5、上先形成愈伤组织先形成愈伤组织,再将其诱导分化成植株。再将其诱导分化成植株。一、基础知识一、基础知识 两种途径之间并没有绝对的界限,主要取决两种途径之间并没有绝对的界限,主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。于培养基中激素的种类及其浓度配比。人工种子是由外植体通过组织培养而获得的人工种子是由外植体通过组织培养而获得的胚状胚状体,体,然后加上然后加上人造胚乳、人造种皮人造胚乳、人造种皮而制成。而制成。3.3.影响花药培养的因素影响花药培养的因素(1)(1)主要的影响因素:主要的影响因素:材料的选择与培养基的组成材料的选择与培养基的组成亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及亲本植株的生长条件
6、、材料的低温预处理以及接种密度接种密度等对诱导成功都有一定的影响。等对诱导成功都有一定的影响。(2)(2)其他因素:其他因素:从花粉来看,应当选择从花粉来看,应当选择 (四分体期、(四分体期、单核期、双核期、萌发期)的花粉单核期、双核期、萌发期)的花粉 材料的选择材料的选择 从花期来看,应当选择从花期来看,应当选择 (初花期、盛花(初花期、盛花 期、晚花期)的花药期、晚花期)的花药 从花蕾来看,应当选择从花蕾来看,应当选择 (完全未开放、(完全未开放、略微开放、完全盛开)的花蕾略微开放、完全盛开)的花蕾 初花期初花期单核期单核期完全未开放完全未开放一、基础知识一、基础知识二、月季花药培养的实验
7、操作二、月季花药培养的实验操作1.1.材料的选取材料的选取焙花青焙花青-铬矾法铬矾法(花粉细胞核染成花粉细胞核染成蓝黑色蓝黑色)醋酸洋红法醋酸洋红法(最常用最常用最常用最常用)(2)(2)检查方法检查方法:P:P3939一般通过一般通过镜检镜检来确定其中的来确定其中的花粉花粉是否处于适宜的发育期。是否处于适宜的发育期。(1)(1)选择花药:选择花药:P39 思考:为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难?思考:为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难?花瓣松动后,微生物就可能侵入到花药,给材料的花瓣松动后,微生物就可能侵入到花药,给材料的消毒带来困难。消毒带来困难。2.2.材料的消毒材料的消毒 用于培
8、养花药,实际上多数未熟,由于它的外面用于培养花药,实际上多数未熟,由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护,有花萼、花瓣或颖片保护,通常处于无菌状态,所以通常处于无菌状态,所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。花蕾花蕾无菌水无菌水清洗清洗吸干表面水分吸干表面水分0.10.1的氯化汞溶的氯化汞溶液液 2-4 min2-4 min无菌水清洗无菌水清洗3-53-5次次7070的酒精的酒精浸浸泡泡30s30s二、月季花药培养的实验操作二、月季花药培养的实验操作A.A.剥剥取花药取花药B.B.接接种花药种花药C.C.培培养养D.D.分化培养基培养分化培养基培养E.E.鉴定和筛选鉴定和
9、筛选不要损伤花药不要损伤花药?要彻底除去花丝要彻底除去花丝?2525,不需要光照。不需要光照。20-3020-30天后长出愈伤组织天后长出愈伤组织或胚状体。或胚状体。幼小幼小植株形成植株形成后才后才需要光照需要光照。出现染色体倍性的变化出现染色体倍性的变化,如何处理?,如何处理?每个培养瓶接种每个培养瓶接种 (7 710 10)个花药个花药花药长出愈伤组织还要转移花药长出愈伤组织还要转移到哪?到哪?3.接种和培养接种和培养 如果花药开裂释放出胚状体,则一个花药内就会产生大如果花药开裂释放出胚状体,则一个花药内就会产生大量幼小植株,必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开,分别量幼小植株,必须在花药开
10、裂后尽快将幼小植株分开,分别移植到新的培养基上,否则这些植株将很难分开。移植到新的培养基上,否则这些植株将很难分开。花药出现污染的原因花药出现污染的原因:(1)(1)消毒不彻底;消毒不彻底;(2)(2)接种室污染;接种室污染;(3)(3)人为因素的交叉污染等。人为因素的交叉污染等。三、结果分析与评价三、结果分析与评价植物组织培养技术与花药培养技术的异同点:植物组织培养技术与花药培养技术的异同点:项目项目相同点相同点不同点不同点植物组织植物组织培养技术培养技术培养基配制方培养基配制方法、无菌技术法、无菌技术及接种操作等及接种操作等基本相同基本相同花药培养花药培养技术技术外植体为体细胞,染色体外植
11、体为体细胞,染色体数无需加倍。数无需加倍。取材为花粉,培养的为取材为花粉,培养的为单单倍体幼苗,植株弱小,高倍体幼苗,植株弱小,高度不育度不育。必须用秋水仙素。必须用秋水仙素处理,使染色体加倍,恢处理,使染色体加倍,恢复正常植株的染色体数,复正常植株的染色体数,而且为纯种。而且为纯种。月月季季的的花花药药培培养养被子植物花粉的发育:被子植物花粉的发育:产生花粉植株的产生花粉植株的两种途径两种途径:花药中的花粉花药中的花粉花药中的花粉花药中的花粉胚状体胚状体 丛芽丛芽丛芽丛芽愈伤组织愈伤组织 诱导诱导生根生根移栽移栽脱分化脱分化脱分化脱分化分化分化 再分化再分化影响花药培养影响花药培养的因素:的因素:主要因素:材料的选择与培养基的组成主要因素:材料的选择与培养基的组成重要因素重要因素:选择合适的花粉发育时期:选择合适的花粉发育时期影响因素影响因素:亲本植株的生长条件、低:亲本植株的生长条件、低温处理和接种密度等温处理和接种密度等实验操作:实验操作:材料的消毒:材料的消毒:材料的选取:确定花粉发育时期的方法材料的选取:确定花粉发育时期的方法接种和培养:接种和培养:鉴定和筛选:鉴定和筛选:猪笼草猪笼草示笼状捕虫器示笼状捕虫器捕蝇草捕蝇草夹状捕虫器夹状捕虫器茅膏菜茅膏菜黏液捕虫器黏液捕虫器
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