生化实验一法测含量幻灯片.ppt

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1、生化实验一法测含量第1页，共21页，编辑于2022年，星期日实验室规则实验室规则按规章操作，保障实验安全；按规章操作，保障实验安全；进入实验室要着白大衣；禁止进食和饮水进入实验室要着白大衣；禁止进食和饮水禁止大声喧哗，保持实验环境的安静；禁止大声喧哗，保持实验环境的安静；维持实验室的整洁。维持实验室的整洁。第2页，共21页，编辑于2022年，星期日 实验分组实验分组 实验室卫生实验室卫生 实验报告的书写实验报告的书写第3页，共21页，编辑于2022年，星期日实验名称实验名称姓名：姓名：班级：班级：学号：学号：实验原理：实验原理：实验目的：实验目的：实验步骤：实验步骤：文字简洁，尽可能采用图表文

2、字简洁，尽可能采用图表实验结果：实验结果：原始数据、计算过程、结论原始数据、计算过程、结论实验讨论：实验讨论：结果分析、实验注意事项结果分析、实验注意事项实验日期：实验日期：同组人员：同组人员：实验报告的书写实验报告的书写第4页，共21页，编辑于2022年，星期日一、玻璃仪器的常规清洗一、玻璃仪器的常规清洗二、试剂瓶、吸量管、试管的放置二、试剂瓶、吸量管、试管的放置基基 本本 操操 作作三、刻度吸量管的使用三、刻度吸量管的使用四、微量移液器的使用（加样枪）四、微量移液器的使用（加样枪）第5页，共21页，编辑于2022年，星期日一、玻璃仪器的常规清洗一、玻璃仪器的常规清洗二、试剂瓶二、试剂瓶、吸

3、量管、试管、吸量管、试管的放置的放置1、清洗剂洗刷、清洗剂洗刷2、自来水冲洗、自来水冲洗3-5 遍遍3、蒸馏水、蒸馏水冲洗冲洗2-3 遍（遍（2-3ml/次次)4、倒扣放置、倒扣放置 1、试剂瓶用后放回原处、标签面向自己、试剂瓶用后放回原处、标签面向自己 2、吸量管尖头朝下放置，以免倒流、吸量管尖头朝下放置，以免倒流 3、空置干净试管倒扣放在试管架上、空置干净试管倒扣放在试管架上 选、吸、平、减、吹选、吸、平、减、吹三、刻度吸量管的使用三、刻度吸量管的使用第6页，共21页，编辑于2022年，星期日四、微量移液器的使用（加样枪）1、看清加样枪规格。、看清加样枪规格。2、仔细调节旋钮至所需刻度。、

4、仔细调节旋钮至所需刻度。3、安装枪头。、安装枪头。4、压至一档，吸取溶液。、压至一档，吸取溶液。5、放出溶液：压至二档。、放出溶液：压至二档。第7页，共21页，编辑于2022年，星期日实验一实验一改良改良Lowry氏法测定蛋白质含量氏法测定蛋白质含量第8页，共21页，编辑于2022年，星期日蛋白质常用的定量方法蛋白质常用的定量方法1.1.凯氏定氮法凯氏定氮法2.2.紫外吸收法紫外吸收法3.3.呈色法呈色法双缩脲法双缩脲法酚试剂法酚试剂法第9页，共21页，编辑于2022年，星期日一、实验目的：一、实验目的：1、学习改良、学习改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法氏法测定蛋白质含量的原理及方

5、法2、了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘制要点、了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘制要点第10页，共21页，编辑于2022年，星期日二、实验原理：PrCu2+OH-Pr-Cu2+螯合物螯合物(紫红色紫红色)酚试剂酚试剂钼蓝钼蓝-钨蓝混合物钨蓝混合物 (蓝色蓝色)（双缩脲反应）（双缩脲反应）第11页，共21页，编辑于2022年，星期日优缺点优缺点缺点：缺点：费时较长，而且要精确控制操作时间。费时较长，而且要精确控制操作时间。显色程度与时间有关。显色程度与时间有关。专一性较差，干扰物质较多。专一性较差，干扰物质较多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、酚类、柠檬酸、硫酸铵、TrisTris缓冲液、甘氨酸

6、、糖缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油以及含有巯基、酰胺基、伯胺基的化合物等均可类、甘油以及含有巯基、酰胺基、伯胺基的化合物等均可干扰。干扰。优点：优点：灵敏度高灵敏度高 双缩脲法的检出限为双缩脲法的检出限为0.21.7mg/ml，而本法的检出限为而本法的检出限为0.0150.110mg/ml。第12页，共21页，编辑于2022年，星期日三、实验步骤：标准曲线的绘制及样品测定标准曲线的绘制及样品测定试剂试剂（ml）标准曲线绘制标准曲线绘制样品样品测定管测定管012345Pr标准液标准液00.10.20.40.60.8待测血清待测血清1.0生理盐水生理盐水1.00.90.80.60.40.20试剂试剂A

7、0.9ml,混匀后，混匀后，37水浴水浴10min试剂试剂B0.1ml,混匀后，室温放置混匀后，室温放置10min试剂试剂C3ml,立即立即混匀，混匀，37水浴水浴10min分光光度计以波长分光光度计以波长650nm依次比色读取光密度值依次比色读取光密度值第13页，共21页，编辑于2022年，星期日分光光度计分光光度计分光光度计的原理分光光度计的原理分光光度计的操作分光光度计的操作拉杆，拉杆，1-4档档样品池样品池读数读数波长波长第14页，共21页，编辑于2022年，星期日光光源源I0I单色器单色器样品池样品池狭缝狭缝检测系统检测系统分光光度计的构造分光光度计的构造第15页，共21页，编辑于2

8、022年，星期日 T=I/I0，A=-lg T Lambert-Beer 定律定律A=KcL分光光度计的原理分光光度计的原理I0ILK：吸光系数：吸光系数c：溶液浓度：溶液浓度L：溶液厚度：溶液厚度c1.A标标/A测测=c标标/c测测A A：吸光度：吸光度T T：透光度：透光度2.标准曲线法标准曲线法第16页，共21页，编辑于2022年，星期日分光光度计的使用1、打开分光光度计，预热、打开分光光度计，预热20-30min。2、调节旋钮至需要的光波长。、调节旋钮至需要的光波长。3、检查拉杆是否在分光光度计的休息状态。、检查拉杆是否在分光光度计的休息状态。T档档 拉杆拉杆1档档 空白管空白管 调调

9、T 100%：T档档 拉杆拉杆1档半档半 调调T 0%：A档档 拉杆拉杆2、3、4档档 测吸光度测吸光度 标准管，测定管标准管，测定管休息状态：休息状态：拉杆拉杆1档半档半 第17页，共21页，编辑于2022年，星期日四、结果：1、标准曲线的绘制和实测样本浓度的求得、标准曲线的绘制和实测样本浓度的求得实测实测Pr含量含量第18页，共21页，编辑于2022年，星期日2、浓度换算、浓度换算 待测蛋白浓度（待测蛋白浓度（g/L）=实测实测Pr浓度浓度稀释倍数稀释倍数第19页，共21页，编辑于2022年，星期日五、注意事项：1、测定管蛋白浓度应在、测定管蛋白浓度应在0.015-0.110mg/ml；2、各管加试剂、各管加试剂C必须快速，并立即摇匀，不应出现必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊；混浊；3、精确控制操作时间。精确控制操作时间。第20页，共21页，编辑于2022年，星期日第21页，共21页，编辑于2022年，星期日