连翘提取物提取分离工艺及其检测方法进展优秀精选课件.ppt

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1、连翘简介连翘苷类的提取分离工艺 连翘苷类的检测方法结语参考文献连翘 连翘(Fructus Forsythiae)为木犀科植物连翘Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实,主产于我国山西、陕西、河南、山东等地。具有清热解毒、消肿散结之功效,主治温热、丹毒、斑疹、疮疡肿毒、瘰疬等症。我国药典规定，连翘的原植物为木犀科连翘(Forsythia suspense Thund.Vahl)的成熟果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称 青翘；果实熟透时采收,晒干，除去杂质，习称“老翘”在国际市场上，其同属植物金种花(F.viridissima)和朝鲜连翘(

2、F.koreana)亦作为连翘正品使用1。连翘中的化学成分主要包括萜类、苯乙醇苷类、木脂素类、黄酮类、天然醇类、香豆素、挥发性成分和一些醇、酯、酸、醛、酮等化合物。连翘苷类是连翘所含的主要有效化学成分，主要包括连翘苷和连翘酯苷两种成分，其中连翘苷的含量较大且抗菌抗病毒活性很强2。1.连翘苷类的提取分离工艺 1.1 连翘苷的提取分离工艺王丽娅等采用正交设计法研究以乙醇作溶剂利用回流法提取苷类的提取工艺，以乙醇浓度85%、回流次数3，回流时间60min和料液比1：10等提取条件下，连翘苷平均得率为5.781%3。胡光等采用正交实验法优选乙醇提取连翘苷的工艺，认为提取连翘苷的最佳工艺条件为80%乙醇

3、，料液比为1:8，回流时间2h,共提取2次4。于春波等采用70%乙醇回流，D2820型人孔吸附树脂纯化的方法制备得到连翘苷的含量达到27.2%的产品5。卢静华等采用正交实验法优选连翘中连翘苷的最佳提取工艺，认为连翘中连翘苷的最佳提取工艺为加10 倍水，超声提取3 次，每次30 min，提取连翘中连翘苷平均含量达到0.28%，RSD=1.15%6。武果桃等对比了超声提取和索氏提取两种提取方法，结果显示以超声法从连翘中提取连翘苷的提取率较高7。1.2连翘酯苷提取分离工艺王霖娇等提出了一种连翘酯苷提取新工艺，原料经乙醇冷浸、大孔树脂粗分离后过葡聚糖凝胶柱和C18中压柱精分离获得纯度达98%的连翘酯苷

4、产品8。高学敏等采用回流提取，大孔树脂法分离制备连翘酯苷，并通过正交试验法考察加醇量、回流时间、回流次数、醇浓度4个因素，研究不同类型大孔树脂对连翘酯苷收率的影响，得到连翘酯苷纯度为18.3%-22.5%的产品9。王进东等认为D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷能显著提高连翘酯苷的纯度，其最佳工艺为上样液浓度含连翘生药1.2g/ml,苷的最佳工艺为上样液浓度为含连翘生药 1.2 g/mL,用 6 BV的 30%乙醇液进行洗脱,二次洗脱后,连翘酯苷的含量可达 60%以上。并得出结论，该技术能显著提高连翘酯苷的纯度,具有吸附量大,洗脱容易,经济环保等优点,适合于规模化生产10。青翘和黄翘中连翘酯苷含

5、量的比较及其提取工艺研究J.正交实验法优选乙醇提取连翘苷的工艺研究J.胡光等采用正交实验法优选乙醇提取连翘苷的工艺，认为提取连翘苷的最佳工艺条件为80%乙醇，料液比为1:8，回流时间2h,共提取2次4。3王娅丽，杨建雄，柴渭莉.D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的工艺研究J.3王娅丽，杨建雄，柴渭莉.结果显示连翘水提物的解热、镇痛效果均优于超临界萃取物和分子蒸馏蒸出物。王进东等认为D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷能显著提高连翘酯苷的纯度，其最佳工艺为上样液浓度含连翘生药1.胡光等采用正交实验法优选乙醇提取连翘苷的工艺，认为提取连翘苷的最佳工艺条件为80%乙醇，料液比为1:8，回流时间2h,共

6、提取2次4。结果显示建立的定量模型准确性好,内部交叉验证均方差(RMSECV)、内部交叉验证决定系数分别为 0.刘明等以连翘酯苷 A 含量为指标，采用高效液相法，考察 D-101 型，D-201 型，HPD-100 型，HPD-300 型等8 种大孔吸附树脂对连翘中连翘酯苷 A 吸附纯化工艺条件，结果表明HPD-300 型大孔吸附树脂具有最佳的吸附洗脱参数，其动态饱和吸附洗脱量达3.57%其吸附分离连翘酯苷 A 的工艺条件为:上样浓度为0.3g(生药)/ml,吸附流速为1BV/h,以 5 倍柱体积水洗脱,继以7 倍柱体积50%乙醇洗脱。结论是该技术适用于连翘中连翘酯苷 A 粗提取的工业化生产，

7、连翘酯苷 A 纯度可达50%左右11。王鹏等通过药效学实验比较连翘超临界 CO2 萃取物、分子蒸馏蒸出物和水提物的解热、镇痛效果。其方法为用 2,4-二硝基苯酚法比较萃取物、分离物及水提物的解热效果;腹腔注射醋酸溶液法比较萃取物、分离物及水提物的镇痛效果。结果显示连翘水提物的解热、镇痛效果均优于超临界萃取物和分子蒸馏蒸出物。因此得出结论连翘发挥解热和镇痛作用的主要有效成分存在于水溶性部分12。2.1连翘苷类的检测方法2.1连翘苷的检测方法雷建林等采用反相高效液相色谱法测定不同产地连翘药材中连翘苷的含量，流动相为乙腈水(25:75)，流速为1.0mL min-1，检测波长为277nm，进样量为1

8、0 L，柱温为30 结果:在选定色谱条件下，连翘苷分离度良好，线性范围为0.4348 4.348 g，r=0.9999，平均回收率98.9%，RSD=0.68%(n=6)13。王玮等分别以拉曼峰的相对峰强和峰面积比值作为参量，以不同采收时期和不同产地的连翘叶为对象，采用内标法进行连翘苷的含量测定。以相对峰强为参量时，选取样品溶液拉曼光谱中连翘苷苯环振动(1319.1 cm-1处的强峰)和溶剂甲醇中 CH3-O 反对称伸缩振动(2 974.7 cm-1)作为定量峰和内标参比峰;以峰面积比值作为参量时，选取连翘苷苯环振动(1 319.1 cm-1处的强峰)和溶剂甲醇中 CH3-O 对称伸缩振动(3

9、 020.9 cm-1)作为定量峰和内标参比峰，分别以定量峰与内标峰强和峰面积的比值为纵坐标，以连翘苷浓度为横坐标绘制标准曲线，并对线性和加样回收率进行比较。结果显示2 种参量作为响应值用于拉曼光谱定量分析，均有良好的线性，相关系数 r 分别为 0.9980 和 0.9976;回收率均在 100.04%101.30%之间，回收完全;对2 种参量的测定结果进行线性拟合，得出回归方程 C2=1.030 4C1 0.033 1，r=0.999 6。结果表明两者测得结果一致，利用2 种参量进行定量分析都能取得准确结果。拉曼光谱用于连翘苷的定量分析具有操作简便 迅速等优点，可以用于中草药的含量测定14。

10、2.2连翘酯苷的检测方法靖会等建立HPLC 法测定连翘中连翘酯苷的含量,采用C18柱,乙腈-水-醋酸(15850.2)为流动相,检测波长为332 nm,柱温室温,流速为1.0 mLmin-1。连翘酯苷在0.0100.810 gL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为100.5%,RSD 1.61%。该法简便快速,重现性好,适于连翘中连翘酯苷的定量分析15。王星等利用近红外光谱法快速测定连翘药材中连翘酯苷含量。其利用 HPLC测定样品中连翘酯苷的含量，运用偏最小二乘(PLS)法建立其含量与 NIR光谱之间的多元校正模型,对未知样品进行含量预测。结果显示建立的定量模型准确性好,

11、内部交叉验证均方差(RMSECV)、内部交叉验证决定系数分别为 0.1221,0.1969。经外部验证,NIR预测值与 HPLC测定值之间的相关系数为 0.1961,预测均方差(RMSEP)为 0.118。得出结论近红外光谱法对连翘中连翘酯苷含量预测结果较好,能满足制药中检测的精度要求,为中药生产过程的在线、无损定量分析提供了依据16。57%其吸附分离连翘酯苷 A 的工艺条件为:上样浓度为0.雷建林等采用反相高效液相色谱法测定不同产地连翘药材中连翘苷的含量，流动相为乙腈水(25:75)，流速为1.连翘苷类的提取分离工艺高学敏等采用回流提取，大孔树脂法分离制备连翘酯苷，并通过正交试验法考察加醇量

12、、回流时间、回流次数、醇浓度4个因素，研究不同类型大孔树脂对连翘酯苷收率的影响，得到连翘酯苷纯度为18.7武果桃，牛国庆，刘红霞等.辽宁医学院学报，,32(1):68-70.连翘药材主要化学成分及药理作用研究综述J.结论是该技术适用于连翘中连翘酯苷 A 粗提取的工业化生产，连翘酯苷 A 纯度可达50%左右11。D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的工艺研究J.高效液相色谱法测定连翘中连翘酯苷的含量J.其方法为用 2,4-二硝基苯酚法比较萃取物、分离物及水提物的解热效果;腹腔注射醋酸溶液法比较萃取物、分离物及水提物的镇痛效果。胡光等采用正交实验法优选乙醇提取连翘苷的工艺，认为提取连翘苷的最佳工艺条

13、件为80%乙醇，料液比为1:8，回流时间2h,共提取2次4。拉曼光谱用于连翘苷的定量分析具有操作简便 迅速等优点，可以用于中草药的含量测定14。1 cm-1处的强峰)和溶剂甲醇中 CH3-O 反对称伸缩振动(2 974.Vahl)的成熟果实。2 g/mL,用 6 BV的 30%乙醇液进行洗脱,二次洗脱后,连翘酯苷的含量可达 60%以上。结语连翘在我国地理分布广，资源丰富，临床疗效确切，具有很好的开发价值。对连翘有效活性成分的进一步研究开发，可以使我国丰富的药用植物资源得到充分的利用，也必将为疾病的治疗提供有效的帮助。参考文献 1 闫丽丽,姜颖.连翘药材主要化学成分及药理作用研究综述J.中国新技

14、术新产品，,11:11.2张海燕.连翘化学成分及药理活性的研究进展 J 中药材，2000，23(10):657 660.3王娅丽，杨建雄，柴渭莉.连翘叶中连翘苷类成分的提取工艺研究 J.西北药学杂志，2006,21(1):92.4胡光，姚志娟.正交实验法优选乙醇提取连翘苷的工艺研究J.黑龙江医药，2004,17(5):41-42.5于春波，秦绪红.大孔吸附树脂法富集连翘中连翘苷的研究J.黑龙江医药，2004,17(2):104-106.6卢静华，刘元媛.连翘中连翘苷超声法提取工艺的研究J.辽宁医学院学报，,32(1):68-70.7武果桃，牛国庆，刘红霞等.两种提取方法对连翘中连翘苷含量的影响

15、J.中医医药杂志，(6):48-50.8王霖娇，盛茂银.青翘和黄翘中连翘酯苷含量的比较及其提取工艺研究J.种子，2006,25(10):29-31.9高学敏，王栋，金鑫等.正交实验优选-大孔树脂分离连翘酯苷的工艺J.中华医学实践杂志，2007,6(1):6-8.10王进东，赵志君,辛俊伟.D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的工艺研究J.山西中医学院学报，,9(3):45-46.11 刘明,王慧森,李更生.HPD-300 型大孔吸附树脂分离纯化连翘中连翘酯苷 A 的工艺研究J.时珍国医国药,12王鹏，胡艳群.连翘提取分离产物的药效学研究J.中药材，,34(5):776-779.13 雷建林,李艳桃,聂会生等.HPLC 法测定不同产地连翘药材中连翘苷的含量J.中华中 医药学刊,30(1):202-203.14 王 玮,席欣欣,杨浩等.拉曼光谱法测定连翘苷含量的探讨J.第二军医大学学报,32(1):62-65.,23(1):68-71.15 靖会,李教社,曹蔚等.高效液相色谱法测定连翘中连翘酯苷的含量J.西北药学杂志，2003,18(4):156-157.16 王星,白雁,陈志红等.近红外光谱法测定连翘中连翘酯苷含量J.中国中药杂志，34(16):2071-2074.谢谢！