第七章体液蛋白质检验课件.ppt

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1、第七章第七章体液蛋白体液蛋白质检验人人类白蛋白分子类白蛋白分子 1实用文档n本章内容概要：本章内容概要：第二第二节 体液蛋白体液蛋白质测定定第一第一节 概述概述2实用文档1、掌握掌握血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白质血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白质（前白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和白（前白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和白蛋白的测定方法和原理。蛋白的测定方法和原理。2、熟悉熟悉急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和纤急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和纤维蛋白原的测定方法。维蛋白原的测定方法。3、了解了解其他蛋白质的来源和生理功能；尿

2、液蛋白和脑脊液其他蛋白质的来源和生理功能；尿液蛋白和脑脊液蛋白的检测蛋白的检测。n本章教学要求：本章教学要求：3实用文档第一第一节 概述概述4实用文档一、血一、血浆蛋白蛋白质的分的分类和功能和功能n组成：成：种种类：1000种种 500种种 200种种含量：含量：g mg g来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂（一）血（一）血浆蛋白蛋白质的的组成、功能及分成、功能及分类实用文档vv营养作用，修补组织蛋白营养作用，修补组织蛋白营养作用，修补组织蛋白营养作用，修补组织蛋白;vv维持血浆胶体渗透压：维持血浆胶体渗透压：维持血浆胶体渗透压：维持血浆胶体渗透压：主要是白蛋白；主要

3、是白蛋白；主要是白蛋白；主要是白蛋白；vv作为作为作为作为PHPH缓冲系统的一部分：缓冲系统的一部分：缓冲系统的一部分：缓冲系统的一部分：酸性或碱性蛋白质；酸性或碱性蛋白质；酸性或碱性蛋白质；酸性或碱性蛋白质；vv运输作用：运输作用：运输作用：运输作用：作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等的载体；药物等的载体；药物等的载体；药物等的载体；vv体液免疫防御系统：体液免疫防御系统：体液免疫防御系统：体液免疫防御系统：作为免疫球蛋白与补体等免疫分子；作为免疫球蛋白与补体等

4、免疫分子；作为免疫球蛋白与补体等免疫分子；作为免疫球蛋白与补体等免疫分子；vv催化作用：催化作用：催化作用：催化作用：酶的本质；酶的本质；酶的本质；酶的本质；vv代谢调控作用；代谢调控作用；代谢调控作用；代谢调控作用；作为底物，酶或中间产物抑制或激活组织作为底物，酶或中间产物抑制或激活组织作为底物，酶或中间产物抑制或激活组织作为底物，酶或中间产物抑制或激活组织蛋白酶；蛋白酶；蛋白酶；蛋白酶；vv参与凝血与纤维蛋白溶解；：参与凝血与纤维蛋白溶解；：参与凝血与纤维蛋白溶解；：参与凝血与纤维蛋白溶解；：除除除除因子外均可。因子外均可。因子外均可。因子外均可。血血浆蛋白蛋白质的功能的功能6实用文档血血

5、浆蛋白蛋白质的分的分类7分离方法分离方法盐析法：白蛋白析法：白蛋白/球蛋白球蛋白（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液）半饱和的硫酸铵溶液）电泳法：泳法：醋酸醋酸纤维素薄膜素薄膜电泳：泳：6种种琼脂糖凝胶脂糖凝胶电泳：泳：13种种聚丙聚丙烯酰胺凝胶胺凝胶电泳：泳：30种种SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种种分分辨辨率率增增高高-+纤维蛋白原蛋白原醋酸醋酸纤维素薄膜素薄膜7实用文档醋醋纤膜膜电泳或泳或琼脂糖脂糖电泳：泳：5个成分个成分 清蛋白清蛋白1球蛋白球蛋白 2球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白 球蛋球蛋白白分辨率高时：可有分辨率高时：可有7个成分个成分 有有1和和2 2

6、中也可有两条中也可有两条聚丙烯酰胺凝胶电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳：可以分出可以分出30多种蛋白质多种蛋白质醋醋纤膜膜电泳泳或或琼脂糖电泳琼脂糖电泳：5个成个成分分清蛋白清蛋白1球蛋白球蛋白 2球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白2.电泳分类法电泳分类法是是临床床实验室常室常用的血用的血浆蛋白蛋白质电泳方法泳方法分辨率高分辨率高时：可有：可有7个成分个成分 有有1和和2 2中也可有两条中也可有两条聚丙烯酰胺凝胶电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳：可以分出可以分出30多种蛋白质多种蛋白质实用文档3.功能分类法功能分类法（1）运输载体类u血浆脂蛋白：包括血浆脂蛋白：包括CMCM、VLDLVLDL、LDLLD

7、L、HDLHDL等等u前清蛋白与清蛋白前清蛋白与清蛋白u甲状腺素结合球蛋白甲状腺素结合球蛋白u皮质素结合球蛋白皮质素结合球蛋白u类固醇激素结合球蛋白类固醇激素结合球蛋白u视黄醛结合蛋白视黄醛结合蛋白u转铁蛋白转铁蛋白u触珠蛋白触珠蛋白u血色素结合蛋白血色素结合蛋白u铜蓝蛋白铜蓝蛋白9实用文档（2）蛋白酶抑制物：包括）蛋白酶抑制物：包括1-抗胰蛋白酶、抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋抗糜蛋白酶、白酶、2-巨球蛋白等巨球蛋白等6种以上种以上（3）血清酶类：血浆固有酶如）血清酶类：血浆固有酶如LCAT等等组织细胞少量释放的细胞内酶组织细胞少量释放的细胞内酶 细胞破裂而进入血循环的细胞破裂而进入血循环的细胞内酶

8、细胞内酶（4）蛋白类激素：胰岛素、胰高血糖素、生长激素等）蛋白类激素：胰岛素、胰高血糖素、生长激素等（5）凝血蛋白类）凝血蛋白类（6）免疫球蛋白类）免疫球蛋白类（7）补体蛋白类）补体蛋白类（2）蛋白酶抑制物）蛋白酶抑制物：包括：包括1-抗胰蛋白酶、抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋抗糜蛋白酶、白酶、2-巨球蛋白等巨球蛋白等6种以上种以上（3）血清酶类：）血清酶类：血浆固有酶如血浆固有酶如LCAT等等组织细胞少量释放的细胞内酶组织细胞少量释放的细胞内酶 细胞破裂而进入血循环细胞破裂而进入血循环的细胞内酶的细胞内酶（4）蛋白类激素：）蛋白类激素：胰岛素、胰高血糖素、生长激素等胰岛素、胰高血糖素、生长激素等（5

9、）凝血蛋白类）凝血蛋白类（6）免疫球蛋白类）免疫球蛋白类（7）补体蛋白类）补体蛋白类还有有许多种多种类的蛋白的蛋白质未被未被认识还有有许多种多种类的蛋白的蛋白质未被未被认识2.功能分类法功能分类法实用文档 1 1.作为运载蛋白作为运载蛋白 2.2.组织蛋白酶抑制物组织蛋白酶抑制物 3.3.在血浆中起催化作用的酶在血浆中起催化作用的酶 4.4.参与代谢调控作用的蛋白质和肽类激素参与代谢调控作用的蛋白质和肽类激素 5.5.参与凝血与纤维蛋白溶解参与凝血与纤维蛋白溶解 6.6.组成体液免疫防御系统（组成体液免疫防御系统（IgIg与补体与补体）所有血浆蛋白质能所有血浆蛋白质能 维持血浆胶体渗透压维持血

10、浆胶体渗透压 组成血液组成血液pHpH缓冲系统缓冲系统（二）血（二）血浆蛋白蛋白质的功能的功能生物生物化学化学实用文档急性时相反应（急性时相反应（acute phase reaction，APR）：血浆血浆蛋白质对急性炎症和组织损伤的非特异性反应。蛋白质对急性炎症和组织损伤的非特异性反应。此时许多蛋白质：如此时许多蛋白质：如1-抗胰蛋白酶、抗胰蛋白酶、1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、铜蓝蛋白、C4、C3、纤维蛋白原和、纤维蛋白原和C-反应蛋白等浓度显著升高或升高，反应蛋白等浓度显著升高或升高，而少数蛋白质如前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白则出现相应下降。而少数蛋白质如前

11、清蛋白、清蛋白、转铁蛋白则出现相应下降。急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白(acute phase reactive protein，APP)：对急性炎症和组织损伤起非特异反应从而出现浓度变对急性炎症和组织损伤起非特异反应从而出现浓度变化的血浆蛋白质。化的血浆蛋白质。增加的蛋白质称为增加的蛋白质称为正向正向APP下降的蛋白质称为下降的蛋白质称为负向负向APP1.急性时相反应急性时相反应（三）影响血（三）影响血浆蛋白蛋白质浓度的因素度的因素12实用文档机体哪些情况会出机体哪些情况会出现急性急性时相反相反应？急性细菌性感染如急性肺炎、链球菌感染性肾炎急性细菌性感染如急性肺炎、链球菌感染性肾炎急性非特

12、异性炎症如风湿性关节炎、类风湿性关急性非特异性炎症如风湿性关节炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病等节炎、风湿性心脏病等急性心肌梗死急性心肌梗死恶性肿瘤恶性肿瘤手术、创伤手术、创伤13实用文档APR的机制的机制v炎症炎症损伤部位部位释放的放的细胞因子，包括白介素、胞因子，包括白介素、肿瘤坏死瘤坏死因子因子和和、干扰素以及血小板活化因子等，、干扰素以及血小板活化因子等，引发肝细引发肝细胞中上述蛋白质合成量的改变。胞中上述蛋白质合成量的改变。v正向正向APPAPP是机体防御机制的一个部分，如：是机体防御机制的一个部分，如：增加的蛋白酶抑制剂控制组织中的酶活性增加的蛋白酶抑制剂控制组织中的酶活性 触珠蛋

13、白保护从破坏红细胞中释放的触珠蛋白保护从破坏红细胞中释放的Hb Hb C C反应蛋白等可活化补体反应蛋白等可活化补体v负向负向APPAPP多作为营养蛋白，此时合成减少，可为合成正向多作为营养蛋白，此时合成减少，可为合成正向APPsAPPs提供更多的氨基酸原料。提供更多的氨基酸原料。14实用文档 APR的时相的时相vC-反应蛋白：首先升高反应蛋白：首先升高v1-1-酸性糖蛋白：酸性糖蛋白：1212小时内也升高小时内也升高v1-1-抗胰蛋白酶、触珠蛋白、抗胰蛋白酶、触珠蛋白、C4C4和纤维蛋白原然后升和纤维蛋白原然后升高高vC3C3和铜蓝蛋白：最后是升高和铜蓝蛋白：最后是升高v通常在通常在2 25

14、 5天内这些天内这些APPsAPPs达到最高值达到最高值15实用文档测定定APP的临床意义的临床意义帮助监测炎症的发生、变化和观察治疗反应，帮助监测炎症的发生、变化和观察治疗反应，尤其是那些升高最早和最多的蛋白质尤其是那些升高最早和最多的蛋白质16实用文档30二、血清蛋白二、血清蛋白质电泳泳组分的分的临床分析床分析血血浆蛋白蛋白质和血清蛋白和血清蛋白质有何不同？有何不同？血血浆：为生理状况生理状况血清：为常用检测标本血清：为常用检测标本血血浆蛋白质和蛋白质和血清血清蛋白质有何不同？蛋白质有何不同？血浆：为生理状况血浆：为生理状况血清：为常用检测标本血清：为常用检测标本实用文档31（一）血清蛋白

15、（一）血清蛋白质电泳的正常泳的正常组分及其含量分及其含量清蛋白：清蛋白：5768 1球球蛋白：蛋白：1.05.7 2球蛋白：球蛋白：4.911.2 球蛋白：球蛋白：713 球蛋白：球蛋白：9.818.2醋醋纤膜膜电泳正常百分含量泳正常百分含量清蛋白：清蛋白：5768 1球蛋白：球蛋白：1.05.7 2球蛋白：球蛋白：4.911.2 球蛋白：球蛋白：713 球蛋白：球蛋白：9.818.2醋醋纤膜或膜或琼脂糖脂糖电泳正常区泳正常区带区区带图谱扫描描图谱kk实用文档实用文档实用文档1.肾病综合征肾病综合征2.肝硬肝硬化化正常正常图谱典型的典型的-桥桥不典型不典型-桥桥IgG型型IgA型型3.多发性骨

16、髓瘤多发性骨髓瘤2典型的异常典型的异常电泳泳图谱及其及其扫描曲描曲线实用文档（四）（四）球蛋白增多与球蛋白增多与M蛋白蛋白Ig多克隆性增多：多克隆性增多：区带呈弥散性升高区带呈弥散性升高见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞 疾疾病或寄生虫感染。病或寄生虫感染。Ig单克隆性增多单克隆性增多M蛋白：蛋白：区带局部有深染窄带区带局部有深染窄带浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时，浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时，异常浆细胞单克异常浆细胞单克隆增殖，隆增殖，产生大量单克隆产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段，或轻链或重链片段，病病人血清或尿液中可出现结构单一的人血清或

17、尿液中可出现结构单一的M蛋白蛋白Ig多克隆性增多：多克隆性增多：区带呈弥散性升高区带呈弥散性升高见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞 疾病或寄生虫感染。疾病或寄生虫感染。Ig单克隆性增多单克隆性增多M蛋白：蛋白：区带局部有深染窄区带局部有深染窄带带浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时，浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时，异常浆细胞单异常浆细胞单克隆增殖，克隆增殖，产生大量产生大量单克隆单克隆Ig或或轻链轻链或或重链重链片段，片段，病人血清或尿液中可出现结构单一的病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白蛋白22实用文档二、血二、血浆蛋白蛋白质（一）前白蛋白（一）前

18、白蛋白（PAPA）（二）白蛋白（二）白蛋白（ALBALB）（三）（三）1-1-酸性糖蛋白酸性糖蛋白（AAGAAG）（四）甲胎蛋白（四）甲胎蛋白(AFP)(AFP)（五）结合珠蛋白（五）结合珠蛋白(Hp)(Hp)（六）（六）2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG)(AMG)（七）铜蓝蛋白（七）铜蓝蛋白(CER/CP)(CER/CP)（八）转铁蛋白（八）转铁蛋白(TRF)(TRF)（九）（九）2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG)(BMG)（十）（十）C-C-反应蛋白质反应蛋白质(CRP)(CRP)23实用文档n结构：构：MW=54000，四个相同亚基构成的四聚体。，四个相同亚基构成的四聚体。n理化性质：理

19、化性质：p4.7，肝细胞合成，肝细胞合成，半寿期半寿期12 小时小时。n测定方法：测定方法：免疫比浊法免疫比浊法免疫扩散技术免疫扩散技术。24实用文档n功能：功能：营养指标，载体功能（甲状腺素维生素）。营养指标，载体功能（甲状腺素维生素）。n临床意义临床意义：1.作为营养不良的早期指标；作为营养不良的早期指标；2.作为肝功能不全的指标，比作为肝功能不全的指标，比Alb更灵敏；更灵敏；3.负性急性时相反应蛋白，负性急性时相反应蛋白，急性炎症，恶性肿瘤，急性炎症，恶性肿瘤，肝硬化及肝硬化及肾炎等情况下，肾炎等情况下，PA迅速降低。迅速降低。n参考值参考值：0.180.45g/L。25实用文档 急性

20、急性时相反相反应蛋白蛋白26实用文档27实用文档28实用文档n结构构：585个个aa残基构成的单链多肽，残基构成的单链多肽，MW=66458，含，含17个个二二硫键。硫键。n理化性质理化性质：pI=45.8，肝细胞合成但不储存，半衰期为，肝细胞合成但不储存，半衰期为15-19 天，占总蛋白的天，占总蛋白的40%60%，p7.4时带负电。时带负电。n测定方法测定方法：色素结合法：色素结合法:溴甲酚绿（溴甲酚绿（BCG），溴甲酚紫），溴甲酚紫（BCP）,盐析等。盐析等。（二）白蛋白（二）白蛋白（ALB）急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白29实用文档n功能功能：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆

21、渗透压：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆渗透压和正常和正常p值。值。n临床意义临床意义：合成受食物影响，敏感性较低。：合成受食物影响，敏感性较低。降低降低:在营养不良，肝功不全，急慢性肝疾病时在营养不良，肝功不全，急慢性肝疾病时;增高增高:少见少见,假性升高。假性升高。n参考值参考值：35-50 g/30实用文档n功能功能：蛋白酶抑制物（具有：蛋白酶抑制物（具有90的抑制蛋白酶活力）。如的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，弹性蛋白酶，但此抑制作用有明显的糜蛋白酶，弹性蛋白酶，但此抑制作用有明显的p依赖性。依赖性。n临床意义：临床意义：降低：血浆降低：血浆AAT仅见于胎儿呼吸迫综合症。仅见于

22、胎儿呼吸迫综合症。升高：炎症、术后，某些激素治疗后。升高：炎症、术后，某些激素治疗后。n参考值：参考值：0.831.99g/L 31实用文档n结构：构：181个个aa残基构成的单链多肽，残基构成的单链多肽，MW=4万，万，含含45%的糖，的糖，其中唾液酸占其中唾液酸占11%12%。n理化性质：理化性质：pI值值2.73.5，肝合成，脓毒症时粒细胞和单核细，肝合成，脓毒症时粒细胞和单核细胞及某些肿瘤组织也可合成。胞及某些肿瘤组织也可合成。位于位于1-球蛋白区带。球蛋白区带。n测定方法：测定方法：免疫化学法（扩散免疫化学法（扩散,浊度）浊度）,化学法（间接法），化学法（间接法），ELISA法等法等

23、（三）（三）1-酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAG）急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 32实用文档n功能：功能：与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集影响胶原纤维形成；参与脂类运输。影响胶原纤维形成；参与脂类运输。n临床意义：临床意义：升高：急性炎症，组织损伤，风湿，肿瘤，升高：急性炎症，组织损伤，风湿，肿瘤，AMI，溃结时；，溃结时；降低：营养不良降低降低：营养不良降低,严重肝损伤和雌激素作用。严重肝损伤和雌激素作用。n参考值：参考值：.252.0g/L。33实用文档n结构：构：590个个aa残基构成的单链多肽，残基构成的单链多肽，MW=6.5万

24、万，含万万，含4%的糖。的糖。n理化性质理化性质：pI值值.7-.8，在白蛋白和，在白蛋白和1-球蛋白之间。胎儿球蛋白之间。胎儿肝卵黄囊合成，成人量微，升高由于肿瘤细胞合成。肝卵黄囊合成，成人量微，升高由于肿瘤细胞合成。n测定方法：测定方法：免疫化学法（扩散免疫化学法（扩散,火箭电泳）火箭电泳）,ELISA等等（四）（四）甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP)34实用文档n功能：功能：胎儿血浆主要蛋白质，调节肝细胞生长和脑细胞发胎儿血浆主要蛋白质，调节肝细胞生长和脑细胞发育；抑制细胞和体液的免疫反应；维持正常妊娠，防止母婴育；抑制细胞和体液的免疫反应；维持正常妊娠，防止母婴排斥。排斥。n临床意义：临床意义

25、：胎儿产前监测（羊水或母血）胎儿产前监测（羊水或母血）增高：原发性肝癌患者诊断和鉴别（增高：原发性肝癌患者诊断和鉴别（80%原发增高），原发增高），其他其他癌症也可见增高。癌症也可见增高。n参考值：参考值：20-100g/L(成人成人)5g/L(新生儿新生儿)35实用文档n结构：构：两对肽链形成四聚体，有变异体。两对肽链形成四聚体，有变异体。n理化性质：理化性质：肝合成，肝合成，pI 值值为为4.1，电泳位，电泳位a2-球蛋白区带球蛋白区带n测定方法：测定方法：电泳法，免疫化学法（扩散电泳法，免疫化学法（扩散,浊度）浊度）,化学法等化学法等（五）（五）结合珠蛋白合珠蛋白(Hp)急性时相反应蛋白

26、急性时相反应蛋白 36实用文档n功能：功能：与红细胞中释出自由与红细胞中释出自由Hb 结合结合,防止防止Hb 从尿中丢失保存从尿中丢失保存铁铁,急性溶血后一周再生恢复。急性溶血后一周再生恢复。高效的过氧化物酶。高效的过氧化物酶。需铁细菌的天然抑菌剂。需铁细菌的天然抑菌剂。n临床意义：临床意义：升高：急性时相反应；升高：急性时相反应；降低：血管内溶血时；雌激素作用。降低：血管内溶血时；雌激素作用。n参考值参考值：0.5-2.2 g/L37实用文档n结构：构：MW=6280 万万,分子量最大，由四个相同的亚基组分子量最大，由四个相同的亚基组成，含糖量约。成，含糖量约。n理化性质：理化性质：肝细胞与

27、单核吞噬细胞系统中合成，半寿期肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，半寿期5 天。天。n测定方法：测定方法：免疫化学等免疫化学等（六）（六）2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG)不属于急性不属于急性时相反相反应蛋白蛋白38实用文档n功能：功能：与多种分子和离子结合，影响蛋白水解酶活性（主要与多种分子和离子结合，影响蛋白水解酶活性（主要的蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶的作用）。的蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶的作用）。n临床意义临床意义：婴幼儿及儿童比成人高；：婴幼儿及儿童比成人高；升高：雌激素，低蛋白血症尤其是肾病综合征时，可显升高：雌激素，低蛋白血症尤其是肾病综合征时，可显著升高以维持血浆胶体渗透压；

28、著升高以维持血浆胶体渗透压；降低：胰腺炎及前列腺癌时。降低：胰腺炎及前列腺癌时。n参考值：参考值：1.31-2.93g/L39实用文档n结构：构：MW=12-16 万万,1046个个aa残基构成的单链多肽，含残基构成的单链多肽，含糖约，每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。糖约，每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。n理化性质理化性质：肝合成：肝合成,巨噬细胞和淋巴细胞合成少量；巨噬细胞和淋巴细胞合成少量；pI 值值为为4.4，具遗传基因多态性。具遗传基因多态性。n测定方法测定方法：免疫化学（扩散或比浊）等：免疫化学（扩散或比浊）等（七）（七）铜蓝蛋白铜蓝蛋白(CER/CP)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白

29、40实用文档n功能：功能：具氧化酶活性且起抗氧化剂作用，铜的无毒代谢库具氧化酶活性且起抗氧化剂作用，铜的无毒代谢库n临床意义：临床意义：增加增加感染感染,创伤创伤,肿瘤肿瘤;降低降低-营养不良，严重肝病及肾综营养不良，严重肝病及肾综;协助诊断协助诊断Wilson病（肝豆病（肝豆状核变性）状核变性）n参考值：参考值：0.21-0.53g/L41实用文档n结构构：MW=7.7 万万,单链糖蛋白，含糖约。单链糖蛋白，含糖约。n理化性质：理化性质：肝细胞合成，肝细胞合成，pI 值值为为5.5-5.9,半寿期半寿期7 天，可逆天，可逆结合多价离子如结合多价离子如Fe、Cu、Zn、Co 等，一分子等，一分

30、子TRF 可结合两可结合两个三价铁。个三价铁。n测定方法：测定方法：免疫扩散法，放免法和免疫比浊法等。免疫扩散法，放免法和免疫比浊法等。（八）（八）转铁蛋白转铁蛋白(TRF/Tf)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 42实用文档n功能：功能：运输铁。运输铁。n临床意义：临床意义：血血TRF 浓度受铁供应调节，缺铁浓度受铁供应调节，缺铁TRF升高，铁升高，铁治疗后恢复。可用于治疗后恢复。可用于贫血的诊断贫血的诊断（缺铁性低色素性贫血（缺铁性低色素性贫血TRF升高，再障时升高，再障时TRF正常或者降低）正常或者降低）和对治疗的监测和对治疗的监测。降低降低:急性时相反应、慢性肝病、营养不良及蛋白丢失时

31、；急性时相反应、慢性肝病、营养不良及蛋白丢失时；升高：妊娠或雌激素会使其降低升高：妊娠或雌激素会使其降低;缺铁性低色素贫血。缺铁性低色素贫血。n参考值：参考值：2.5-4.3 g/L(成人成人)1.30-2.75 g/L(新生儿新生儿)43实用文档n结构：构：MW=11800，100个个aa残基构成的单链多肽，分子中残基构成的单链多肽，分子中含一对二硫键，不含糖。含一对二硫键，不含糖。n理化性质：理化性质：pI 值值为为5.7，淋巴细胞合成，存在细胞表面，特别，淋巴细胞合成，存在细胞表面，特别是淋巴和肿瘤细胞。释放入血循环。半衰期是淋巴和肿瘤细胞。释放入血循环。半衰期107 分钟，几乎由分钟，

32、几乎由肾小管回收。肾小管回收。n测定方法：测定方法：放射免疫化学等。放射免疫化学等。（九）（九）2 微球蛋白微球蛋白(BMG)44实用文档n功能：功能：分子量小，可自由通过肾小球滤过膜，在肾小管分子量小，可自由通过肾小球滤过膜，在肾小管几乎全部重吸收，可监测肾小管功能；是几乎全部重吸收，可监测肾小管功能；是HLA（人类白细胞抗原）链的轻链部分。链的轻链部分。n临床意义：临床意义：增高：肾功能衰竭，炎症及肿瘤时。增高：肾功能衰竭，炎症及肿瘤时。n参考值：参考值：1.0 2.5 mg/L（血浆）（血浆）45实用文档n性性质：因在急性炎症病人血清中出现，可结合肺炎球菌细胞因在急性炎症病人血清中出现，

33、可结合肺炎球菌细胞壁壁C-多糖的蛋白质而命名。多糖的蛋白质而命名。n结构：结构：MW11.5-14 万万，分子含个相同的亚基，亚基间靠，分子含个相同的亚基，亚基间靠非共价键连接成圆盘状多聚体。非共价键连接成圆盘状多聚体。n理化性质：理化性质：肝合成，肝合成，pI 值值为为6.2，电泳位于，电泳位于 区带区带。n测定方法：测定方法：半定量沉淀法（早），免疫化学法。半定量沉淀法（早），免疫化学法。（十）（十）C-反应蛋白质反应蛋白质(CRP)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 实用文档n功能：功能：结合多糖，磷脂和核酸；激活补体，抗凝。结合多糖，磷脂和核酸；激活补体，抗凝。n临床意义：临床意义：n第

34、一个认定的急性时相反应蛋白第一个认定的急性时相反应蛋白,是急性时相反应的一个敏是急性时相反应的一个敏感指标感指标，在、创伤、感染、外科手术、肿瘤浸润时含，在、创伤、感染、外科手术、肿瘤浸润时含量迅速升高，达到正常的量迅速升高，达到正常的2000倍。倍。nCRP是非特异性指标是非特异性指标，需结合临床病史。，需结合临床病史。n参考值：参考值：8.0mg/L（血浆）（血浆）47实用文档n急性急性时相反相反应蛋白分蛋白分类：升高：升高：其他种蛋白质。其他种蛋白质。降低：降低：前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白48实用文档第二第二节 体液蛋白体液蛋白质测定定总蛋白蛋白测定定个个别蛋白

35、质的测定蛋白质的测定蛋白分离蛋白分离测定技定技术p发展展趋势:p测定体液定体液标本本:血血浆：普遍：普遍尿液，尿液，脑脊液和胸腹水等脊液和胸腹水等：有选择性的组织病变检查：有选择性的组织病变检查49实用文档免疫化学法特异定量个免疫化学法特异定量个别蛋白蛋白质p体液蛋白体液蛋白质的的测定方法概括：定方法概括：常常规：免疫：免疫浊度法、免疫度法、免疫扩散法，免疫散法，免疫电泳法，泳法，微量：放射免疫测定（微量：放射免疫测定（RIA），酶免疫测定法），酶免疫测定法（ELA/ELISA）50实用文档电泳泳测定：定：定量化学定量化学测定定TPr，Alb电泳泳组成成图谱半定量半定量定量定量染料染料结合法，

36、合法，UV法，折光法等法，折光法等51实用文档一、血清一、血清总总蛋白蛋白测测定定n假假设：、纯多多肽链，含氮量平均，含氮量平均为16%、各种蛋白质与化学试剂反应性一致，仅为相对定量、各种蛋白质与化学试剂反应性一致，仅为相对定量52实用文档n测定依据：蛋白定依据：蛋白质测定一般利用蛋白定一般利用蛋白质以下的以下的结构或性构或性质1、元素组成测定：、元素组成测定：含含N稳定；稳定；2、重复的肽链结构：、重复的肽链结构：具有多个肽键；具有多个肽键；3、酪氨酸和色氨酸与、酪氨酸和色氨酸与Folin-酚试剂反应酚试剂反应显色显色或或UV 吸收；吸收；4、与色素结合的能力：、与色素结合的能力：与染料以离

37、子键或共价键连接；与染料以离子键或共价键连接；5、沉淀后借浊度测定：、沉淀后借浊度测定：光度计测定；光度计测定；6、光折射测定：、光折射测定：折射仪测定。折射仪测定。53实用文档n方法方法：1.凯氏定氮法参考方法凯氏定氮法参考方法2.双缩脲法双缩脲法(推荐推荐)3.酚试剂法酚试剂法4.散射比浊法散射比浊法5.染料结合法染料结合法6.UV 法法.折光测定法折光测定法54实用文档1.凯氏定氮法参考标准方法凯氏定氮法参考标准方法(0.05mg N 0.3g pro)消化消化用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵；（耗时）用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵；（耗时）蒸馏蒸馏用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发；用碱性溶液碱

38、化消化液并蒸馏挥发；吸收吸收用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使H+）滴定滴定用已标定的无机酸滴用已标定的无机酸滴（使（使H+恢复），恢复），计算总氮量计算总氮量定蛋白定蛋白（总氮量总氮量-非蛋白氮）非蛋白氮）6.25=蛋白含量蛋白含量纳氏氏试剂：碘化汞和碘化：碘化汞和碘化钾的碱性溶液与氨反的碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶生成淡黄棕色胶态化合物，其色度与氨氮含化合物，其色度与氨氮含量成正比。量成正比。n原理：原理：55实用文档n评价：价：优点：准确度高，精密度点：准确度高，精密度高，灵敏度高，是公高，灵敏度高，是公认的参的参考方法。考方法。缺点：操作复杂，费时，缺点

39、：操作复杂，费时，不适合常规检测，血清各蛋不适合常规检测，血清各蛋白含氮量会有所变化尤其是白含氮量会有所变化尤其是疾病时。疾病时。n应用：用：标准蛋白的标定标准蛋白的标定及校正其它常规方法及校正其它常规方法56实用文档2.双缩脲法双缩脲法n原理：原理：蛋白蛋白质中的中的肽键（-CONH-）在在碱性碱性溶液中能与溶液中能与Cu2+作用而产生作用而产生紫红色络合物紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。条件：至少含两个条件：至少含两个肽键（-CONH-）基团才能和）基团才能和Cu2+形

40、成络合物形成络合物,氨基酸及二肽无反氨基酸及二肽无反应应,三肽以上才能反应。三肽以上才能反应。双缩脲生成加热加热NH322H180022222N 端端C 端端57实用文档n评价：价：优点：点：简便，准确，重复性好，便，准确，重复性好，10g-120g/L线性好，线性好，特异性与精密度好，批内特异性与精密度好，批内CV%2%，显色稳定。，显色稳定。缺点：灵敏度较差，对蛋白质含量低的体液标本不适缺点：灵敏度较差，对蛋白质含量低的体液标本不适合。合。n应用：用：常规推荐方法。手工或上机使用。常规推荐方法。手工或上机使用。58实用文档3.酚试剂法酚试剂法n原理：原理：蛋白蛋白质分子中的分子中的酪氨酸残

41、基酪氨酸残基和和色氨酸残基色氨酸残基能够和能够和酚试剂酚试剂中的中的磷钨酸磷钨酸-磷钼酸磷钼酸反应生成蓝色化合物，反应生成蓝色化合物，Lowry改良法：改良法：在在酚试剂中加入酚试剂中加入Cu2+（75%呈色），提呈色），提高了呈色的灵敏度，为高了呈色的灵敏度，为双缩脲法的双缩脲法的100倍左右。倍左右。59实用文档n评价及价及应用：用：优点：操作点：操作简单，改良法灵敏度高（，改良法灵敏度高（10g-60g），适合，适合测定蛋白含量少的标本。测定蛋白含量少的标本。缺点：各种蛋白质缺点：各种蛋白质酪氨酸酪氨酸和和色氨酸色氨酸比例不同，只适合测定比例不同，只适合测定单一蛋白质。受一些药物干扰。单

42、一蛋白质。受一些药物干扰。60实用文档4.比浊法比浊法n原理：原理：n评价及价及应用：用：优点：点：简便不需特殊便不需特殊仪器。器。缺点：浊度形成的干扰因素多（加试剂方法，反应温度，蛋缺点：浊度形成的干扰因素多（加试剂方法，反应温度，蛋白絮状沉淀等）白絮状沉淀等）某些酸某些酸类（磺基水（磺基水杨酸等）和血清蛋白酸等）和血清蛋白质结合合产生生沉淀，沉淀，测其其浊度，与度，与标准准对比，可求蛋白含量。比，可求蛋白含量。61实用文档5.染料结合法染料结合法在酸性在酸性环境下，境下，带正正电的蛋白的蛋白质（-NH3+)与染料的阴与染料的阴离子产生颜色反应，使染料的吸收峰改变，可既而用分光光度离子产生颜

43、色反应，使染料的吸收峰改变，可既而用分光光度法比色测定。法比色测定。n原理：原理：常用染料：常用染料：氨基黑，考马斯亮蓝等氨基黑，考马斯亮蓝等n评价及价及应用：用：优点：操作点：操作简便，重复性好，灵敏度高，且干便，重复性好，灵敏度高，且干扰因素少。因素少。缺点：特异性不高；不同蛋白质和染料的结合力不一致，标准物不易缺点：特异性不高；不同蛋白质和染料的结合力不一致，标准物不易确定。确定。62实用文档6.紫外分光光度法紫外分光光度法蛋白质分子中的蛋白质分子中的酪氨酸酪氨酸和和色氨酸等芳香族氨基酸可使色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在蛋白质溶液在280nm处有一吸收峰处有一吸收峰。可用于测定蛋白

44、质但需可用于测定蛋白质但需避免核酸干扰。避免核酸干扰。（1）Lowry-Kalcker 公式公式蛋白质浓度（蛋白质浓度（mg/ml）=1.45 A 280-0.74 A 260（2）Warburg-Christian 公式公式蛋白质浓度（蛋白质浓度（mg/ml）=1.55 A 280-0.76 A 260 n原理：原理：63实用文档n评价及价及应用：用：优点：敏感而点：敏感而简便，可便，可保留蛋白生物活性保留蛋白生物活性，常用与较纯的酶，常用与较纯的酶和免疫球蛋白。需和免疫球蛋白。需紫外分光光度计及石英比色皿。紫外分光光度计及石英比色皿。缺点：各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同；在缺点：各

45、种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm测定易受游离色测定易受游离色aa和酪和酪aa以及尿酸和胆红素的干扰；以及尿酸和胆红素的干扰；导致准确性和特异性受影响。导致准确性和特异性受影响。措施：在措施：在220-225nm波长区域，用波长区域，用0.15mol/l的的NaCl稀释稀释1000-2000倍可消除干扰。倍可消除干扰。64实用文档7.折光测定法折光测定法溶解在溶液中的固体可增加溶液的光折射率，在溶解在溶液中的固体可增加溶液的光折射率，在固定波长和温度下，光折射率和血清中蛋白质含量成正比。固定波长和温度下，光折射率和血清中蛋白质含量成正比。n原理：原理：n评价及价及应用：用：优点

46、：点：简便、快速，易掌握，重复性便、快速，易掌握，重复性较好，适合好，适合临床急床急诊，体，体检筛查和胸腹水蛋白和胸腹水蛋白质测定。定。缺点：准确性较差，易受高血脂症，高胆红素血症以及溶血等因素影缺点：准确性较差，易受高血脂症，高胆红素血症以及溶血等因素影响，会由于响，会由于A/G比值变化而产生误差。比值变化而产生误差。65实用文档p参考范参考范围：成人：成人6080g/Lp临床意床意义：总蛋白升高：蛋白升高：总蛋白降低蛋白降低：丢失过多丢失过多消耗增加消耗增加白蛋白合成减少白蛋白合成减少水肿水肿真性升高：真性升高：MM、巨球蛋白血症、自身免疫性疾病等、巨球蛋白血症、自身免疫性疾病等假性升高：

47、机体明假性升高：机体明显失水，失水，总蛋白含量相蛋白含量相对升高，升高，A/G几乎不变几乎不变66实用文档二、血清白蛋白二、血清白蛋白测测定定p方法方法：1.染料结合法染料结合法(推荐推荐)2.盐析法盐析法3.电泳法电泳法4.免疫化学法免疫化学法67实用文档1.染料结合法染料结合法(推荐推荐)n原理原理:血清血清ALB可通过可通过离子键或疏水键离子键或疏水键与包括与包括染料染料在内的各种在内的各种有机离子结合有机离子结合,而而GLB很少结合外源性染料很少结合外源性染料,可在可在不分离不分离ALB与与GLB的情况下直接测定的情况下直接测定ALB。染料染料BCGBCP优点点缺点缺点易于和非人源性白

48、蛋白易于和非人源性白蛋白结合合与白蛋白与白蛋白结合特异性合特异性较差差与与非人源性白蛋白结合力弱非人源性白蛋白结合力弱与白蛋白结合特异性好与白蛋白结合特异性好在在30秒内测可提高特异性秒内测可提高特异性68实用文档n应用及用及评价价:严格控制反格控制反应时间的的BCG法法既适合既适合手工手工也适合也适合自动自动化分析。化分析。临床上推荐使用临床上推荐使用。69实用文档n原理原理:盐析是由于加入大量的中性盐破坏了蛋白质的盐析是由于加入大量的中性盐破坏了蛋白质的水化膜、水化膜、中和其所带的中和其所带的电电荷荷从而使蛋白质分子聚集而从而使蛋白质分子聚集而沉淀沉淀析出。析出。各种蛋白质的各种蛋白质的亲

49、水性亲水性和和带电荷不同带电荷不同，故盐析时所需，故盐析时所需盐浓度与盐浓度与pH不同。不同。GLB在生理在生理pH下带电荷及水化膜比下带电荷及水化膜比ALB少少，可被较低浓度中性盐沉淀。，可被较低浓度中性盐沉淀。2.盐析法盐析法中性中性盐：硫酸铵、硫酸钠等硫酸铵、硫酸钠等70实用文档n应用及用及评价价:操作繁操作繁琐，不宜自动化，基本不用不宜自动化，基本不用71实用文档3.电泳法电泳法n操作：操作：醋醋纤膜膜电泳泳染色染色晾干晾干透明透明光密度光密度仪扫描描洗脱洗脱比色比色染色染色分离分离测得蛋白得蛋白组分百分比分百分比计算得出各种蛋白算得出各种蛋白质含量含量半定量半定量定量定量72实用文档

50、n评价及价及应用：用：优点点：电泳特异性好，可了解血清蛋白质全貌：电泳特异性好，可了解血清蛋白质全貌缺点缺点：电泳技术繁琐，不易自动化；白蛋白与染料：电泳技术繁琐，不易自动化；白蛋白与染料亲和力高会导致结果偏高亲和力高会导致结果偏高73实用文档4.免疫化学法免疫化学法n原理及特点原理及特点:n应用：用：特异性高特异性高,但成本较高但成本较高,费时费时,生化检验用的不多生化检验用的不多.74实用文档p参考范参考范围:成人成人3555g/L.p临床意床意义：白蛋白升高：白蛋白升高：白蛋白降低：白蛋白降低：丢失过多丢失过多消耗增加消耗增加白蛋白合成减少白蛋白合成减少水肿水肿先天性先天性ALB缺乏病缺