微生物的分离和纯培养-中图版课件.ppt

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1、微生物的分离和纯培养微生物的分离和纯培养（实验（实验11）目的要求目的要求1学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握统计分析样品中微生物的种类和数量的统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。方法。2学会从菌落及培养形态特征区分细菌、学会从菌落及培养形态特征区分细菌、放线菌和霉菌。放线菌和霉菌。3掌握几种纯化微生物的基本操作技术掌握几种纯化微生物的基本操作技术（制作平板、连续稀释、平板划线）（制作平板、连续稀释、平板划线）实实 验验 原原 理理自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起，自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生要研究

2、某种微生物的特性，必须从混杂的微生物类群中分离它，使该微生物处于物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态纯培养状态纯培养状态纯培养状态这种获得纯培养的方法称为这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯微生物的分离与纯微生物的分离与纯微生物的分离与纯化化化化。l 纯种：是微生物的某一个种或株，培养中的纯种：是微生物的某一个种或株，培养中的所有细胞有着共同的来源或仅是同一细胞的后代。所有细胞有着共同的来源或仅是同一细胞的后代。为了获得单个菌体，要把待分离的材料进行适为了获得单个菌体，要把待分离的材料进行适当的稀释，按其生长所需要的条件，使其在平当的稀释，按其生长所需要的条件，使其在平板上，单个菌体繁

3、殖成单个菌落。板上，单个菌体繁殖成单个菌落。由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，将样品在不同培养基制成的平板上进行分同，将样品在不同培养基制成的平板上进行分离，依据菌落形态的差异，可以区分离，依据菌落形态的差异，可以区分细菌细菌、放放线菌线菌和和霉菌霉菌三大类群，并计算出其数量。三大类群，并计算出其数量。菌菌 落落 特特 征征大小、形状大小、形状大小、形状大小、形状（圆形，假根状，不规则状）（圆形，假根状，不规则状）表面特征表面特征表面特征表面特征（光滑，皱缩，颗粒状，龟裂状，同心圆状）（光滑，皱缩，颗粒状，龟裂状，同心圆状）隆起形状隆起形状隆起

4、形状隆起形状（扩展，台状，凹面，凸面，乳头状）（扩展，台状，凹面，凸面，乳头状）边缘情况边缘情况边缘情况边缘情况（整齐，波状，裂叶状，锯齿状）（整齐，波状，裂叶状，锯齿状）表面光泽表面光泽表面光泽表面光泽（无光泽，金属光泽，闪光）（无光泽，金属光泽，闪光）质地质地质地质地（油脂状，膜状，粘脆）（油脂状，膜状，粘脆）颜色、透明度颜色、透明度颜色、透明度颜色、透明度（P6 图 2-3）霉菌菌落霉菌菌落酵母菌落酵母菌落青霉青霉曲霉曲霉大肠杆菌菌落大肠杆菌菌落伊红美蓝培养基伊红美蓝培养基A A：诺尔斯氏链霉菌：诺尔斯氏链霉菌：诺尔斯氏链霉菌：诺尔斯氏链霉菌B B：皮疽诺卡氏菌：皮疽诺卡氏菌：皮疽诺卡氏

5、菌：皮疽诺卡氏菌C C：酒红指孢囊菌：酒红指孢囊菌：酒红指孢囊菌：酒红指孢囊菌D D：游动放线菌：游动放线菌：游动放线菌：游动放线菌E E：小单胞菌：小单胞菌：小单胞菌：小单胞菌 F F：马杜拉放线菌：马杜拉放线菌：马杜拉放线菌：马杜拉放线菌 放线菌菌落放线菌菌落放线菌菌落放线菌菌落A A：卡特利链霉菌：卡特利链霉菌：卡特利链霉菌：卡特利链霉菌B B：弗氏链霉菌：弗氏链霉菌：弗氏链霉菌：弗氏链霉菌C C：吸水链霉菌金泪亚种：吸水链霉菌金泪亚种：吸水链霉菌金泪亚种：吸水链霉菌金泪亚种D D：卡那霉素链霉菌：卡那霉素链霉菌：卡那霉素链霉菌：卡那霉素链霉菌E E：除虫链霉菌：除虫链霉菌：除虫链霉菌：

6、除虫链霉菌F F：生磺酸链霉菌：生磺酸链霉菌：生磺酸链霉菌：生磺酸链霉菌产抗菌素的放线菌产抗菌素的放线菌产抗菌素的放线菌产抗菌素的放线菌实实 验验 材材 料料1 土壤样品土壤样品2 培养基培养基（1）牛肉膏蛋白胨培养基）牛肉膏蛋白胨培养基（2）高氏）高氏1号培养基号培养基（3）马铃薯培养基（）马铃薯培养基（PDA培养基）培养基）实验方法与步骤实验方法与步骤1.平板的制作：平板的制作：将已灭菌的培养基融化，冷却到将已灭菌的培养基融化，冷却到40-50，倒平板。倒平板。2.连续稀释法分离土壤中的微生物连续稀释法分离土壤中的微生物计算每克土样中微生物的数量计算每克土样中微生物的数量选择刚好能把菌分开

7、，而稀释倍数最低的选择刚好能把菌分开，而稀释倍数最低的平板（含菌落数平板（含菌落数30300个）计数。个）计数。微生物的细胞个数（个微生物的细胞个数（个/g）平均菌落数平均菌落数稀释倍数稀释倍数土壤克数土壤克数微生物分离基本方法及原则微生物分离基本方法及原则l分离微生物时一般是根据该微生物对营养，分离微生物时一般是根据该微生物对营养，pH，氧气，温度等要求的不同，供给它们合适的，氧气，温度等要求的不同，供给它们合适的条件或加入某种抑制剂，形成只利于该菌种生条件或加入某种抑制剂，形成只利于该菌种生长，不利于其他菌种生长的环境，从而淘汰不长，不利于其他菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。需要的菌

8、种。(1)分离分离细菌细菌细菌细菌：取：取10-7、10-8两个稀释度各两个稀释度各0.2ml加入加入培养皿中，涂布培养皿中，涂布牛肉膏蛋白胨平板牛肉膏蛋白胨平板牛肉膏蛋白胨平板牛肉膏蛋白胨平板，3737倒置培倒置培养，养，24小时。小时。(2)(2)分离分离霉菌霉菌霉菌霉菌：取：取10-5、10-6两个稀释度各两个稀释度各0.2ml，涂，涂布布土豆平板土豆平板土豆平板土豆平板（倒平板前在土豆培养基中加入倒平板前在土豆培养基中加入倒平板前在土豆培养基中加入倒平板前在土豆培养基中加入80%80%的乳酸的乳酸的乳酸的乳酸5 5滴滴滴滴），），2828倒置培养，倒置培养，34天。天。(3)分离分离放

9、线菌放线菌放线菌放线菌：取：取10-5、10-6两个稀释度各两个稀释度各0.2ml，（制备菌悬液时，应先加入制备菌悬液时，应先加入制备菌悬液时，应先加入制备菌悬液时，应先加入10%10%酚酚酚酚1010滴滴滴滴）涂布）涂布淀淀淀淀粉平板粉平板粉平板粉平板，2828倒置培养，倒置培养，710天。天。3.平板划线分离法平板划线分离法 操作要点操作要点(1)接种环与平板表面约成接种环与平板表面约成2030度角。度角。(2)用力适当，不要划破培养基用力适当，不要划破培养基.(3)方法方法A中，每次划线都要灼烧接种环。中，每次划线都要灼烧接种环。教教 学学 内内 容容制备固体平板培养基。制备固体平板培养

10、基。从土样中分离细菌、霉菌、放线菌，并观从土样中分离细菌、霉菌、放线菌，并观察其菌落特征。察其菌落特征。在平板上划线分离混合菌悬液中金黄色葡在平板上划线分离混合菌悬液中金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。萄球菌和大肠杆菌。实验报告及思考题实验报告及思考题计算每克土样中微生物的数量。计算每克土样中微生物的数量。为什么在分离霉菌时要加几滴为什么在分离霉菌时要加几滴80的乳酸的乳酸？加在何处？加在何处？为什么在分离放线菌时要加入为什么在分离放线菌时要加入10的酚？的酚？加在何处？加在何处？培养微生物时应考虑哪些原则？培养时，培养微生物时应考虑哪些原则？培养时，为什么要把已接种的培养皿倒置保温？为什么要把已接种

11、的培养皿倒置保温？1、许多人企求着生活的完美结局，殊不知美根本不在结局，而在于追求的过程。2、慢慢的才知道：坚持未必就是胜利，放弃未必就是认输，。给自己一个迂回的空间，学会思索，学会等待，学会调整。人生没有假设，当下即是全部。背不动的，放下了；伤不起的，看淡了；想不通的，不想了；恨不过的，抚平了。3、在比夜更深的地方，一定有比夜更黑的眼睛。4、一切伟大的行动和思想，都有一个微不足道的开始。5、从来不跌倒不算光彩，每次跌倒后能再站起来，才是最大的荣耀。6、这个世界到处充满着不公平，我们能做的不仅仅是接受，还要试着做一些反抗。7、一个最困苦、最卑贱、最为命运所屈辱的人，只要还抱有希望，便无所怨惧。

12、8、有些人，因为陪你走的时间长了，你便淡然了，其实是他们给你撑起了生命的天空；有些人，分开了，就忘了吧，残缺是一种大美。9、照自己的意思去理解自己，不要小看自己，被别人的意见引入歧途。10、没人能让我输，除非我不想赢！11、花开不是为了花落，而是为了开的更加灿烂。12、随随便便浪费的时间，再也不能赢回来。13、不管从什么时候开始，重要的是开始以后不要停止；不管在什么时候结束，重要的是结束以后不要后悔。14、当你决定坚持一件事情，全世界都会为你让路。15、只有在开水里，茶叶才能展开生命浓郁的香气。16、别想一下造出大海，必须先由小河川开始。17、不要让未来的你，讨厌现在的自己，困惑谁都有，但成功只配得上勇敢的行动派。18、人生最大的喜悦是每个人都说你做不到，你却完成它了！19、如果你真的愿意为自己的梦想去努力，最差的结果，不过是大器晚成。20、不忘初心，方得始终。