生物质谱分析技术幻灯片.ppt

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1、生物质谱分析技术第1页，共89页，编辑于2022年，星期一第一部分第一部分系统生物学的发展系统生物学的发展第2页，共89页，编辑于2022年，星期一生命科学研究的目标生命科学研究的目标n寻找生命活动的起源及奥秘，n解释及探索生命活动的一般规律，n改善人类生活质量，延长人类寿命第3页，共89页，编辑于2022年，星期一对生命的认识过程对生命的认识过程n1.生命是神造的、上帝造（By God）等；n2.生命是活力（Activity）；n3.生命是机器（Machine）；n4.生命是信息（Information）。第4页，共89页，编辑于2022年，星期一第5页，共89页，编辑于2022年，星期一第

2、6页，共89页，编辑于2022年，星期一系统生物学的定义系统生物学的定义 系统生物学（系统生物学（systems biology），），是在细胞、组织、器官和生物体整体水平多层次、多系统研究各种分子（DNA、mRNA、蛋白质、糖类、脂类等、蛋白质、糖类、脂类等）的结构、功能及其相互作用，用计算生物学方法整合各组学数据来定量描述和预测它们的生物功能、表型和行为的科学。第7页，共89页，编辑于2022年，星期一 系系统统生物学生物学不同于以往的实验生物学，仅关心个别的基因和蛋白质，它要研究所有的基因、所有的蛋白质、组分间的所有相互关系。第8页，共89页，编辑于2022年，星期一还原论还原论vs整合

3、论整合论n传统生物学是还原论还原论(reductionism)的观点还原论假设一个复杂的系统可以分割为许多分割为许多不会互相干扰的子系统不会互相干扰的子系统，因此只要将子系统研究清楚，就能了解复杂系统的行为。n系统生物学是整合论整合论(synthesis)的观点面对子系统不独立的可能性，希望寻找新的方法来解决子系统间交互作用交互作用的问题。第9页，共89页，编辑于2022年，星期一第10页，共89页，编辑于2022年，星期一组学实验组学实验理论计算理论计算基因组基因组转录组转录组蛋白质组蛋白质组相互作用组相互作用组代谢组代谢组表型组表型组数据整合数据整合模型构建模型构建系统干涉系统干涉合成生物

4、学合成生物学系统生物学研究的两大技术方法：组学实验和理论计算系统生物学研究的两大技术方法：组学实验和理论计算第11页，共89页，编辑于2022年，星期一系统生物学应用举例系统生物学应用举例应用系统生物学的方法可以预测药物的作用机制、病人对药物的应答，包括毒副作用和疗效等。例如，美国纽约基因网络科学公司（GeneNetworkSciences）构建了一种人类癌细胞模型，该模型内含有500多种基因和蛋白质，可将以前分别孤立研究的生物过程联系在一起，利用该生物网络模型，能够更好地理解细胞的生物学行为。第12页，共89页，编辑于2022年，星期一第二部分第二部分 蛋白质组学的兴起蛋白质组学的兴起第13

5、页，共89页，编辑于2022年，星期一解析疾病机制手段的改进解析疾病机制手段的改进:DNA Protein第14页，共89页，编辑于2022年，星期一 蛋白质表达调控蛋白质表达调控转录水平调控转录水平调控翻译水平调控翻译水平调控翻译后水平调控翻译后水平调控 蛋白质存在复杂的翻译后修饰，作为生命功能的行使者蛋白质存在复杂的翻译后修饰，作为生命功能的行使者，它比基因更能直接地反映生理过程及其变化。，它比基因更能直接地反映生理过程及其变化。蛋白质相互作用及空间构向等问题是生命现象复蛋白质相互作用及空间构向等问题是生命现象复杂性的真实体现。杂性的真实体现。蛋白质研究的复杂性蛋白质研究的复杂性第15页，

6、共89页，编辑于2022年，星期一蛋白质研究的复杂性蛋白质研究的复杂性细胞周期信号转导图细胞周期信号转导图第16页，共89页，编辑于2022年，星期一传统的蛋白质研究方法中存在的问题传统的蛋白质研究方法中存在的问题1.生命现象的发生往往是多因素多因素的，必然涉及到多个蛋白质。2.多个蛋白质的参与是交织成网络网络的，或平行发生，或呈级联因果关系。3.在执行生理功能时蛋白质的表现是多样的多样的、动态的动态的，并不像基因组那样基本固定不变。第17页，共89页，编辑于2022年，星期一随着人类基因组计划重点由结构基因组到功能基因组的转移，生命科学开始进入后基因组时代。研究基因终产物及生命活动直接功能执

7、行者蛋白质的科学-蛋白质组学（Proteomics）应运而生。第18页，共89页，编辑于2022年，星期一蛋白质组最早是由澳大利亚Macquarie大学的Wilkins和Williams在1994年的意大利举办的双向电泳会议上首次提出来的。Proteome一词由“蛋白质（PROTEin）”与“基因组（genOME）”杂合而成，对于“基因组学（Genomics）”,“蛋白质组学”定义为一个基因组所表达的全套蛋白质。由Proteome进一步派生出Proteomics。第19页，共89页，编辑于2022年，星期一n2001年，Science杂志把蛋白质组学列为21世纪六大研究热点之一六大研究热点之一

8、。n2003年4月14日，科学家宣布人类基因组计划已经顺利完成，99%的人类遗传密码被破译，人类基因组图谱提前2年完成。蛋白质组学被进一步提上日程提上日程。第20页，共89页，编辑于2022年，星期一 蛋白质组学蛋白质组学(Proteomics)：是通过大规模研究：是通过大规模研究蛋白质的表达水平的变化、翻译后修饰、蛋白质蛋白质的表达水平的变化、翻译后修饰、蛋白质与蛋白质之间的相互作用，以获取蛋白质水平上与蛋白质之间的相互作用，以获取蛋白质水平上疾病变化、细胞进程及蛋白质网络相互作用的整疾病变化、细胞进程及蛋白质网络相互作用的整体综合信息的科学研究。体综合信息的科学研究。疾病蛋白质组学：蛋白质

9、组学用于研究疾病发疾病蛋白质组学：蛋白质组学用于研究疾病发病机制便发展为疾病蛋白质组学。病机制便发展为疾病蛋白质组学。蛋白质组学定义蛋白质组学定义第21页，共89页，编辑于2022年，星期一 蛋白质组学的研究的机遇和挑战：蛋白质组学的研究的机遇和挑战：机遇：基因组计划的快速进行，大量基机遇：基因组计划的快速进行，大量基因序列和因序列和EST的确定为蛋白质的快速鉴定的确定为蛋白质的快速鉴定提供了良好的基础。提供了良好的基础。挑战：从单一蛋白质的研究转变到细胞挑战：从单一蛋白质的研究转变到细胞和组织的整体蛋白质研究，在理论和技和组织的整体蛋白质研究，在理论和技术上提出了挑战。术上提出了挑战。第22

10、页，共89页，编辑于2022年，星期一 蛋白质研究技术的革命：蛋白质组学蛋白质研究技术的革命：蛋白质组学第23页，共89页，编辑于2022年，星期一蛋白质组学常用的两大技术平台蛋白质组学常用的两大技术平台第24页，共89页，编辑于2022年，星期一第25页，共89页，编辑于2022年，星期一第26页，共89页，编辑于2022年，星期一第三部分生物质谱技术的原理及应用生物质谱技术的原理及应用第27页，共89页，编辑于2022年，星期一质谱技术特点质谱技术特点n质谱仪是一个用来测量单个分子质量的仪器，实际上质谱仪提供质谱仪是一个用来测量单个分子质量的仪器，实际上质谱仪提供的是分子的质量与电荷比的是

11、分子的质量与电荷比(m/z or m/e).n质谱法是一强有力的分析技术。它可用于未知化合物的鉴定、质谱法是一强有力的分析技术。它可用于未知化合物的鉴定、定量分析、分子结构及化学特性的确定等方面；定量分析、分子结构及化学特性的确定等方面；n所需化合物的量非常低：所需化合物的量非常低：10-12g,或或10-15mole；n应用范围广应用范围广:(1)有机质谱法：有机质谱法：生物、医药、聚合物、法医和生物、医药、聚合物、法医和环境等方面；环境等方面；(2)无机质谱法：无机质谱法：地球化学，地质矿产和无机元地球化学，地质矿产和无机元素分析鉴定等方面。素分析鉴定等方面。第28页，共89页，编辑于20

12、22年，星期一质谱分析原理质谱分析原理质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比质荷比的测定来进行分析的一种分析方法。被分析的样品首先要离子化，然后利用不同离子在电场或磁场的运动行为的不同，把离子按质荷比（m/z）分开而得到质量图谱，通过样品的质量图谱和相关信息，可以得到样品的定性定量结果。第29页，共89页，编辑于2022年，星期一质谱发展史质谱发展史n1911年:世界第一台质谱装置（J.J.Thomson）n40年代:用于同位素测定和无机元素分析n50年代：开始有机物分析（分析石油）n60年代：研究GC-MS联用技术n70年代：计算机引入第30页，共89页，编辑于2022年，星期一生物质谱的发

13、展生物质谱的发展n80年代：快原子轰击电离，基质辅助激基质辅助激光解吸电离，电喷雾电离，光解吸电离，电喷雾电离，大气压化学电离第31页，共89页，编辑于2022年，星期一 质谱技术因解决科学前沿难题屡次获得诺贝尔奖：质谱技术因解决科学前沿难题屡次获得诺贝尔奖：1.1906年，Thompson.J.J（发明质谱技术）；2.1922年，AstonF.W（利用质谱仪发现非放射性同位素）；3.1980年，PaulW.（发明离子阱原理与技术）；4.1996年，CurlR.F/SroalleyR.E.等（用质谱仪观测到激光轰击下产生的碳60）；第32页，共89页，编辑于2022年，星期一 2002年美国科

14、学家约翰年美国科学家约翰.芬恩与日本科学芬恩与日本科学家田中耕一由于发明了对生物大分子的质谱家田中耕一由于发明了对生物大分子的质谱分析方法而获得了诺贝尔化学奖。因为该方分析方法而获得了诺贝尔化学奖。因为该方法解决了生物大分子法解决了生物大分子“是什么是什么”的问题。的问题。第33页，共89页，编辑于2022年，星期一质谱仪的示意图质谱仪的示意图数据处理系统离子检测器质量分析器离子源蛋白质产生离子按离子的质量与电荷比分离离子离子转换成电信号控制整个质谱仪高斯状峰高斯状峰棒状峰棒状峰第34页，共89页，编辑于2022年，星期一质谱工作流程1.加热进样2.直接进样1.单聚焦 2.双聚焦 3.飞行时间

15、4.四极杆 1.电子轰击 2.化学电离 3.场致电离 4.激光 5.快原子轰击第35页，共89页，编辑于2022年，星期一质谱的构造n进样系统：进样系统：按电离方式的需要，将样品送入离子源的适当部位，分为加热进样和直接进样。n离子源：离子源：用来使样品分子电离生成离子n质量分析器质量分析器：利用电磁场的作用将来自离子源的离子束中不同质荷比的离子按空间位置，时间先后或运动轨道稳定与否等形式进行分离n离子检测器：离子检测器：用来接受、检测和记录被分离后的离子信号第36页，共89页，编辑于2022年，星期一进样系统n气体进样n液体进样n固体进样第37页，共89页，编辑于2022年，星期一离子源n电子

16、轰击电离（EI）n化学电离（CI）n快原子轰击（FAB）n电喷雾电离（ESI）n基质辅助激光解吸电离（MALDI）n表面增强激光解吸电离(SELDI)技术第38页，共89页，编辑于2022年，星期一1).电子轰击电子轰击(Electron impact,EI)电离电离M+e-M+.+2e-Fi+,i=1,2,3,.电子束电子束气体分子气体分子离子束离子束第39页，共89页，编辑于2022年，星期一2).化学电离化学电离(chemicalionization,CI)正离子模式：GH+MM+H+G负离子模式：G-H-+MM-H-+GG:离子化的试剂气体分子离子化的试剂气体分子,CH4,NH3等等M

17、:被分析物被分析物电子束电子束气体分子气体分子试剂分子试剂分子离子束离子束第40页，共89页，编辑于2022年，星期一3).快原子轰击快原子轰击(Fastatombombardment,FAB)离子化技离子化技术术-可分析分子量达数千的多肽可分析分子量达数千的多肽,极性分子极性分子.第41页，共89页，编辑于2022年，星期一4).电喷雾离子化电喷雾离子化(Electrosprayionization,ESI)技术技术a).常规电喷雾源常规电喷雾源(mL/min)b).微升喷雾源微升喷雾源(L/min)c).毫微喷雾源毫微喷雾源(nL/min)DryinggasNebulizergas第42页

18、，共89页，编辑于2022年，星期一电喷雾离子化电喷雾离子化（ElectrosprayIonizsation，ESI）是在毛细管的出口处施加一高电压，所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴，随着溶剂蒸发，液滴表面的电荷强度逐渐增大，最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子，致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相。第43页，共89页，编辑于2022年，星期一n电喷雾离子化的特点电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子，使质量电荷比（m/z）降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围，因而大大扩展了分子量的分析范围，离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电荷数算出n可以方便

19、地与多种分离技术联合使用，如液质联用（LCMS）是将液相色谱与质谱联合而达到检测大分子物质的目的。第44页，共89页，编辑于2022年，星期一5).基质辅助激光解吸电离技术基质辅助激光解吸电离技术(Matrix-assistedlaserdesorption/ionization,MALDI)离子化过程离子化过程第45页，共89页，编辑于2022年，星期一nMALDI的原理的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定第46页，

20、共89页，编辑于2022年，星期一MALDIMatrix应具有的特性应具有的特性n能够嵌入样品分子间并能起到隔离样品分子之间的相互作用(如形成共结晶);n能溶解于可溶解样品分子的溶剂;n在真空状态下是稳定的;n可吸收激光,既与激光形成共振吸收;n可激发样品分子离子化.第47页，共89页，编辑于2022年，星期一样品引入方式样品引入方式：直接进样直接进样优点：优点：a).快速获得分子量的信息快速获得分子量的信息;b).快速获得混合肽的肽谱快速获得混合肽的肽谱.缺点缺点:a).金属离子干扰金属离子干扰,Na,K；b).离子源结构复杂离子源结构复杂,；c).没有没有LC/MALDI接口；接口；d).

21、实现实现MS/MS困难困难e).需要基质需要基质质量范围质量范围:分子量小于分子量小于500,000Da第48页，共89页，编辑于2022年，星期一6).表面增强激光解吸电离表面增强激光解吸电离(Surface-enhancedlaserdesorption/ionization,SELDI)技术技术第49页，共89页，编辑于2022年，星期一addingtheproteinsample,washing,addingtheenergyadsorbingmolecule(EAM)第50页，共89页，编辑于2022年，星期一质量分析器n磁分析器n四极杆质量分析器(Quadrupoleanalyze

22、r)n离子阱质量分析器(Iontrapanalyzer)n飞行时间质量分析器(Timeofflightanalyzer)n傅立叶变换离子回旋共振分析器（Fouriertransformioncyclotronresonanceanalyzer）第51页，共89页，编辑于2022年，星期一1).磁质谱仪磁质谱仪(magnetic-sectormassspectrometer)n经典质量分析器：带电粒子在磁场中运动受到洛伦兹力的作用经典质量分析器：带电粒子在磁场中运动受到洛伦兹力的作用m:离子的质量离子的质量z:离子所带电量离子所带电量V:离子飞行速度离子飞行速度B:磁场强度磁场强度rMSMS/M

23、S空间串联质谱仪第52页，共89页，编辑于2022年，星期一优点：优点：a).高重现性(稳定性);b).最好定性分析工具;c).可以实现高分辨;d).高灵敏度;e).宽的动态范围;f).可以实现多级质谱的串联;g).高能collision-induceddissociation(CID)谱重现性好.缺点缺点:a).不能较好的与脉冲离子化技术联用(如:MALDI);b).造价高,体积大;c).联动扫描MS/MS谱的分辨率低.应用应用:a).所有的有机质谱分析方法;b).精确质量测量;c).定量分析;d).同位素丰度比的测量.第53页，共89页，编辑于2022年，星期一2).四极质量过滤器质谱仪四

24、极质量过滤器质谱仪(quadrupolemassfiltermassspectrometer)quadrupoleMathieu方程第54页，共89页，编辑于2022年，星期一四级杆质量分析器第55页，共89页，编辑于2022年，星期一四极杆分析器由四根棒状电极组成。电极材料是镀金陶瓷或钼合金。相对两根电极间加有电压（Vdc+Vrf），另外两根电极间加有-（Vdc+Vrf）。其中Vdc为直流电压，Vrf为射频电压。四个棒状电极形成一个四极电场。通过改变扫描电压让不同质荷比的离子分离开。第56页，共89页，编辑于2022年，星期一优点优点:a).可获得经典的质谱图可获得经典的质谱图;b).重现性

25、好重现性好;c).以其体积较小以其体积较小,造价较低造价较低;d).在三级四极杆串联质谱分析器上或四极杆分析器与磁质谱在三级四极杆串联质谱分析器上或四极杆分析器与磁质谱(飞行时间飞行时间)分析器组成的分析器组成的混合串联分析器上可获得低能混合串联分析器上可获得低能CID谱谱;缺点缺点:a).峰强度与峰的质荷比有关峰强度与峰的质荷比有关;b).分辨率低分辨率低;c).不能较好地与脉冲离子化技术结合不能较好地与脉冲离子化技术结合(如如:MALDI);d).collision-induceddissociation(CID)MS/MSspectra与与collisionenergy,collisio

26、ngas,pressure有关有关.应用应用:a).多数台式质谱仪多数台式质谱仪,GC/MS和和LC/MS系统系统;b).串联三级四极杆质谱仪串联三级四极杆质谱仪,MS/MS;c).磁分析器与四极杆分析器组成混合型串联质谱仪磁分析器与四极杆分析器组成混合型串联质谱仪,MS/MS.第57页，共89页，编辑于2022年，星期一3).离子阱质谱仪(Iontrapmassspectrometer)第58页，共89页，编辑于2022年，星期一离子阱质量分析器第59页，共89页，编辑于2022年，星期一离子阱的主体是一个环电极和上下两端盖电极，环电极和上下两端盖电极都是绕Z轴旋转的双曲面，并满足r02=2

27、Z02（r0为环形电极的最小半径，Z0为两个端盖电极间的最短距离）。直流电压U和射频电压Vrf加在环电极和端盖电极之间，两端盖电极都处于地电位。简单说：用高频交流电把离子限制在离子阱里，然后用离子的特征电压分别将其推出离子阱，到检测器检测。第60页，共89页，编辑于2022年，星期一优点：优点：a).可以实现多级串联质谱技术；可以实现多级串联质谱技术；b).结构紧凑。结构紧凑。缺点：缺点：a).动态范围窄，不适合用于定量分析；动态范围窄，不适合用于定量分析；b).存在空间电荷效应和离子存在空间电荷效应和离子-分子反应；分子反应；c).CID过程中的碰撞能量大小不能确定；过程中的碰撞能量大小不能

28、确定；d).多个仪器参数影响质谱中离子的分布，多个仪器参数影响质谱中离子的分布，如：活化能、捕获时间、如：活化能、捕获时间、检测器条件等。检测器条件等。应用应用:a).台式的台式的GC/MS,LC/MS/MS;b).目标化合物的筛选目标化合物的筛选;c).气相离子化学研究气相离子化学研究.d).肽序列测定肽序列测定第61页，共89页，编辑于2022年，星期一4).傅里叶变换离子回旋共振质谱仪傅里叶变换离子回旋共振质谱仪(Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometer,FTICR MS)第62页，共89页，编辑于2022年，

29、星期一优点优点:a).是目前分辨率最高的质谱仪是目前分辨率最高的质谱仪,1000,000;b).可实现多级串联质谱分析可实现多级串联质谱分析,msn;c).可以与脉冲离子化电离技术联用可以与脉冲离子化电离技术联用,如如:MALDI;d).是目前蛋白质和肽测序中顶端质谱仪是目前蛋白质和肽测序中顶端质谱仪;e).质量稳定性好质量稳定性好;f).可实现气相离子可实现气相离子-分子反应分子反应.缺点缺点:a).有限的动态范围有限的动态范围;b).存在空间电荷效应和离子存在空间电荷效应和离子-分子反应分子反应;c).存在存在Artifact峰峰;d).多个仪器参数影响质谱图的分布多个仪器参数影响质谱图的

30、分布,如如:活化能活化能,捕获时间捕获时间,检测条件等检测条件等;e).CID谱与碰撞能，碰撞气及其他仪器参数有关谱与碰撞能，碰撞气及其他仪器参数有关应用应用:a).生物大分子的分析；生物大分子的分析；b).有机小分子分析；有机小分子分析；c).离子化学研究；离子化学研究；e).可以和各种电离技术联用。可以和各种电离技术联用。第63页，共89页，编辑于2022年，星期一5).飞行时间质谱仪飞行时间质谱仪(Time-of-flightmassspectrometer)m为离子的质量，为离子的质量，q为离子所带的电荷，为离子所带的电荷，L为离子飞行的距离，为离子飞行的距离，v为离子的飞行速度，为离

31、子的飞行速度，V为离子的加速电压，为离子的加速电压，z为离子所带的电荷数，为离子所带的电荷数，e微电子的电量。微电子的电量。第64页，共89页，编辑于2022年，星期一优点优点:a)可获得高分辨质谱；可获得高分辨质谱；b)可实现快速的离子传输；可实现快速的离子传输；c)可以较好地与脉冲离子化电离技术联用，如：可以较好地与脉冲离子化电离技术联用，如：MALDI等；等；d)高的离子传输效率；高的离子传输效率；e)利用利用post-sourcedecay(PSD)技术可以快速实现技术可以快速实现MS/MS技术；技术；f)具有较宽的质量范围具有较宽的质量范围;g)利用利用ToF-ToF可以实现可以实现

32、MS/MS.h)缺点缺点:i)需要以脉冲开关；需要以脉冲开关；j)需要快速数字转换器需要快速数字转换器;k)有限的动态范围有限的动态范围.l)应用：应用：m)MALDI-ToF；n)GC/EI(CI)-ToF;o)可用于有机化合物的分析；可用于有机化合物的分析；p)生物大分子的分析；生物大分子的分析；q)肽谱肽谱第65页，共89页，编辑于2022年，星期一离子检测器离子检测器质谱仪的检测主要使用电子倍增器，也有的使用光电倍增管。由质量分析器出来的离子打到高能电极产生电子，电子经电子倍增器产生电信号，记录不同离子的信号即得质谱。信号增益与倍增器电压有关，提高倍增器电压可以提高灵敏度，但同时会降低

33、倍增器的寿命，因此，应该在保证仪器灵敏度的情况下采用尽量低的倍增器电压。由倍增器出来的电信号被送入计算机储存，这些信号经计算机处理后可以得到色谱图，质谱图及其它各种信息。第66页，共89页，编辑于2022年，星期一质谱性能指标n灵敏度(sensitivity)n分辨率(resolution)n质量范围(massrange)n质量稳定性(massstability)第67页，共89页，编辑于2022年，星期一灵敏度n在一定的分辨率下，产生一定信噪比（S/N）的分子离子峰所需的样品量n在质谱分析中，仪器出现峰（信号）的强度E应与物质的量或浓度C成线性关系：E=SC，比例系数S称为灵敏度S=E/C第

34、68页，共89页，编辑于2022年，星期一分辨率n质谱仪的分辨率表示质谱仪把相邻两个质量分开的能力，常用R表示。n两种定义方式：双峰法和单峰法第69页，共89页，编辑于2022年，星期一双峰法n如果某质谱仪在质量M处刚刚能分开M和M+M两个质量的离子。则该质谱仪的分辨率为R=M/Mn所谓两峰刚刚分开，一般是指两峰间的“峰谷”是峰高的10%（每个峰提供5%）第70页，共89页，编辑于2022年，星期一单峰法n如果质量为M的质谱峰其峰高50%处的峰宽（半峰宽）为M。则分辨率为R=M/M，这后一种表示方法测量时比较方便。目前，FT-MS和TOF-MS采用这种分辨率表示方式。第71页，共89页，编辑于

35、2022年，星期一质量范围n质量范围是质谱仪所能测定的离子质荷比的范围。n对于MALDI离子源，电离得到的离子为单电荷离子，质量范围实际上就是可以测定的分子量范围；对于ESI离子源，由于形成的离子带有多电荷，尽管质量范围只有几千，但可以测定的分子量可达10万以上。第72页，共89页，编辑于2022年，星期一质量稳定性n质量稳定性主要是指仪器在工作时质量稳定的情况，通常用一定时间内质量漂移的质量单位来表示。第73页，共89页，编辑于2022年，星期一生物质谱种类n按离子源的类型：电喷雾质谱和MALDI质谱n按质量分析器类型：四级杆质谱；飞行时间质谱；离子阱质谱；FTICR质谱等第74页，共89页

36、，编辑于2022年，星期一串联质谱nQ-Q-QnTOF/TOFnQ-TOFnQ-Trap第75页，共89页，编辑于2022年，星期一串联质谱的优势n利用软电离技术（如电喷雾和快原子轰击）作为离子源时，所得到的质谱主要是准分子离子峰，碎片离子很少，因而也就没有结构信息。为了得到更多的信息，最好的办法是把准分子离子“打碎”之后测定其碎片离子。nDe novo测序的主体思想第76页，共89页，编辑于2022年，星期一裂解方式n碰撞诱导分解（CollisionInduceddissociation，CID）n源后衰减（Postsourcedecay，PSD）第77页，共89页，编辑于2022年，星期一

37、碰撞诱导分解（CID）n碰撞诱导分解在碰撞室内进行，带有一定能量的离子进入碰撞室后，与室内惰性气体的分子或原子（也可以是空气）发生碰撞，离子发生碎裂。第78页，共89页，编辑于2022年，星期一源后衰减（PSD）n离子在飞行过程中如果发生裂解，新产生的离子仍然以母离子速度飞行。因此在直线型漂移管中观测不到新生成的离子。如果采用带有反射器的漂移管，因为新生成的离子与其母离子动能不同，可在反射器中被分开。第79页，共89页，编辑于2022年，星期一MALDI TOF/TOF 4800第80页，共89页，编辑于2022年，星期一第81页，共89页，编辑于2022年，星期一Pulsed laser2.

38、Target is introduced into high vacuum chamber4.Ions are accelerated by an electric field to the same kinetic energy;they separate according to mass as they drift thru the field-free region of the flight tube Flight tube1.Sample+matrix dried on target plate High vacuumTimeHigh voltage3.Sample is irra

39、diated with laser,clock starts to measure time-of-flight .20-25kV6.A data system controls instrument parameters,acquires signal vs.time,and processes the data5.Ions strike the detector at different times,depending on their mass/charge ratio质谱工作流程第82页，共89页，编辑于2022年，星期一第83页，共89页，编辑于2022年，星期一4800图谱PMF图

40、谱第84页，共89页，编辑于2022年，星期一PST图谱第85页，共89页，编辑于2022年，星期一A:质谱图中最强子的相对强度(Yaxis)B:离子的质量与电荷比(m/z,Xaxis)C:离子峰称为基峰(basepeak)D:相对于特定的检测器时称为峰的绝对强度E:所有质谱峰对应的是离子电信号强度和离子应在的m/z位置F:棒状谱(centroidalpeak)G:高斯峰(gausspeak)F质谱图意义质谱图意义G第86页，共89页，编辑于2022年，星期一生物质谱技术的应用n1.质谱与蛋白质分析n2.蛋白质组学研究n3.质谱与核酸研究n4.质谱与临床医学第87页，共89页，编辑于2022年，星期一思考题：1.质谱仪的组成部分2.质谱仪的主要技术指标3.ESI电离方法的原理4.MALDI电离方法的原理 5.生物质谱技术的主要应用领域第88页，共89页，编辑于2022年，星期一第89页，共89页，编辑于2022年，星期一