《水样的微生物检测》PPT课件.ppt

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1、食品加工用水的微生物检测方法介绍姜英辉与水质相关的各类标准和检验方法vv GB5749-2006GB5749-2006GB5749-2006GB5749-2006，生活饮用水卫生标准生活饮用水卫生标准生活饮用水卫生标准生活饮用水卫生标准 代替代替代替代替 （GB5749-85GB5749-85）vvGB/T 5750-2006GB/T 5750-2006GB/T 5750-2006GB/T 5750-2006 生活饮用水卫生标准检验方法生活饮用水卫生标准检验方法生活饮用水卫生标准检验方法生活饮用水卫生标准检验方法vv GB/T 5750.1 GB/T 5750.1 GB/T 5750.1 GB

2、/T 5750.1 总则总则总则总则vv GB/T 5750.2 GB/T 5750.2 GB/T 5750.2 GB/T 5750.2 水样的采集和保存水样的采集和保存水样的采集和保存水样的采集和保存 vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.3 5750.3 5750.3 5750.3 水质分析质量控制水质分析质量控制水质分析质量控制水质分析质量控制vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.4 5750.4 5750.4 5750.4 感官性状和物理指标感官性状和物理指标感官性状和物理指标感官性状和物理指标vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.5 5750.5

3、5750.5 5750.5 无机非金属指标无机非金属指标无机非金属指标无机非金属指标vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.6 5750.6 5750.6 5750.6 金属指标金属指标金属指标金属指标vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.7 5750.7 5750.7 5750.7 有机物综合指标有机物综合指标有机物综合指标有机物综合指标vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.8 5750.8 5750.8 5750.8 有机物指标有机物指标有机物指标有机物指标vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.9 5750.9 5750.9 5750.9 农药

4、指标农药指标农药指标农药指标vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.10 5750.10 5750.10 5750.10 消毒副产物指标消毒副产物指标消毒副产物指标消毒副产物指标vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.11 5750.11 5750.11 5750.11 消毒剂指标消毒剂指标消毒剂指标消毒剂指标vv GB/T 5750.12 GB/T 5750.12 GB/T 5750.12 GB/T 5750.12 微生物指标微生物指标微生物指标微生物指标vv GBGBGBGB/T/T/T/T 5750.13 5750.13 5750.13 5750.13 放射性指标放射

5、性指标放射性指标放射性指标vv 以上标准于以上标准于以上标准于以上标准于20072007年年年年7 7月月月月1 1日正式实施，代替日正式实施，代替日正式实施，代替日正式实施，代替19851985年的相关标准年的相关标准年的相关标准年的相关标准与水质相关的各类标准和检验方法vv GB8537GB8537GB8537GB85371995199519951995，饮用天然矿泉水饮用天然矿泉水饮用天然矿泉水饮用天然矿泉水vv GB8538 GB8538 GB8538 GB85381995199519951995，饮用天然矿泉水检验方法饮用天然矿泉水检验方法饮用天然矿泉水检验方法饮用天然矿泉水检验方法

6、vv GB17323 GB17323 GB17323 GB173231998199819981998，瓶装饮用纯净水瓶装饮用纯净水瓶装饮用纯净水瓶装饮用纯净水vv GB17324 GB17324 GB17324 GB173241998199819981998，瓶装饮用纯净水卫生标准瓶装饮用纯净水卫生标准瓶装饮用纯净水卫生标准瓶装饮用纯净水卫生标准vv GB19298 GB19298 GB19298 GB192982003200320032003，瓶（桶）装饮用水卫生标准瓶（桶）装饮用水卫生标准瓶（桶）装饮用水卫生标准瓶（桶）装饮用水卫生标准vv GB12997 GB12997 GB12997

7、GB129971991199119911991，水质水质水质水质 采样方案设计技术规定采样方案设计技术规定采样方案设计技术规定采样方案设计技术规定vv GB12998GB12998GB12998GB129981991199119911991，水质水质水质水质 采样技术指导采样技术指导采样技术指导采样技术指导vv GB12999GB12999GB12999GB129991991199119911991，水质采样，样品的保存和管理水质采样，样品的保存和管理水质采样，样品的保存和管理水质采样，样品的保存和管理技术规定技术规定技术规定技术规定各类水质的细菌学指标要求 各类水质的细菌学指标要求(续)水样

8、的采集和保存方法 GB/T 5750.2GB/T 5750.2GB/T 5750.2GB/T 5750.2 1 1 1 1 水样的采集方法水样的采集方法水样的采集方法水样的采集方法 范围：适用于生活饮用水和及其水源水样的采集和保存范围：适用于生活饮用水和及其水源水样的采集和保存 采样容器：玻璃材质，不透明非活性玻璃容器。采样容器：玻璃材质，不透明非活性玻璃容器。采样容器：玻璃材质，不透明非活性玻璃容器。采样容器：玻璃材质，不透明非活性玻璃容器。容容容容器器器器及及及及塞塞塞塞子子子子、盖盖盖盖子子子子应应应应经经经经灭灭灭灭菌菌菌菌温温温温度度度度并并并并且且且且在在在在此此此此温温温温度度度

9、度下下下下不不不不释释释释放放放放或或或或产产产产生生生生出出出出任任任任何何何何能能能能抑抑抑抑制制制制生生生生物物物物活活活活性性性性、灭灭灭灭活活活活或或或或促促促促进进进进生生生生物物物物生生生生长长长长的的的的化化化化学学学学物质。物质。物质。物质。采样容器的洗涤和灭菌：采样容器的洗涤和灭菌：采样容器的洗涤和灭菌：采样容器的洗涤和灭菌：1 1 1 1 容容容容器器器器洗洗洗洗涤涤涤涤：将将将将容容容容器器器器用用用用自自自自来来来来水水水水和和和和洗洗洗洗涤涤涤涤剂剂剂剂洗洗洗洗涤涤涤涤，并并并并且且且且用用用用自自自自来来来来水水水水彻彻彻彻底底底底冲冲冲冲洗洗洗洗后后后后用用用用

10、质质质质量量量量分分分分数数数数为为为为10101010的的的的盐盐盐盐酸酸酸酸溶溶溶溶液液液液浸浸浸浸泡泡泡泡过过过过夜夜夜夜，然然然然后后后后依次用自来水，蒸馏水洗净。依次用自来水，蒸馏水洗净。依次用自来水，蒸馏水洗净。依次用自来水，蒸馏水洗净。2 2 2 2 容器灭菌：热力灭菌。干热灭菌要求容器灭菌：热力灭菌。干热灭菌要求容器灭菌：热力灭菌。干热灭菌要求容器灭菌：热力灭菌。干热灭菌要求160160160160，2h2h；高压蒸；高压蒸；高压蒸；高压蒸汽灭菌汽灭菌汽灭菌汽灭菌121121，15min15min15min15min。高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用，。高压蒸汽灭菌后的容器如不

11、立即使用，。高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用，。高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用，应于应于应于应于60606060将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在2 2 2 2周内使用。周内使用。周内使用。周内使用。水样的采集和保存方法 GB5750.2GB5750.2GB5750.2GB5750.2 1 1 1 1 水样的采集方法水样的采集方法水样的采集方法水样的采集方法 同同同同一一一一水水水水源源源源，同同同同一一一一时时时时间间间间采采采采集集集集几几几几类类类类检检检检测测测测指指指指标标标标的的

12、的的水水水水样样样样时时时时，应应应应先先先先采采采采集集集集供供供供微微微微生生生生物物物物学学学学指指指指标标标标检检检检测测测测的的的的水水水水样样样样，采采采采样样样样时时时时应应应应直直直直接接接接采采采采集集集集，不不不不得得得得用用用用水水水水样样样样涮涮涮涮洗洗洗洗已已已已灭灭灭灭菌菌菌菌的的的的采采采采样样样样瓶瓶瓶瓶，并并并并避免手指和其他物品对瓶口的污染。避免手指和其他物品对瓶口的污染。避免手指和其他物品对瓶口的污染。避免手指和其他物品对瓶口的污染。在在在在取取取取自自自自来来来来水水水水样样样样时时时时，先先先先用用用用酒酒酒酒精精精精灯灯灯灯将将将将水水水水龙龙龙龙头

13、头头头烧烧烧烧灼灼灼灼消消消消毒毒毒毒，然后把水龙头完全打开，放水然后把水龙头完全打开，放水然后把水龙头完全打开，放水然后把水龙头完全打开，放水几分钟几分钟几分钟几分钟后，再取水样。后，再取水样。后，再取水样。后，再取水样。采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未消毒前按采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未消毒前按采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未消毒前按采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未消毒前按每每每每125ml125ml水样加入水样加入水样加入水样加入0.1mg0.1mg0.1mg0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯。硫代硫酸钠除去残余余氯。硫代硫酸钠除去残余余氯。硫代硫酸钠除去残余余氯。取样体积：取

14、样体积：0.5L0.5L水样的采集和保存方法 2 2 2 2 水样保存水样保存水样保存水样保存 各种水质的水样，从采集到分析这段时间里，由各种水质的水样，从采集到分析这段时间里，由各种水质的水样，从采集到分析这段时间里，由各种水质的水样，从采集到分析这段时间里，由于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度的变化，这些变化使得进行分析时的样品已不再的变化，这些变化使得进行分析时的样品已不再的变化，这些变化使得进行分析时的样品已不再的变化，这些变化使得进行分析时的样品已不再

15、是采样时的样品，为了使这种变化降低到最小的是采样时的样品，为了使这种变化降低到最小的是采样时的样品，为了使这种变化降低到最小的是采样时的样品，为了使这种变化降低到最小的程度，必须在采样时对样品加以保护。程度，必须在采样时对样品加以保护。程度，必须在采样时对样品加以保护。程度，必须在采样时对样品加以保护。n n微生物：微生物：微生物：微生物：0 0 0 04444避光保存，每避光保存，每避光保存，每避光保存，每125ml125ml125ml125ml水样加入水样加入水样加入水样加入0.1mg0.1mg0.1mg0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯，保存时间硫代硫酸钠除去残余余氯，保存时间硫代硫酸钠除

16、去残余余氯，保存时间硫代硫酸钠除去残余余氯，保存时间4h4h4h4h。水样的采集和保存方法水样的采集和保存方法n n2.3 水样的过滤和离心n n 需要进行微生物检测的样品n n 不能进行过滤和离心水样的采集和保存方法n n3 3 水样的管理水样的管理n n3.1 3.1 水样的标签设计水样的标签设计 水样采集后，往往根据不同的分析要求，分装成水样采集后，往往根据不同的分析要求，分装成数份，并分别加入保存剂。对每一份样品都应附数份，并分别加入保存剂。对每一份样品都应附一张完整的水样标签。水样标签的设计可以根据一张完整的水样标签。水样标签的设计可以根据实际情况，一般包括实际情况，一般包括:采样目

17、的，监测点数目、位采样目的，监测点数目、位置，监测日期，时间，采样人员等。标签应用不置，监测日期，时间，采样人员等。标签应用不退色的墨水填写，并牢固地贴于盛装水样的容器退色的墨水填写，并牢固地贴于盛装水样的容器外壁上。外壁上。水样的采集和保存方法n n3.2 3.2 水样的运送水样的运送 装有水装有水样样的容器必的容器必须须加以妥善的保加以妥善的保护护和密封，并和密封，并装在包装箱内固定，以防在运装在包装箱内固定，以防在运输输途中破途中破损损，包括，包括材料和运材料和运输输水水样样的条件都的条件都应严应严格要求。除了防震、格要求。除了防震、避免日光照射和低温运避免日光照射和低温运输输外，外，还

18、还要防止新的要防止新的污污染染物物进进入容器和沾入容器和沾污污瓶口使水瓶口使水样变质样变质。n n3.3 3.3 实验室对水样的接收实验室对水样的接收 水样送至实验室时，首先要核对水样，验明标签，水样送至实验室时，首先要核对水样，验明标签，确切无误时签字验收。确切无误时签字验收。如果不能立即进行分析时，则应尽快采取保存措如果不能立即进行分析时，则应尽快采取保存措施，并防止水样被污染。施，并防止水样被污染。水样中细菌学项目检测方法 GB/T 5750.12GB/T 5750.12GB/T 5750.12GB/T 5750.121 1 菌落总数菌落总数 1 1 平皿计数法平皿计数法2 2 总大肠菌

19、群总大肠菌群 1 1 多管发酵法多管发酵法 2 2 滤膜法滤膜法 3 3 酶底物法酶底物法3 3 耐热大肠菌群耐热大肠菌群 1 1 多管发酵法多管发酵法 2 2 滤膜法滤膜法 4 4大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌 1 1 多管发酵法多管发酵法 2 2 滤膜法滤膜法 3 3 酶底物法酶底物法 菌落总数的检验n n方法：平皿计数法方法：平皿计数法n n范围范围 此方法规定了生活饮用水及其水源水中细菌总数的此方法规定了生活饮用水及其水源水中细菌总数的此方法规定了生活饮用水及其水源水中细菌总数的此方法规定了生活饮用水及其水源水中细菌总数的测定方法测定方法测定方法测定方法 此方法适用于测定生活饮用水及其水源水

20、中的细此方法适用于测定生活饮用水及其水源水中的细此方法适用于测定生活饮用水及其水源水中的细此方法适用于测定生活饮用水及其水源水中的细菌总数菌总数菌总数菌总数 细菌总数的检验n n检验步骤：检验步骤：检验步骤：检验步骤：n n1 1 1 1 生活饮用水生活饮用水生活饮用水生活饮用水 1.1 1.1 1.1 1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml1ml1ml1ml充分混充分混充分混充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注

21、约15ml15ml15ml15ml已融化已融化已融化已融化并冷却到并冷却到并冷却到并冷却到45454545左右的营养琼脂培养基，并立即旋左右的营养琼脂培养基，并立即旋左右的营养琼脂培养基，并立即旋左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验对摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验对摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验对摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验对应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。琼脂培养基作为

22、空白对照。琼脂培养基作为空白对照。琼脂培养基作为空白对照。1.2 1.2 1.2 1.2 待冷却凝固后，旋转平皿，使底面向上，置待冷却凝固后，旋转平皿，使底面向上，置待冷却凝固后，旋转平皿，使底面向上，置待冷却凝固后，旋转平皿，使底面向上，置于于于于37373737恒温箱内培养恒温箱内培养恒温箱内培养恒温箱内培养48h48h48h48h，进行菌落计数，即为水，进行菌落计数，即为水，进行菌落计数，即为水，进行菌落计数，即为水样样样样1ml1ml1ml1ml中的细菌总数。中的细菌总数。中的细菌总数。中的细菌总数。细菌总数的检验n n2 2 水源水水源水水源水水源水 2.1 2.1 2.1 2.1

23、以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml1ml1ml1ml充分混充分混充分混充分混匀的水样，注入盛有匀的水样，注入盛有匀的水样，注入盛有匀的水样，注入盛有9ml9ml9ml9ml灭菌水的试管中，混匀成灭菌水的试管中，混匀成灭菌水的试管中，混匀成灭菌水的试管中，混匀成1 1 1 1：10101010稀释液。稀释液。稀释液。稀释液。2.2 2.2 2.2 2.2 吸取吸取吸取吸取1 1 1 1：10101010稀释液稀释液稀释液稀释液1ml1ml1ml1ml注入盛有注入盛有注入盛有注入盛有9ml9ml9ml9ml灭菌水的

24、灭菌水的灭菌水的灭菌水的试管中，混匀成试管中，混匀成试管中，混匀成试管中，混匀成1 1 1 1：100100100100稀释液。按同法依次稀释稀释液。按同法依次稀释稀释液。按同法依次稀释稀释液。按同法依次稀释成成成成1 1 1 1：1000100010001000、1 1 1 1：10000100001000010000稀释液等备用。吸取不同浓稀释液等备用。吸取不同浓稀释液等备用。吸取不同浓稀释液等备用。吸取不同浓度的稀释液时必须更换吸管。度的稀释液时必须更换吸管。度的稀释液时必须更换吸管。度的稀释液时必须更换吸管。2.3 2.3 2.3 2.3 用灭菌吸管吸取用灭菌吸管吸取用灭菌吸管吸取用灭

25、菌吸管吸取2 2 2 23 3 3 3个适宜浓度的稀释液个适宜浓度的稀释液个适宜浓度的稀释液个适宜浓度的稀释液1ml1ml1ml1ml，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检验步骤。水的检验步骤。水的检验步骤。水的检验步骤。细菌总数的检验n n不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法 总大肠菌群的检验n n方法：方法：多管发酵法n n总大肠菌群：总大肠菌群：指一群在37培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和

26、兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，具有指示菌的一般特征，故以此作为粪便污染指标，评价饮水的卫生质量总大肠菌群的检验n n检验步骤检验步骤检验步骤检验步骤 乳糖发酵试验乳糖发酵试验乳糖发酵试验乳糖发酵试验 1 1 1 1 检检检检验验验验生生生生活活活活饮饮饮饮用用用用水水水水时时时时，取取取取10mL10mL10mL10mL水水水水样样样样接接接接种种种种到到到到10mL10mL10mL10mL双双双双料料料料乳乳乳乳糖糖糖糖蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养液液液液中中中中，取取取取1mL1mL1mL1mL水水水水样样样样，接接接接种种种种到到到到10mL10m

27、L10mL10mL单单单单料料料料乳乳乳乳糖糖糖糖蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养液液液液中中中中，另另另另取取取取1mL1mL1mL1mL水水水水样样样样注注注注入入入入到到到到9mL9mL9mL9mL灭灭灭灭菌菌菌菌生生生生理理理理盐盐盐盐水水水水中中中中，混混混混匀匀匀匀后后后后吸吸吸吸取取取取1mL(1mL(1mL(1mL(即即即即0.1mL0.1mL0.1mL0.1mL水水水水样样样样)。注注注注入入入入到到到到10mL10mL10mL10mL单单单单料料料料乳乳乳乳糖糖糖糖蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养液液液液中，每一稀释度共接种中，每一稀释度共接种中，每一稀释度

28、共接种中，每一稀释度共接种5 5 5 5管。管。管。管。对对对对已已已已处处处处理理理理过过过过的的的的出出出出厂厂厂厂自自自自来来来来水水水水，需需需需经经经经常常常常检检检检验验验验或或或或每每每每天天天天检检检检验验验验一一一一次次次次的的的的，可可可可直直直直接接接接种种种种5 5 5 5份份份份10mL10mL10mL10mL双双双双料料料料培培培培养养养养基基基基，每每每每份接种份接种份接种份接种10mL10mL10mL10mL水样。水样。水样。水样。总大肠菌群的检验n n检验步骤检验步骤检验步骤检验步骤 乳糖发酵试验乳糖发酵试验乳糖发酵试验乳糖发酵试验 2 2 检验检验水源水时水

29、源水时，如污染较严重，应加大，如污染较严重，应加大稀释度，可接种稀释度，可接种1 1，0.10.1，0.01mL0.01mL甚至甚至0.10.1，0.010.01，0.001mL0.001mL，每个稀释度接种，每个稀释度接种5 5管，每管，每个水样接种个水样接种1515管，接种管，接种1mL1mL以下水样时，必以下水样时，必须作须作1010倍递增稀释后，取倍递增稀释后，取1mL1mL接种。每递增接种。每递增稀释一次，换用稀释一次，换用1 1支支1mL1mL灭菌分度吸管。灭菌分度吸管。总大肠菌群的检验 3 3 将将接接种种管管置置361361培培养养箱箱内内，培培养养242h242h，如如所所有

30、有乳乳糖糖蛋蛋白白胨胨培培养养管管都都不不产产气气、产产酸酸，则则可可报报告告为为总总大大肠肠菌菌群群阴阴性性。如如有有产产酸酸产产气气者者，则则按按下下列步骤进行。列步骤进行。4 4 分离培养分离培养 将将产产酸酸、产产气气的的发发酵酵管管，分分别别转转种种在在伊伊红红美美蓝蓝琼琼脂脂平平板板上上，于于361361培培养养箱箱内内，培培养养181824h24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落：观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落：深紫黑色，具有金属光泽的菌落深紫黑色，具有金属光泽的菌落 紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落 淡紫红色，中心较深的菌落淡紫红色，

31、中心较深的菌落 做革兰氏染色，镜检和证实试验。做革兰氏染色，镜检和证实试验。总大肠菌群的检验n n 证实试验：n n经革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，同时接种乳经革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，糖蛋白胨培养液，363611培养箱中培养培养箱中培养24h2h24h2h，有产酸产气者，证实有总大肠菌群存，有产酸产气者，证实有总大肠菌群存在。在。n n结果报告：n n根据证实为总大肠菌群的管数，查根据证实为总大肠菌群的管数，查MPNMPN检索表。检索表。总大肠菌群的检验n n方法：方法：滤膜法n n总大肠菌群滤膜法：是是指指用用孔孔径径为为0.450.45mm的的微微孔孔滤滤膜膜过

32、过滤滤水水样样，将将滤滤膜膜贴贴在在添添加加乳乳糖糖的的选选择择性性培培养养基基上上3737培培养养24h24h，能能形形成成特特征征菌菌落落的的需需氧氧和和兼兼性性厌厌氧氧的的革革兰兰氏氏阴阴性性无无芽芽孢孢杆杆菌菌以以检检测测水水中中总总大大肠肠菌群的方法。菌群的方法。n n准备工作：n n1 滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15min，前两次煮沸后需更换水洗涤23次，以除去残留溶剂。n n2 滤器灭菌：用点燃的酒精棉球灭菌，也可用蒸汽灭菌，121，20min。n n过滤水样n n用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定

33、好 滤器，将100mL水样注入滤器中，打开滤器阀门，在 -5.07104Pa下抽滤n n培养n n水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37恒温箱内培养24h2h 结果观察与报告：n n深紫黑色，具有金属光泽的菌落深紫黑色，具有金属光泽的菌落 n n紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落 n n淡紫红色，中心较深的菌落淡紫红色，中心较深的菌落 作革兰氏染色，镜检。n n经经革革兰兰氏氏染染色色为为阴阴性性无无芽芽孢孢杆

34、杆菌菌，再再接接种种乳乳糖糖蛋蛋白白胨胨培培养养液液，3737培培养养24h24h，有有产产酸酸产产气气者者，则判定总大肠菌群阳性。则判定总大肠菌群阳性。n n计算滤膜上生长的总大肠菌群数，报告每计算滤膜上生长的总大肠菌群数，报告每100mL100mL水样中的总大肠菌群数（水样中的总大肠菌群数（CFU/100mLCFU/100mL）n n 100 100总大肠菌群菌落数总大肠菌群菌落数总大肠菌群菌落数总大肠菌群菌落数（CFU/100mLCFU/100mL）数出的总大肠菌群菌落数数出的总大肠菌群菌落数过滤的水样体积过滤的水样体积n n方法：酶底物法n n范围范围范围范围 本本法法可可在在24h2

35、4h判判断断水水样样中中是是否否含含有有总总大大肠肠菌菌群群及含有的总大肠菌群的最可能数（及含有的总大肠菌群的最可能数（MPNMPN）。）。n n 本法可同时检测大肠埃希氏菌。本法可同时检测大肠埃希氏菌。总大肠菌群的检验耐热大肠菌群n n 耐热大肠菌群 n n 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群分开，在44.5 仍然能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。n n总大肠菌群乳糖发酵试验阳性管总大肠菌群乳糖发酵试验阳性管 EC EC培养基，培养基，44.544.5培养培养24h24hn n不产气不产气 阴性阴性n n产气产气 转接转接EMBEMB平板，平板，44.544.5

36、培养培养181824h 24h 典型菌落，阳性典型菌落，阳性n n未经氯化消毒的水，且仅检耐热大肠菌群，或水源水：未经氯化消毒的水，且仅检耐热大肠菌群，或水源水：n n水样水样 接种乳糖蛋白胨培养液，接种乳糖蛋白胨培养液，44.5 44.5 培养培养24h24hn n不产气不产气 阴性阴性n n产气产气 ECEC培养基，培养基，44.544.5培养培养24h24h，判断方法同上面步骤，判断方法同上面步骤n n幻灯片幻灯片 35 35n n耐热大肠菌群滤膜法：是是指指用用孔孔径径为为0.450.45mm的的微微孔孔滤滤膜膜过过滤滤水水样样，细细菌菌被被阻阻留留在在膜膜上上，将将滤滤膜膜贴贴在在添

37、添加加乳乳糖糖的的选选择择性性培培养养基基上上，44.544.5培培养养24h24h，能能形形成成特特征征菌菌落以此来检测水中耐热大肠菌群的方法落以此来检测水中耐热大肠菌群的方法n n检验步骤：检验步骤：n n准备工作：同总大肠菌群准备工作：同总大肠菌群n n过滤水样：同总大肠菌群过滤水样：同总大肠菌群n n培养培养n n用灭菌镊子移取滤膜于用灭菌镊子移取滤膜于MFCMFC培养基上，放入培养基上，放入44.544.5恒温箱内培养恒温箱内培养24h24h2h2h。耐。耐热热大大肠肠菌群在此菌群在此培养基上菌落培养基上菌落为蓝为蓝色，非耐色，非耐热热大大肠肠菌群菌落菌群菌落为为灰灰色至奶油色。色至

38、奶油色。n n对对可疑菌落可疑菌落转转种种ECEC培养基，培养基，44.544.5培养培养24h24h2h2h，如，如产产气气则证实为则证实为耐耐热热大大肠肠菌群。菌群。n n计算被证实的耐热大肠菌群数，报告每计算被证实的耐热大肠菌群数，报告每100mL100mL水水样中的耐热大肠菌群数（样中的耐热大肠菌群数（CFU/100mLCFU/100mL）n n 100 100耐热大肠菌群菌落数（耐热大肠菌群菌落数（耐热大肠菌群菌落数（耐热大肠菌群菌落数（CFU/100mLCFU/100mL）所计的总大肠菌群菌落数所计的总大肠菌群菌落数过滤的水样体积过滤的水样体积n n大肠埃希氏菌n n大肠埃希氏菌多

39、管发酵法是指多管发酵法总大肠菌群阳性，大肠埃希氏菌多管发酵法是指多管发酵法总大肠菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上在含有荧光底物的培养基上44.544.5培养培养24h24h产生产生-葡萄糖葡萄糖醛醛酸酸酶酶，分解，分解荧荧光底物光底物释释放出放出荧荧光光产产物，使培养基在紫外物，使培养基在紫外光下光下产产生特征性生特征性荧荧光的光的细细菌，以此来菌，以此来检测检测水中大水中大肠肠埃希氏埃希氏菌的方法。菌的方法。n n检验步骤：n n总大肠菌群乳糖发酵试验阳性管总大肠菌群乳糖发酵试验阳性管 EC ECMUGMUG管中，管中，44.544.5培养培养24h 366nm24h 366nm波长波长6

40、W6W的紫外灯照射的紫外灯照射n n产生蓝色荧光产生蓝色荧光 阳性阳性n n计算计算EC-MUGEC-MUG的管数，查的管数，查MPNMPN表表n n耐热大肠菌群耐热大肠菌群2 2n n滤膜法：n n用滤膜法检测水样后，将总大肠菌群阳性的滤膜在含有荧光底物的培养基上培养，能产生-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光。n n检验步骤n n接种：总大肠菌群滤膜上有典型生长菌落总大肠菌群滤膜上有典型生长菌落 将滤膜转移至将滤膜转移至NANAMUGMUG上，细菌生长面向上，上，细菌生长面向上，3737培养培养4h4h。将培养后的平板在暗处用将培养后的平板在暗处用366nm366nm波长波长6W6W的紫外灯的紫外灯照射，如果菌落边缘或菌落背面有蓝色荧光产生照射，如果菌落边缘或菌落背面有蓝色荧光产生则表示水样中含有大肠埃希氏菌。则表示水样中含有大肠埃希氏菌。记录有蓝色荧光产生的菌落数并报告，格式同记录有蓝色荧光产生的菌落数并报告，格式同总大总大肠菌群滤膜法肠菌群滤膜法。