实验1大肠杆菌的培养与分离ppt课件.ppt

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1、浙科版生物选修（1）生物技术实践IB模块经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1-1什么是生物技术生物技术生物技术=生物工程生物工程 应用自然科学及工程学原理，以应用自然科学及工程学原理，以微生物体、微生物体、动物体、植物体或其组成部分动物体、植物体或其组成部分作为生物反应器将作为生物反应器将物料进行加工，以提供产品来为社会服务的技术。物料进行加工，以提供产品来为社会服务的技术。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的

2、费用1-2 传统生物技术传统生物技术传统传统生物生物技术指技术指主要主要通过通过微生物的微生物的发发酵酵来来生生产产商品商品.如如:酱、醋、酒、面包、奶酱、醋、酒、面包、奶酪、酸奶等酪、酸奶等经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1-3 现代生物技术一般而言，現代生物一般而言，現代生物技术技术可以分成以下五可以分成以下五种种：一、一、细胞工程细胞工程二、二、发酵工程发酵工程三、三、蛋白质工程蛋白质工程四、四、酶酶工程工程五、五、基因工程基因工程 现现代生物技代生物技术术与与传统传统生物技生物技术术的本的

3、本质质区区别别是是现现代生物技代生物技术术中用到了基因工程。中用到了基因工程。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用一、细胞工程 按照人们的需要和科学设计按照人们的需要和科学设计改变细改变细胞的遗传基础胞的遗传基础，并通过细胞，并通过细胞(组织组织)培培养，细胞杂交养，细胞杂交(融合融合)，核移植和胚胎，核移植和胚胎移植等技术，重组细胞的结构和内含移植等技术，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，快速物，以改变生物的结构和功能，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的繁殖和培养出人们所需要的新物种

4、的生物工程技术。生物工程技术。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用二、发酵工程微生物的无氧呼吸叫微生物的无氧呼吸叫发酵发酵1.1.定义定义：利用利用DNADNA重组技术重组技术对对不同生物的不同生物的遗遗传基因传基因，根据根据人人们们的的意愿意愿，进进行基因的切割、行基因的切割、拼接及重新拼接及重新组组合，再合，再转转入生物入生物体体內，內，产生产生出出人人们们所期望的所期望的产产物或物或创创造出具有新的造出具有新的遗传特遗传特征征的的生物类型生物类型。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费

5、者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用蛋白质工程主要包括了解合成蛋白质蛋白质工程主要包括了解合成蛋白质的的DNADNA编码序列、蛋白质的分离纯化、编码序列、蛋白质的分离纯化、蛋白质的序列分析和结构功能分析、蛋白质的序列分析和结构功能分析、蛋白质结晶和结构力学分析等。蛋白质结晶和结构力学分析等。三、蛋白质工程经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 酶酶工程工程即利用基因工程等手段，改变酶或即利用基因工程等手段，改变酶或蛋白质的折叠方式、空间结构、催化活蛋白质的折

6、叠方式、空间结构、催化活性和稳定性等性和稳定性等四、酶工程经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用选修1需学习的实验 （微生物的利用）（微生物的利用）实验实验1 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离 （酶的应用）（酶的应用）实验实验4 果汁中的果胶和果胶酶果汁中的果胶和果胶酶 实验实验5 加酶洗衣粉的使用条件和效果加酶洗衣粉的使用条件和效果 实验实验6-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 （生物工程在食品加工中的应用）（生物工程在食品加工中的应用）实验实验8 果酒及果

7、醋的制作实验果酒及果醋的制作实验 实验实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定（浅尝现代生物工程）（浅尝现代生物工程）实验实验11 植物的组织培养植物的组织培养第一部分第一部分:微生物的利用微生物的利用经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用一、基础知识一、基础知识1微生物2培养基3无菌技术二、实验操作2 2微生物的接种技术微生物的接种技术1操作步骤操作步骤经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费

8、用微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：病毒病毒细菌和蓝细菌细菌和蓝细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动植物原生动植物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构的甚至没有细胞结构.原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一基础知识（一）微生物（一）微生物经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1放线菌放线菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状

9、的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用朊病毒（蛋白质病毒）经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用病毒的增殖：病毒的增殖：经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用3真菌真菌经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为

10、消费者购买商品的价款或接受服务的费用如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用4细菌的外形与大小细菌：细菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞微小而透明微小而透明微小而透明微小而透明，通常用适当染料，通常用适当染料染色染色染色染色（革（革兰氏染色）兰氏染色）后显微镜观察后显微镜观察图图1-1常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌B.杆菌杆菌C.弧菌弧菌经营者提

11、供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用细菌细胞由外向里依次有鞭毛鞭毛鞭毛鞭毛、菌菌（纤）毛纤）毛纤）毛纤）毛、荚膜荚膜荚膜荚膜、细胞壁细胞壁细胞壁细胞壁、细胞膜、细胞膜、细胞膜、细胞膜、细胞质细胞质细胞质细胞质、拟核拟核拟核拟核，细胞质中又有液细胞质中又有液细胞质中又有液细胞质中又有液泡、储存性颗粒、泡、储存性颗粒、泡、储存性颗粒、泡、储存性颗粒、核质等核质等核质等核质等。细菌的构造图图图图 细菌的结构细菌的结构细菌的结构细菌的结构细胞膜细胞膜拟核拟核经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加

12、赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用*细胞壁成分：肽聚糖成分：肽聚糖成分：肽聚糖成分：肽聚糖细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？固定细胞外形；固定细胞外形；固定细胞外形；固定细胞外形；w w 保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；w w 阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞；使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含

13、毒毒素素经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽

14、孢又可以萌发，形成一个细菌分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用菌落

15、细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用5细菌的营养物质 碳源碳源 有机有机 、无机、无机氮源氮源 有机有机 、无机、无机水水无机盐无机盐生长因子生长因子 即细菌生长必需，而自身不能合即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘧啶经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用n根据细菌所利用的根据细菌所利用的能

16、源和碳源能源和碳源的不同的不同将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。n自养菌自养菌:n异养菌异养菌:腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌细菌的营养类型细菌的营养类型 光能自养型光能自养型:光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型:硝化细菌硝化细菌,铁细菌铁细菌,硫细菌硫细菌大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用（二）培养基（二）培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的

17、混合营养液。的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按）按物理状态物理状态来分：培养基可分为来分：培养基可分为固体培固体培养基、半固体培养基养基、半固体培养基和和液体培养基液体培养基。其中固。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等，而液体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等，而液体培养基一般用于工业生产。体培养基一般用于工业生产。（2 2）按）按功能功能来分，可分为来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别鉴别培养基培养基。（3 3）按）按化学成分化学成分来分，可分为来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途经营者提供商品或者服务有

18、欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长按按物理状态物理状态来分来分经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔按按物理状态物理状态来分来分经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力

19、(弥散弥散)观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定按按物理状态物理状态来分来分经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青

20、霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞按按功能功能来分来分经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用鉴别培养基伊红美蓝乳糖培养基伊红美蓝乳糖培养基按按功能功能来分来分当大当大肠肠杆菌分解乳糖杆菌分解乳糖产产酸酸时细时细菌菌带带正正电电荷被染成荷被染成红红色，再与美色，再与美蓝结蓝结合形成紫黑色菌落，并合形成紫黑色菌落，并带带有有绿绿色金属色金属光光泽泽。常用的伊。常用的伊红红美美蓝蓝乳糖培养基，可乳糖培养基，可用来用来鉴别饮鉴别饮用水用水和乳制品中是否存在大和乳制品中

21、是否存在大肠肠杆菌等杆菌等细细菌菌经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 天然培养基有血清、血浆、和组天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分复杂，影响对某成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染易发生支原体污染;天然培养基：天然培养基：按按化学成分化学成分来分来分经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当

22、按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 根据细胞生存所需物质的种类和根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。数量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。一些辅助物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相标准化生产，组分和含量相对固定对固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。足体外细胞生长需要。合成培养基合成培养基:按按化学成分化学成分来分来分经营者提供

23、商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）白、铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子；激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。冷析球蛋白、胶原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。血清）。按按化学成分

24、化学成分来分来分经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用3.培养基内所含的基本物质一般营养物质一般营养物质(1)水水 (2)碳源碳源 (3)氮源氮源 (4)无机盐无机盐其他物质其他物质 pH、特殊营养物质、特殊营养物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透渗透压压等的要求。等的要求。2.2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往

25、往需要采用不同的培养基配方的培养基配方.经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用(2)碳源碳源可作为碳源的物质有可作为碳源的物质有:含碳无机物含碳无机物:、含碳有机物：含碳有机物：蛋白质蛋白质脂肪酸脂肪酸碳酸盐碳酸盐碳酸氢盐碳酸氢盐糖类（主要）葡萄糖糖类（主要）葡萄糖 乳糖乳糖二氧化碳二氧化碳不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同a.异养型微生物的碳源为异养型微生物的碳源为b.自养型微生物的碳源为自养型微生物的碳源为含碳有机物（有机碳）含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）含碳无机物（无机

26、碳）经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用(3)氮源氮源可作为氮源的物质有可作为氮源的物质有:含氮无机物：含氮无机物：、含氮有机物：含氮有机物：蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素固氮微生物所利用的氮源是固氮微生物所利用的氮源是氮气氮气氨气氨气硝酸盐硝酸盐氨盐氨盐氮气氮气经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用不同的微生物往往需要采用不同的培不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方养基配方 不管哪种培养基，一般都含有不

27、管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、生长因子生长因子等等营养物质，另外营养物质，另外还需要满足微生物生长对还需要满足微生物生长对pH pH、氧气氧气、渗透压渗透压的要求的要求细菌喜荤，霉菌喜素细菌喜荤，霉菌喜素大肠杆菌配方：酵母提取物：大肠杆菌配方：酵母提取物：0.5g蛋白胨：蛋白胨：0.5gNacl：0.5g琼脂琼脂：1g水水:50ml细菌喜中性偏碱，霉菌喜中性偏酸细菌喜中性偏碱，霉菌喜中性偏酸经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用3培养基配制原则：营养要协调营养要协

28、调目的要明确目的要明确PH要适宜要适宜经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用（三）无菌技术（三）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。所有防止杂菌污染的方法。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒洁和消毒；（2）将培养器皿、

29、接种用具和培养基等器具进行）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；灯火焰附近进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。触。从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用（）（）消毒定义：消毒定义：2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别是指杀灭病原微生物的方法。是指杀灭病原微生物的

30、方法。区分区分为为高程度消毒高程度消毒、中程度消毒中程度消毒、低低程度消毒程度消毒三种方式。三种方式。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min 15min 如牛奶的消毒如牛奶的消毒3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4

31、 4、紫外线消毒紫外线消毒(2)消毒的方法：消毒的方法：经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用灭菌概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。微生物，包括芽孢和孢子。方法：方法：a 灼烧灭菌灼烧灭菌 b 干热灭菌干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌a.灼烧灭菌灼烧灭菌微生物的接种工具微生物的接种工具(接接种环、接种针种环、接种针)或其或其他金属用具直接在火他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧焰的充分燃烧层灼烧注意适用范围注意适用范围经营者

32、提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用b.干热灭菌干热灭菌 c.160170；12h能耐高温的需要保持干能耐高温的需要保持干燥的物品燥的物品(玻璃器皿玻璃器皿)c.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 d.100kPa 121 e.15-30min通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还

33、有什么目的？外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。）需要消毒。1经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到

34、的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离菌种保存菌种保存培养基的培养基的配制配制灭菌灭菌超净工件台超净工件台倒平板倒平板接种液体接种液体培养培养划线分离划线分离培养培养经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用3.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱

35、中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用二、实验操作二、实验操作1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基2纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌3将接种后的培养基和一个未接种的培将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入养基放入37恒温箱中培养恒温箱中培养12h和和24h后，观察并记录后，观察并记录经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用二、实验操作二、实验操作1.制备牛肉膏蛋白胨培

36、养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用大肠杆菌的培养和分离实验操作大肠杆菌的培养和分离实验操作培养基的配置与灭菌培养基的配置与灭菌取取2个个250ml的三角瓶中分别装入的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上尚未凝固），加上封口膜封口膜，牛皮纸包装后高，牛皮纸包装后高压锅灭菌压锅灭菌15min。LB液体培养基液体培养基细菌的扩大培养细菌的扩大培养LB固体培养基固体培

37、养基细菌的划线分离细菌的划线分离封口膜：既通气封口膜：既通气又不使菌进入又不使菌进入经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用2 2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：划线分离法和涂布分离法划线分离法和涂布分离法划线分离法划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体

38、胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这这就是菌落就是菌落.微生物的接种技术微生物的接种技术经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤过滤：这一步可以省去。：这一步可以省去。5 5分装分装：分装过程中注意不要使培养：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。三角烧瓶容积的一半为宜。6

39、6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 8 8灭菌灭菌:将将5050mlml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将将培养皿培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2 2h

40、 h。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附左右时，在酒精灯附近倒平板。近倒平板。2 2d d后观察平板，无杂菌污染才可用后观察平板，无杂菌污染才可用来接种来接种.10 10无菌检查无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔

41、偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用平板划线的操作平板划线的操作经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用不能使用脱脂棉，不能使用脱脂棉，否则容易吸水，否则容易吸水，造成污染。造成污染。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1.旦划破，会造成划线不均匀，难以旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；达到分离单菌落的目的；2.是存留在划破处的单个细胞无法形是存留在划破处的单个细

42、胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。长，会形成一个条状的菌落。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的

43、金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长

44、的菌落的颜色、形状、大小基如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察显

45、不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。良好的科学态度与习惯。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用注意事项注意事项:1.接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养但要在培养基不同位置基不同位置连续划线多次连续划线多次.2.划线划线首尾不能相接首尾不能相接3.划线后划线后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养1224h经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其

46、受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。生物污染培养基。经

47、营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养经营者提供商品或者服

48、务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用平板划线的操作平板划线的操作经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用不能使用脱脂棉，不能使用脱脂棉，否则容易吸水，否则容易吸水，造成污染。造成污染。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1.旦划破，会造成划线不均匀，难以旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；达到分离单菌落的目的；2.是存留在划

49、破处的单个细胞无法形是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。长，会形成一个条状的菌落。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无

50、后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记