《临床检验基础》PPT课件.ppt
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1、临床检验基础临床检验基础第一章 血液一般检验皖北卫生职业学院皖北卫生职业学院王玲玲王玲玲第一节 血液标本采集与处理一一血液标本类型血液标本类型血液标本类型血液标本类型 二二血液标本抗凝剂与添加剂血液标本抗凝剂与添加剂血液标本抗凝剂与添加剂血液标本抗凝剂与添加剂 三三血液标本采集血液标本采集血液标本采集血液标本采集 四四血液标本运送、保存与处理血液标本运送、保存与处理血液标本运送、保存与处理血液标本运送、保存与处理 1全血全血2血浆血浆 主要用于化学和凝血项目检测等。主要用于化学和凝血项目检测等。3血清血清 主要用于化学和免疫学等项目检测。主要用于化学和免疫学等项目检测。血清与血浆比较,主要是前
2、者缺乏纤维蛋白原及某些凝血因子。4血细胞血细胞静脉全血动脉全血末梢全血一、血液标本类型静脉全血动脉全血末梢全血血液标本添加剂血液标本添加剂血液标本添加剂血液标本添加剂抗凝剂抗凝剂分离胶分离胶促凝剂促凝剂二、血液标本抗凝剂与添加剂我是血浆,我是血浆,还是血清呢?还是血清呢?抗凝:采用物理或化学的方法去除或抑制某种凝血因子的活性,以阻止血液凝固的方法称为抗凝。抗凝剂:能够阻止血液凝固的化学物质称为抗凝剂(anticoagulant)或抗凝物质。(一)抗凝剂血细胞血细胞(一)抗凝剂常常 用用 抗抗 凝凝 剂剂(二)添加剂其其 它它 常常 用用 添添 加加 剂剂 血液标本采集血液标本采集静脉采血法静脉
3、采血法皮肤采血法皮肤采血法动脉采血法动脉采血法三、血液标本采集(一)皮肤采血法皮肤采血法,又称毛细血管采血法,主要用于需要微量血液检验项目和婴幼儿血常规检验。1、采血针皮肤采血法(1)主要器材:一次性采血针、微量吸管、消毒用品等。一次性采血针一次性采血针(一)皮肤采血法(2)采血部位:一般采用手指指端或耳垂,婴幼儿可选择 趾或足跟内外侧缘。世界卫生组织(WHO)推荐采血部位为左手中指或无名指指端内侧。选择皮肤完好处采血。(一)皮肤采血法材料准备材料准备材料准备材料准备(3)简要操作 选择采血部位选择采血部位选择采血部位选择采血部位按摩按摩按摩按摩消毒消毒消毒消毒针刺针刺针刺针刺吸血吸血吸血吸血
4、止血止血止血止血(3)简要操作(一)皮肤采血法(4)注意事项:采血时必须注意严格消毒和生物安全防范。采血针应为一次性使用的“专用采血针”,针刺深度以23mm为宜。取血时可稍加挤压,但切忌用力过大,以免使过多组织液混入血液中。采血要迅速,防止流出的血液发生凝固。手工法血液标本采集顺序顺序为:血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数及白细胞分类计数、血型鉴定等。其他,激光皮肤采血法(二)静脉采血法静脉采血法临床应用广泛,所采集的静脉血能准确反映全身血液的真实情况,因其不易受气温和末梢循环变化的影响,更具有代表性。普通采血法负压采血法1、普通采血法 即传统的静脉采血方法。(1)主要器材:注射
5、器、试管、消毒用品等。普通采血法负压采血法(二)静脉采血法(2)采血部位:通常采用肘部静脉。当肘部静脉不明显时,可采用手背部、手腕部和外踝部静脉。幼儿可采用颈外静脉采血,其它:股静脉、大隐静脉及锁骨下静脉等。肘部静脉肘部静脉(二)静脉采血法材料准备材料准备材料准备材料准备(3)简要操作 选择静脉选择静脉选择静脉选择静脉扎压脉带扎压脉带扎压脉带扎压脉带消毒消毒消毒消毒穿刺穿刺穿刺穿刺抽血抽血抽血抽血止血止血止血止血放血与混匀放血与混匀放血与混匀放血与混匀(二)静脉采血法(4)注意事项:根据检验项目判断所需采血量,选择注射器。严格执行无菌操作。采血时切忌将针栓往回推,以免注射器中的空气进入血循环形
6、成气栓。为避免溶血,注射器和容器必须干燥,抽血时应避免产生大量气泡,抽血完毕后应先拔下针头,然后将血液沿管壁徐徐注入容器,需要抗凝时应与抗凝剂轻轻混匀,切忌用力振荡试管。进行血小板功能试验,为了防止血小板激活,须使用塑料注射器或经硅化处理后的玻璃试管或塑料试管。采血一般取坐位或卧位,不能立位采血,因为体位影响水分在血管内外的分布,影响被测血液成分的浓度。压脉带捆扎时间不应超过1分钟,否则会使血液成分浓度发生改变。(二)静脉采血法2、负压采血法 又称为真空采血法。(1)主要器材:负压采血系统 双向采血针 真空采血管 套管式套管式一次性采血针一次性采血针头皮静脉式头皮静脉式一次性采血针一次性采血针
7、 (2)采血部位:同普通采血法。(二)静脉采血法材料准备材料准备材料准备材料准备(3)简要操作 选择静脉选择静脉选择静脉选择静脉扎压脉带扎压脉带扎压脉带扎压脉带消毒消毒消毒消毒穿刺针端穿刺穿刺针端穿刺穿刺针端穿刺穿刺针端穿刺混匀或不混匀血液混匀或不混匀血液混匀或不混匀血液混匀或不混匀血液退出刺塞针端针头退出刺塞针端针头退出刺塞针端针头退出刺塞针端针头刺塞针端刺入采血管刺塞针端刺入采血管刺塞针端刺入采血管刺塞针端刺入采血管止血止血止血止血退出穿刺针端针头退出穿刺针端针头退出穿刺针端针头退出穿刺针端针头(二)静脉采血法(4)注意事项:使用前切勿松动或拔除采血管的胶塞头盖。刺塞针端的乳胶套能防止拔除
8、采血试管后继续流血污染周围环境,达到封闭采血防止污染环境的作用,因此不可取下乳胶套。采血完毕后,先拔下刺塞针端的采血试管,后拔穿刺针端。一次采血,使用玻璃采血管多管采集血液标本的分配顺序为:血培养管、无抗凝剂血清管、枸橼酸钠抗凝管、其他抗凝剂管;使用塑料采血管分配顺序:血培养管(黄色)、枸橼酸钠抗凝管(蓝色)、加或未加促凝剂或分离胶的血清管、加或未加分离胶的肝素管(绿色)、EDTA抗凝管(紫色)、加葡萄糖分解抑制剂管(灰色)。(三)动脉采血法1主要器材:2ml或5ml注射器(准备l000U/ml无菌肝素生理盐水溶液,以湿润注射器内腔、橡皮塞),或一次性动脉采血针、消毒用品等。2采血部位 多选用
9、桡动脉(最方便)股动脉、肱动脉。3简要操作 桡动脉采血桡动脉采血(三)动脉采血法4.注意事项:隔绝空气:用于血气分析的标本,采集后先立即封闭针头斜面,再混匀标本。立即送检:标本采集后应立即送检,否则应将标本置于26保存,但保存时间不应超过2小时。防止血肿:采血完毕,拔出针头后,用消毒干棉签用力按压采血处止血,以防形成血肿。血液标本血液标本预处理与保存预处理与保存检验后保存与处理检验后保存与处理运送运送接受与拒收接受与拒收四、血液标本运送、保存与处理(一)(一)血液标本运送血液标本运送生物安全原则生物安全原则唯一标识原则唯一标识原则及时运送原则及时运送原则四、血液标本运送、保存与处理抗凝标本凝固
10、抗凝标本凝固(二)(二)(二)(二)血液标本拒收血液标本拒收血液标本拒收血液标本拒收采集容器不当采集容器不当 标本污染、容器破损标本污染、容器破损 申请单和标本标识不一致申请单和标本标识不一致 采血量不足或错误采血量不足或错误 溶血溶血转运条件不当转运条件不当 抗凝剂使用错误抗凝剂使用错误 四、血液标本运送、保存与处理预处理:血常规检测:室温存放 血浆:可通过离心抗凝血获得血浆;血清:对未含促凝剂或分离胶采血管的血液标本置于37孵育,待血液完全凝固后离心分离血清;含促凝剂或分离胶采血管的血液标本可直接离心分离血清;对于需要特定细胞的实验,应根据要求采用不同的细胞分离液 或分离技术分离细胞,同时
11、尽量避免混入其他细胞。四、血液标本运送、保存与处理(三)血液标本预处理与保存(三)血液标本预处理与保存保存:1分离后标本 不能及时检验或需保留标本,一般应将标本置于4冰箱内保存。标本需保存至少1个月时,放置于-20冰箱内保存。标本需保存至少3个月时,分离后置于-70冰箱保存。标本存放时需要密封,以免水分挥发而使标本浓缩。标本应避免反复冻融。2立即送检标本 如血氨(密封送检)、红细胞沉降率、血气分析(密封送检)、酸性磷酸酶、乳酸等标本。四、血液标本运送、保存与处理四、血液标本运送、保存与处理(四)血液标本检验后保存与处理(四)血液标本检验后保存与处理 血液一般分析标本:室温24小时后处理,一般生
12、化检验项目:4存放7天后处理,特殊检验项目:吸出血清或血浆-20冰箱内保存1个月以上。保存检验标本时应包括标本信息的保存,且与分离的血浆或血清标本相对应。保存原则是在有效的保存期内确保被检测物质不会发生明显改变。检验后废弃的血液标本处理严格按照国家标准实验室生物安全通用要求(GB19489-2004),由专人负责处理,根据医疗废物管理条例规定使用专用的容器或袋子包装,由专人送到指定的地点集中处理。检验后废弃的血液标本一般由专门机构采用焚烧的办法处理。处处 理理保保 存存(一)检验申请(一)检验申请(二)患者准备(二)患者准备五、血液标本采集、运送与保存质量保证(三)标本采集(三)标本采集(四)
13、标本运送(四)标本运送第二节 血涂片的制备与染色一一血涂片制备血涂片制备血涂片制备血涂片制备二二血涂片染色血涂片染色血涂片染色血涂片染色第二节 血涂片的制备与染色推片载玻片血液将推片匀速向前,勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度:快、大(厚)。慢、小(薄)一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B 1 2 3第二节 血涂片的制备与染色良好血液涂片标准良好血液涂片标准厚薄要适宜,厚薄要适宜,厚薄要适宜,厚薄要适宜,头体尾要明显,头体尾要明显,头体尾要明显,头体尾要明显,细胞分布要均匀,细胞分布要均匀,细胞分布要均匀,细胞分布要均匀,血膜边缘要整齐,
14、血膜边缘要整齐,血膜边缘要整齐,血膜边缘要整齐,并留有一定的空隙并留有一定的空隙并留有一定的空隙并留有一定的空隙。引引起起血血涂涂片片分分布布不均的主要原因不均的主要原因:推片边缘不整齐推片边缘不整齐用力不均匀用力不均匀载片不清洁载片不清洁第二节 血涂片的制备与染色二、血涂片染色二、血涂片染色(一一)瑞氏染色法瑞氏染色法瑞氏染色法瑞氏染色法 (Wrights stain)(Wrights stain)1.1.瑞氏染料(复合染料)瑞氏染料(复合染料)酸性染料伊红酸性染料伊红 (E-)(E-)碱性染料亚甲蓝碱性染料亚甲蓝 (M+(M+,又名美蓝,又名美蓝)美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级美蓝
15、容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料染料 (即天青即天青),甲醇的作用:甲醇的作用:溶解美蓝和伊红,解离为溶解美蓝和伊红,解离为 M+M+和和E-E-;脱水作用,固定细胞形态,增强染色效果脱水作用,固定细胞形态,增强染色效果第二节 血涂片的制备与染色第二节 血涂片的制备与染色2 2 2 2 染色原理染色原理染色原理染色原理 是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。物理的吸附作用物理的吸附作用物理的吸附作用物理的吸附作用化学的亲和作用化学的亲和作用化学的亲和作用化学的亲和作用
16、 嗜酸性颗粒嗜酸性颗粒嗜酸性颗粒嗜酸性颗粒碱性碱性碱性碱性与酸性染料与酸性染料与酸性染料与酸性染料粉红色;粉红色;粉红色;粉红色;细胞核蛋白细胞核蛋白细胞核蛋白细胞核蛋白酸性酸性酸性酸性与碱性染料与碱性染料与碱性染料与碱性染料紫蓝色或蓝色;紫蓝色或蓝色;紫蓝色或蓝色;紫蓝色或蓝色;中性颗粒中性颗粒中性颗粒中性颗粒等电状态等电状态等电状态等电状态与伊红和美蓝与伊红和美蓝与伊红和美蓝与伊红和美蓝染淡紫红色。染淡紫红色。染淡紫红色。染淡紫红色。第二节 血涂片的制备与染色勿冲洗再加勿冲洗再加瑞氏染色瑞氏染色液液5-8滴后将滴后将液和液和液充分混匀静置液充分混匀静置10分钟分钟直接流水冲洗3-5分钟(切
17、勿先倒掉染液)涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞李李四四1 12 23 3涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-8滴滴覆盖整个血膜覆盖整个血膜1分钟分钟 3.pH 3.pH 3.pH 3.pH值的影响值的影响值的影响值的影响 细胞各种成分均属蛋白质(两性电解质)细胞各种成分均属蛋白质(两性电解质)细胞各种成分均属蛋白质(两性电解质)细胞各种成分均属蛋白质(两性电解质)第二节 血涂片的制备与染色第二节 血涂片的制备与染色 染色所用玻片必须清洁,无酸碱污染。染色所用玻片必须清洁,无酸碱污染。染色所用玻片必须清洁,无酸碱污染。染色所用玻片必须清洁,无酸碱污染。配制瑞氏染液必须用优
18、质甲醇。配制瑞氏染液必须用优质甲醇。配制瑞氏染液必须用优质甲醇。配制瑞氏染液必须用优质甲醇。稀释染液必须用缓冲液。稀释染液必须用缓冲液。稀释染液必须用缓冲液。稀释染液必须用缓冲液。冲洗用水应近中性。冲洗用水应近中性。冲洗用水应近中性。冲洗用水应近中性。新新新新鲜鲜鲜鲜配配配配制制制制的的的的染染染染料料料料偏偏偏偏碱碱碱碱,须须须须在在在在室室室室温温温温贮贮贮贮存存存存一一一一定定定定时时时时间间间间,贮贮贮贮存存存存时间愈久,染色效果愈好。时间愈久,染色效果愈好。时间愈久,染色效果愈好。时间愈久,染色效果愈好。DeamGilliland DeamGilliland 等等等等采采采采用用用用
19、吸吸吸吸光光光光度度度度比比比比值值值值 作作作作为为为为瑞瑞瑞瑞氏氏氏氏染染染染液液液液的的的的质质质质量量量量规格。规格。规格。规格。第三节 白细胞显微镜检查一一白细胞计数白细胞计数白细胞计数白细胞计数 二二白细胞分类计数白细胞分类计数白细胞分类计数白细胞分类计数 三三白细胞形态检查白细胞形态检查白细胞形态检查白细胞形态检查 四四嗜酸性粒细胞计数嗜酸性粒细胞计数嗜酸性粒细胞计数嗜酸性粒细胞计数五五红斑狼疮细胞检查红斑狼疮细胞检查红斑狼疮细胞检查红斑狼疮细胞检查血液血液血浆血浆血细胞血细胞红细胞红细胞白细胞白细胞血小板血小板中性粒细胞中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞淋巴细胞单核细胞
20、单核细胞嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞第三节 白细胞显微镜检查 白细胞计数(white blood cell count)是指测定单位体积外周血中各种白细胞的总数。白细胞计数结果仅反映循环池中的细胞数量。一、白细胞计数1原理 白细胞显微镜计数法是将全血用稀酸溶液稀释一定倍数,使红细胞破坏后,充入改良牛鲍(Neubauer)计数板内,在普通光学显微镜下计数一定范围内的白细胞数,经换算求出每升血液内的白细胞总数。2白细胞稀释液 冰乙酸 破坏红细胞,且使白细胞核固定清晰 亚甲蓝或结晶紫 使白细胞核略着色,便于识别 蒸馏水(一)方法(一)方法3器材(1)改良牛鲍计数板(2)改良牛鲍计数板专用盖玻片(血盖片)
21、(3)微量吸管(4)显微镜一、白细胞计数Neubauer计数盘(牛鲍氏计数盘)计数盘(牛鲍氏计数盘)盖玻片血细胞计数板侧面观液面高度为液面高度为 0.1 mm0.1 mm一、白细胞计数大方格中方格小方格每个大方格体积=1X1x0.1=0.1mm3=0.1 L 0.38ml稀释液稀释液 混匀混匀 20ul血液血液 充池、静置充池、静置 镜下计数、计算镜下计数、计算 4.简要操作 一、白细胞计数计数:用低倍镜计数四个大方格内的白细胞数(计数:用低倍镜计数四个大方格内的白细胞数(N N)。)。计算:计算:WBC/L=N/4 10 106 20 =N/20 X 109/L 0.1L 0.1L 1L 1
22、L 1L1L稀释倍数稀释倍数一、白细胞计数1采血时间的影响 2计数误差(1)技术误差(technical errors)器材误差 采血与取血不当 稀释倍数不准 充池不当 白细胞计数不准确(2)固有误差(inherent errors)又叫计数域误差有核红细胞的影响校正公式:(二)质量保证(二)质量保证x:校正前白细胞数y:在白细胞分类计数时,计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。一、白细胞计数 例:校正前白细胞数为例:校正前白细胞数为12109/L,在作白细胞分类计数时计数,在作白细胞分类计数时计数100个白细胞的同时数得的有核红细胞数为个白细胞的同时数得的有核红细胞数为40个,则个,
23、则校正后白细胞数校正后白细胞数L =1210L =12109 9/L /L =8.610 =8.6109 9/L/L 例:校正前白细胞数为例:校正前白细胞数为12109/L,在作白细胞分类计数时计数,在作白细胞分类计数时计数100个白细胞的同时数得的有核红细胞数为个白细胞的同时数得的有核红细胞数为40个,则个,则校正后白细胞数校正后白细胞数L =1210L =12109 9/L /L =8.610 =8.6109 9/L/L一、白细胞计数4 4经验控制经验控制 以血涂片中所见白细胞的多少粗略核对白细胞计数结果有无大的误差。表表 血涂片白细胞密度与白细胞总数的关系血涂片白细胞密度与白细胞总数的关
24、系一、白细胞计数(三)方法学评价(三)方法学评价 白细胞计数的方法学评价白细胞计数的方法学评价一、白细胞计数白细胞总数高于参考区间的上限称白细胞增多,低于参考区间的下限称白细胞减少。白细胞总数增多或减少主要受中性粒细胞数量的影响,其临床意义见白细胞分类计数。(五)临床意义(五)临床意义(四)参考区间(四)参考区间成人:(3.59.5)109/L;儿童:(512)109/L;6个月2岁:(1112)109/L;新生儿:(1520)109/L一、白细胞计数二、白细胞分类计数对各种白细胞分别计数,即白细胞分类计数(differential count,DC)。白细胞分类计数的方法有 显微镜分类计数法
25、 血细胞分析仪分类计数法(一)方法(一)方法显微镜分类计数主要是将染色好的血涂片在油镜下根据白细胞形态学特征逐个分别计数(一般计数100200个白细胞),得出各种白细胞的相对比值或百分率,并注意观察其形态的变化。1简要操作 血涂片制备血涂片制备血涂片制备血涂片制备染色染色染色染色低倍镜下检查低倍镜下检查低倍镜下检查低倍镜下检查 油镜下分类计数油镜下分类计数油镜下分类计数油镜下分类计数 采血采血采血采血高倍镜下检查高倍镜下检查高倍镜下检查高倍镜下检查 二、白细胞分类计数 最佳观察部位:最佳观察部位:体 尾 交 界 处头体尾体尾交界2报告方式(1)白细胞分类计数结果:以各种白细胞所占的比值或百分率
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