生物安全培训资料课件.ppt
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1、临床实验室生物污染与生物安全.概述生物安全防护(biosafety containment)(定义):指在实验室环境下处理和 保存感染性物质的过程中采用 的一系列的防护措施,包括一 级防(primary containment)和二级防护(secondary-containment)。.概述生物安全防护(biosafety containment)(目的):是减低或消除潜在危险因子 对实验人员、实验室内外环境的 污染。(要素):1、实验室操作和技术 2、实验室安全设备 3、实验室设施设计 其中一级防护与二级防护有别.一级防护与二级防护的区别一级防护:包括规范操作技术与规程,配置适当 的安全设备
2、,保护操作人员和室内直 接环境免遭感染性物质的污染。二级防护:包括合理的实验室设施设计和严格规 范的操作流程,用以保护实验室外环 境免受感染性物质污染。.一、临床实验室生物污染的原因及种类原因:致病因子,包括细菌、病毒、真菌 寄生虫及其他。种类:空气污染、水的污染、人体污染、物体表面的污染。.空气污染内:平面布局、气流方向 合理死角区域 缩小外:直接外排或扩散 高效过滤 密闭或压力差.水、人体、物体表面污染实验过程中产生的大量污水 特殊处理后排放工作人员实验室感染(接触、吸入)专门防护规程物体表面污染(溅出、溢出、穿用错误等)正确实施 .二、临床实验室的生物安全防护概述:1、目的:(p234
3、两个确保)2、内容:(根据实验室级别)3、评估:(实验对象对人或环境的危害性).(一)实验室的分类、分级及适用范围分类:一般生物 脊椎动物 一级(BSL-1)分级:二级(BSL-2)三级(BSL-3)四级(BSL-4)适用范围:级别不同 要求不同 适用范围不同(biological safety labolatory,BSL).分级原则:据所处理的微生物及其 毒素的危害程度(BSL-1)无致病作用的微生物。(BSL-2)具有中等潜在危害的微生物。(BSL-3)呼吸传播,使人传染严重甚至是致病 微生物及其毒素,传播途径明,目前 已有疫苗。(BSL-4)高度危险性,通过气溶胶传播或传播途 径不明,
4、目前尚无疫苗或治疗方法的致 病微生物及其毒素。.不同级实验室的适用范围和设置.一级生物安全防护实验室1、适用于:用于教学的普通微生物实验室2、要求:无须使用生物安全柜.二级生物安全防护实验室(BSL-2)1、适用于:(1)含漱液、血清和血液等样品的诊断检测(2)溶液、固定或用其他方法处理灭活的病毒和/或无传染性病毒基因片段(3)常规的细菌和毒素检测(4)能产生气溶胶的样品处理(5)临床样品的包装、分装(6)离心管和离心机转头的封闭与开启.二级生物安全防护实验室(BSL-2)2、特殊情况:(1)致病微生物气溶胶或溅出的操作(2)处理高浓度或大容量感染性材料3、要求:在生物安全柜或物理抑制设备中进
5、行,并使 用个体防护设备。.三级生物安全防护实验室三级生物安全防护实验室(BSL-3)或相当于P3实验室1、适用于:主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至 是致死疾病的致病微生物及其毒素(如禽 流感),通常已(可)有预防传染的疫 苗。艾滋病病毒的研究(血清学实验除 外)2、要求:在三级生物安全防护实验室中进行。.BSL-2(P2)BSL-3(P3).BSL 4 戏称为魔鬼实验室分五个区有10道门.洁净台/生物安全柜(BSCs).洁净工作台1、环境空气工作台过滤样本直接 吹向操作者排入室内2、保护产品,不保护操作人员及操作环境3、通过样本的空气过滤对直径大于0.3微 米的颗粒,过滤效率99.9%无
6、医院药房 或无菌设备的组装。.生物安全柜1、环境空气进入工作台过滤样本 高效过滤排入室内或室外2、经过样本的空气及排放出的空气均经过 滤,对直径大于0.3微米的颗粒,超高 效过滤器的过滤效率为99.999%。3、采用负压装置,形成气幕防护屏障,保 护操作人员安全应用于有一定生物危险 的操作。.洁净工作台洁净工作台生物安全柜生物安全柜1、环境空气(流动/排出方式)2、使用目的(产品、操作人、环境)3、空气滤过能力4、气幕屏障5、应用.生物安全柜工作原理 1.物理屏障 2.高效过滤 3.空气屏障 4.定向层流.生物安全柜生物安全柜 的分型的分型CLASS级生物安全柜CLASS级生物安全柜:1、CL
7、ASSTAPY A型 2、CLASSTAPY B1型 3、CLASSTAPY B2型 4、CLASSTAPY B3型CLASS级生物安全柜.I级生物安全柜 保护操作者和操作环境。样品没有得到保护。通过样品区的空气,经高效过滤器的过滤之后,100%地排放到实验室环境中。.II 级生物安全柜级生物安全柜 A型型(B3)30%外排进入环境30%外界空气补充70%经过滤后循环使用.II 级生物安全柜级生物安全柜 B1型型70%外排进入环境70%外界空气补充30%过滤后循环使用.II 级生物安全柜级生物安全柜 B2型型100%100%外排进入环境100%100%外界空气补充无循环使用的气流无循环使用的气
8、流.III级生物安全柜级生物安全柜样品、操作者、操作环境都得到保护(操作时戴全密封手套)100%外排进入环境100%外界空气补充无循环使用的气流.(二)实验室生物安全的个人防护.一级生物安全防护实验室无须使用生物安全柜和专用特殊设备等。应穿工作服,手上有皮肤破损戴手套。操作中可能有危险物溅出应有适当防护。.二级生物安全防护实验室(1)可能产生病菌气溶胶、溅出的用生物安全柜(2)当操作不能在安全柜内进行,必须外部操作 时,必须使用面部保护(护目镜、面罩、个体呼 吸保护用品或其他防溅出保护设备)。(3)应穿工作服或罩衫,离开时,不得穿着外 出,应先在实验室中消毒,然后统一洗涤或丢 弃。(4)当手可
9、能接触感染材料,应戴手套。如可能 发生溢出或溅出,应戴两副手套,一次性手套不 得清洗和再次使用。.三级生物安全防护实验室(1)必须安装级或以上生物安全柜,感染性材料的操作应在生物安全柜中进行。(2)当操作不得不在柜外进行时,必须个体防护与使用物理抑制设备综合防护措施(3)在进行感染性组织培养、有可能产生感染性气溶胶的操作时,必须使用个体防护设备(如呼吸保护装置等)。(4)入室工作前/后有专用更衣室,室内有必备品(消毒剂、冲洗液、药品等)。.四级生物安全防护实验室1、在级生物安全柜中进行操作。2、入室必须换上全套实验室服装。3、实验室必备的配套装置与装备。.临床实验室的消毒与灭菌 消毒灭菌方法:
10、热力灭菌 物理 辐射消毒 超声消毒 滤过除菌 干燥或低温抑菌 化学 消毒 防腐 .手卫生目的:控制医院性感染的最重要 最简便易行 的措施 之一。(包括保护个人自己).手卫生依据:常居菌的存在(大部分人体皮肤上能分离到的,如凝固酶阴性葡萄球菌、棒状杆菌类、不动杆菌属、丙酸菌属及某些肠道细菌族成员等),固有,不易被机械性的摩擦清除。.手卫生暂居菌的存在(接触病人或被污染的物体表面时获得)。如果没有通过肥皂和水的冲洗和机械摩擦或者用消毒手刷将其破坏,它可随时通过手传播。.手卫生种类:洗手(handwashing)手消毒(hand antisepsis)外科手消毒 (surgical hand ant
11、isepsis).手卫生设施:1、流动水、非手触式龙头开关 2、洗手清洁剂普通皂/液 (plain soap and detergent )抗菌皂 (antimicrobial soap)手消毒剂 (hand disinfector)3、干手设施(纸巾、干手器、专用毛巾).手卫生洗手指征:直接接触病人前后 无菌操作前后 穿脱工作服等前后 再进入清洁区前 接触特殊易感病人前后 接触或处理病人的血液、体液、分泌物后 等等 .1.1.消毒消毒 去除或杀灭传播媒介上去除或杀灭传播媒介上病原病原微生物,使其达到微生物,使其达到无害化无害化的处理的处理 2.2.灭菌灭菌 杀灭或去除传播媒介上一切微生物的处
12、理杀灭或去除传播媒介上一切微生物的处理 3 3消毒剂消毒剂 用用于于杀杀灭灭传传播播媒媒介介上上的的微微生生物物使使其其达达消消毒毒或或灭灭菌菌要要求求的的制制剂剂 4.4.灭菌剂灭菌剂 可杀灭一切微生物使其达到灭菌要求的制剂可杀灭一切微生物使其达到灭菌要求的制剂 -消毒和灭菌为两个不同概念消毒和灭菌为两个不同概念 -消毒处理不一定都能达到灭菌要求消毒处理不一定都能达到灭菌要求 而灭菌一定都能达到消毒目的而灭菌一定都能达到消毒目的 基本概念基本概念 消毒和灭菌消毒和灭菌.5 5抗菌抗菌 采采用用化化学学或或物物理理方方法法杀杀灭灭细细菌菌或或妨妨碍碍细细菌菌生生长长繁繁殖殖及及其其活活性性的过
13、程的过程6.6.抗菌剂抗菌剂 能够杀灭或去除微生物或抑制其生长和繁殖的制剂能够杀灭或去除微生物或抑制其生长和繁殖的制剂7.7.抑菌抑菌 采采用用化化学学或或物物理理方方法法抑抑制制或或妨妨碍碍细细菌菌生生长长繁繁殖殖及及其其活活性性的的过程过程8.8.防腐防腐 用用化化学学或或物物理理方方法法杀杀灭灭或或清清除除或或抑抑制制无无生生命命有有机机物物内内的的微微生生物,防止其腐败的处理物,防止其腐败的处理9 9防腐剂防腐剂能够抑制微生物生长和繁殖但不足以杀灭的化学物质能够抑制微生物生长和繁殖但不足以杀灭的化学物质基本概念基本概念.基本概念基本概念熏蒸消毒熏蒸消毒 在密闭空间内进行熏蒸以达到消毒目
14、的的一种方法(污染的空气、表面)清洁与预清洁清洁与预清洁去垢去垢/污剂污剂 指去除污垢、灰尘、有机物和污渍 清洁的过程主要依靠机械作用 清除污染清除污染 指去除/杀死微生物的任何过程,清除污染的应用范围更广.消毒与灭菌的方法 化学消毒灭菌化学消毒灭菌 通过化学消毒剂杀灭微生物繁殖体繁殖体或芽孢芽孢 消毒对象:包括物体表面、空气和污染物等 方式:有擦拭、喷洒(雾)、熏蒸和浸泡等。物理消毒灭菌物理消毒灭菌紫外线热力消毒(干热/焚烧、湿热、微波)等离子体HEPA过滤除菌.常用的消毒方法常用的消毒方法物理消毒方法物理消毒方法(1 1)机械除菌)机械除菌 用机械的方法从物体表面、用机械的方法从物体表面、
15、空气中除去有害病原微生物,以降低其数空气中除去有害病原微生物,以降低其数量,减少感染机会。如流动水洗手、开窗量,减少感染机会。如流动水洗手、开窗通风、过滤除菌、物体表面冲刷、擦拭等。通风、过滤除菌、物体表面冲刷、擦拭等。(2 2)热力灭菌)热力灭菌 又分为干热灭菌和湿热灭菌又分为干热灭菌和湿热灭菌两种。两种。.包括干烤消毒和焚烧消毒,前者适用于高包括干烤消毒和焚烧消毒,前者适用于高温下不损坏、不变质物品的消毒,如玻璃温下不损坏、不变质物品的消毒,如玻璃和金属制品;后者适用于无保留价值的医和金属制品;后者适用于无保留价值的医用垃圾和废弃物。用垃圾和废弃物。湿热灭菌:常用的有煮沸和压力蒸汽灭菌,湿
16、热灭菌:常用的有煮沸和压力蒸汽灭菌,适用于耐热耐湿物品和液体的消毒。适用于耐热耐湿物品和液体的消毒。(3 3)紫外线消毒:适用于空气、污染物体)紫外线消毒:适用于空气、污染物体表面消毒。表面消毒。.化学消毒方法化学消毒方法利用化学药物杀灭病原微生物的方法,利用化学药物杀灭病原微生物的方法,称为化学消毒方法。用于消毒的化学称为化学消毒方法。用于消毒的化学药物被称为化学消毒剂。常用的化学药物被称为化学消毒剂。常用的化学消毒剂有:戊二醛、过氧乙酸、含氯消毒剂有:戊二醛、过氧乙酸、含氯消毒剂、过氧化氢、碘和碘制剂、消毒剂、过氧化氢、碘和碘制剂、7575乙醇等。乙醇等。.使用方法:使用方法:刷、吸、干擦
17、、洗涤或用浸泡肥皂水或清洁剂的湿墩布擦洗严重污染的物品会严重污染的物品会影响除污染剂的杀菌作用,不能被迅速地消毒或灭菌;许多杀菌剂只对经过预清洁的物品只对经过预清洁的物品才具有杀菌活性。注意!注意!预清洁时必须谨慎,以避免暴露于感染性物质;必须使用与以后使用的杀菌剂化学上相容的物质;通常采用相同的清洗消毒剂进行预清洁和消毒;清洗消毒剂通常由化学消毒剂和洗涤剂或除垢剂以及助洗剂、稳定剂、缓蚀剂等成分组成;是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定化学方法一.清洁的作用.化学消毒剂种类(按标签说明使用)(1 1)高效)高效(水平)消毒剂:指可杀灭一切细菌繁殖体
18、(包括分枝杆菌)、病毒、真菌及其孢子等,对细菌芽孢(致病性芽孢菌)也有一定杀灭作用,达到高水平消毒要求的制剂。主要有环氧乙烷、过氧乙酸、过氧化氢、戊二醛、二氧化氯、次氯酸钠等;其中环氧乙烷、戊二醛可作为灭菌剂(2 2)中效消毒剂)中效消毒剂:指仅可杀灭分枝杆菌、病毒、真菌及细菌繁殖体等微生物,达到消毒要求的制剂。主要有酚类消毒剂、乙醇、碘伏等(3 3)低效消毒剂)低效消毒剂:指仅可杀灭细菌繁殖体及亲脂病毒,达到消毒要求的制剂。主要有季铵盐(苯扎溴铵、杜米芬等)、氯己啶等.化学消毒剂化学消毒剂理想的消毒剂理想的消毒剂快速的杀菌效果快速的杀菌效果快速的溶解作用快速的溶解作用有一定去污洗涤作有一定去
19、污洗涤作用用有警示颜色有警示颜色刺激性味道小刺激性味道小不易燃易爆不易燃易爆较好的稳定性较好的稳定性对物体的损坏作用对物体的损坏作用小小对人体无毒、副作对人体无毒、副作用用合理的价格合理的价格 方便运输方便运输.常用化学消毒剂的性能比较常用化学消毒剂的性能比较消毒剂消毒剂使用浓度使用浓度消毒水平消毒水平被灭活被灭活微生物微生物特征特征()()细菌细菌包膜病毒包膜病毒无包膜病毒无包膜病毒结核分枝结核分枝杆菌杆菌细菌芽孢细菌芽孢含氯含氯 高效高效+/-过氧乙过氧乙酸酸 0.0010.2 高效高效+戊二醛戊二醛 2化学灭菌化学灭菌/高效高效+甲醛甲醛 3 8高效高效/中效中效+/-酒精酒精 70%中
20、效+-+-季胺盐季胺盐0.4 1.6低效+-.常用化学消毒剂的安全性及特征常用化学消毒剂的安全性及特征 消毒剂消毒剂腐蚀性腐蚀性 残留物残留物 有有害害被有机物被有机物灭活灭活皮肤、眼皮肤、眼刺激性刺激性呼吸道呼吸道刺激性刺激性含氯含氯+-过氧乙酸过氧乙酸+-+-戊二醛戊二醛-+-+甲醛甲醛-+-+酒精酒精+/-+-季胺季胺 盐盐-+-.防止过度使用消毒剂!正确使用化学消毒剂以确保实验场所的安全,减少来自感染性物质的危险-选择合适的化学消毒剂 应考虑经济、控制库存以及限制环境污染等因素,尽可能减少化学消毒剂的使用量化学消毒剂的作用时间因品种和厂商而异应按产品说明书配制和使用消毒剂的浓度(浓度越
21、高,消毒效果越好?)消毒剂的作用时间注意消毒剂有效期!注意消毒剂有效期!-消毒剂的有效期消毒剂使用的有效期限.(一)表面消毒含氯消毒剂含氯消毒剂特特性性 :含含氯氯消消毒毒剂剂是是指指溶溶于于水水后后能能产产生生次次氯氯酸酸的的消消毒毒剂剂。其其品品种种较较多多,可可分分为为有有机机化化合合物物类类和和无无机机化化合合物物类类,最最常常用用的的有有次次氯氯酸酸钠钠、次次氯氯酸酸钙钙、漂漂白白粉粉、二二氯氯异异氰尿酸钠、三氯异氰尿酸、氯胺等。氰尿酸钠、三氯异氰尿酸、氯胺等。.(1)次氯酸钠(分子式为NaOCl)作为消毒剂/漂白剂使用时为强碱性,具金属腐蚀性 1 1)更换频率取决于)更换频率取决于
22、 有机物有机物(蛋白质)开口容器开口容器(无盖)工作液的初始浓度工作液的初始浓度(储藏高浓度或使用浓度)使用频率使用频率和特性 室内条件室内条件(高温时能释放氯气)2 2)有效氯浓度有效氯浓度常规实验室用于消毒的有效氯浓度应为1 g/L1 g/L。感染性物质的溢出以及含有大量有机物的物质,推荐使用更强作用的含5 5 g/Lg/L有效氯的溶液来处理。一般情况:一天多次浸泡、含高浓度有机物的材料,应每天至少更换一次;使用频率较低的溶液,则可以维持一周时间。.(2)次氯酸钙次氯酸钙Ca(ClO)2的颗粒或片剂一般含有70%的有效氯;其有效氯浓度分别为1g/L和5 g/L;用颗粒或片剂配制浓度1.4
23、g/L或7.0 g/L溶液不要把漂白剂当作防腐剂使用不要把漂白剂当作防腐剂使用可以用作普通目的的消毒剂 用于浸泡非金属类浸泡非金属类的的污染材料 在紧急情况下可用终浓度含12 mg/L有效氯的漂白剂消毒饮用水消毒饮用水.注意事项1)氯气具有强毒性!因此只能在通风良好的地方储存和使用。2)漂白剂也不能与酸混合不能与酸混合以避免氯气快速释放。3)氯的许多副产物可能对人体及环境有害对人体及环境有害,避免滥用含氯消毒剂,特别是漂白剂。.(3)二氯异氰尿酸钠二氯异氰尿酸钠(NaDCC)的粉剂含有60%的有效氯。用NaDCC粉剂配制的浓度为1.7 g/L和8.5 g/L的溶液将分别含有1 g/L和5 g/
24、L的有效氯 NaDCC粉剂和片剂储存方便、安全 血液或其他生物危害性液体溢出时,可以使用固体NaDCC,并使其作用至少10min后再除去,然后对污染区进行进一步的清理。.(4 4)氯胺)氯胺氯胺粉剂含有大约25的有效氯 -氯胺释放氯的速度比次氯酸慢 因此如果需要获得与次氯酸相同的效力,就需需要要较较高高的的初初始浓度始浓度。-有机物对氯胺溶液的影响没有次氯酸溶液那么大 在在“清洁清洁”和和“污染污染”情况下都推荐使用情况下都推荐使用20 g/L20 g/L的浓度的浓度。-在氯胺中浸浸泡泡过过的的物物品品必必须须要要彻彻底底清清洗洗,以除去加入到氯胺-T(甲苯磺酰氯醛甲酰胺钠)粉剂中的填充剂的残
25、留物。.(5)二氧化氯二氧化氯是一种高效快速消毒剂。气态的二氧化氯不稳定,可分解为氯气(Cl2)和氧气(O2),并释放热。二氧化氯溶于水,在水溶液中稳定。有两种方法可获得二氧化氯:1 1)将将盐盐酸酸(HClHCl)和和亚亚氯氯酸酸钠钠(NaClONaClO2 2)两种单独成分混合时即可生成;两种单独成分混合时即可生成;2 2)订订购购其其稳稳定定态态,然然后后在在需需要要时时随随时时活活化化生成。生成。.常规含氯消毒剂的推荐使用浓度常规含氯消毒剂的推荐使用浓度“清洁”条件下a“污染”条件下b所需有效氯浓度所需有效氯浓度0.1%(1 g/L)0.5%(5 g/L)次氯酸钠溶液次氯酸钠溶液(含5
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