PCR扩增技术.ppt

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1、PCRPCR扩增技术扩增技术李琛琛 20123303006 11月13日一、PCR定义二、PCR原理三、PCR反应体系四、PCR扩增条件五、PCR结果一、PCR的定义PCR(Polymerase Chain Reaction)聚合酶链式反应聚合酶链式反应,是一种在体外快速扩增特定基因或是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法序列的方法。PCR是是又称为基因的体外扩增法。又称为基因的体外扩增法。PCR是基因扩增技术的一次重大革新，是基因扩增技术的一次重大革新，它可将它可将极微量的极微量的靶靶DNA特异地扩增上百万倍。特异地扩增上百万倍。二、PCR的原理PCR(Polymerase Chai

2、n Reaction)变性：在加热或碱性条件下可使变性：在加热或碱性条件下可使DNADNA双螺旋的氢键断裂，形成单双螺旋的氢键断裂，形成单链链DNADNA。退火：是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一退火：是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段小段DNADNA片段。片段。延伸：从结合在特定延伸：从结合在特定DNADNA模板上的引物为出发点，将四种脱氧模板上的引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按核苷酸以碱基配对形式按5 533的方向沿着模板顺序合成的方向沿着模板顺序合成新的新的DNADNA链。链。三、反应体系在0.5mlPCR管内配置25ul反应体系：CK(ul

3、)L-5(ul)模板DNA01引物0.320.32镁离子2.52.510Buffer2.52.5Taq酶0.50.5dNTP2.02.0ddH2O17.216.2Total2525基因扩增基因扩增仪仪四、扩增条件四、扩增条件 (1)9(1)95 5变性变性5min5min，(2)94(2)94变性变性30s30s，(3)5(3)50 0退火退火30s30s，(4)72(4)72延伸延伸1min1min。(5)(5)重复重复(2)-(4)30(2)-(4)30次次 （6 6）7272延伸延伸1 10 0minmin。琼脂糖凝胶电泳槽琼脂糖凝胶电泳槽琼脂糖凝胶电泳槽琼脂糖凝胶电泳槽凝胶成像系统凝胶成像系统凝胶成像系统凝胶成像系统五、PCR结果20001000750500250125M L-5 谢谢！