《血液分析仪器》PPT课件.ppt
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1、第第十二十二章章 血液分析仪器血液分析仪器广州医学院化学教研室广州医学院化学教研室制制 作:作:张超张超 副教授副教授E-mailE-mail:血液分析仪器是临床实验室血液分析仪器是临床实验室最常用的分析仪器,包括:最常用的分析仪器,包括:血细胞分析仪血细胞分析仪血液凝固分析仪血液凝固分析仪血液流变学分析仪血液流变学分析仪第一节第一节 血细胞分析仪血细胞分析仪 一、一、血细胞分析仪血细胞分析仪(Blood cell analyzer,BCA)指对一定体积全血内血细胞异质性进指对一定体积全血内血细胞异质性进 行自动分析的临床检验常规仪器。行自动分析的临床检验常规仪器。又称血细胞自动计数仪(又称血
2、细胞自动计数仪(ABCC)、)、血液学自动分析仪(血液学自动分析仪(AHA)。)。ABCC代表早期的低档次代表早期的低档次BCA,AHA外延过大。外延过大。历史历史手工计数手工计数仪器简单计数仪器简单计数两分群两分群三分群三分群五分群五分群五分群网织红五分群网织红20世纪世纪40年代末,年代末,电阻抗法微粒子计数专利电阻抗法微粒子计数专利50年代,年代,Coulter Model A型用于临床型用于临床60年代,年代,测定参数达测定参数达7项项70年代,年代,全血细胞计数(全血细胞计数(CBC)80年代,年代,双通道、白细胞双通道、白细胞23分群、五分群分群、五分群90年代以来,多功能、多参数
3、、流水线年代以来,多功能、多参数、流水线二、血细胞分析仪分型二、血细胞分析仪分型1.按自动化程度按自动化程度半自动血细胞分析仪半自动血细胞分析仪全自动血细胞分析仪全自动血细胞分析仪血细胞分析工作站血细胞分析工作站血细胞分析流水线血细胞分析流水线2.按检测原理按检测原理电容型血细胞分析仪电容型血细胞分析仪光电型血细胞分析仪光电型血细胞分析仪激光型血细胞分析仪激光型血细胞分析仪电阻抗型血细胞分析仪电阻抗型血细胞分析仪联合检测型血细胞分析仪联合检测型血细胞分析仪干式离心分层型血细胞分析仪干式离心分层型血细胞分析仪无创型无创型 血细胞分析仪血细胞分析仪3.按对白细胞分类的水平按对白细胞分类的水平两分群
4、血细胞分析仪两分群血细胞分析仪三分群血细胞分析仪三分群血细胞分析仪五分群血细胞分析仪五分群血细胞分析仪“五分群网织红五分群网织红”血细胞分析仪血细胞分析仪嗜酸性细胞嗜酸性细胞淋巴细胞淋巴细胞单核细胞单核细胞中性粒细胞中性粒细胞血小板血小板嗜碱性细胞嗜碱性细胞三、电阻抗法血细胞分析仪基本原理三、电阻抗法血细胞分析仪基本原理 电阻值电阻值R:血细胞血细胞电解质溶液(稀释液)电解质溶液(稀释液)细胞通过仪器微孔时:细胞通过仪器微孔时:阻抗阻抗R 仪器产生脉冲信号仪器产生脉冲信号 根据脉冲信号进根据脉冲信号进行血细胞计数和体行血细胞计数和体积测定。积测定。贝克曼库尔特贝克曼库尔特贝克曼库尔特贝克曼库尔
5、特 ACT diff 2TMACT diff 2TM三分类血细胞分析仪三分类血细胞分析仪三分类血细胞分析仪三分类血细胞分析仪 这可要记这可要记这可要记这可要记住哦!住哦!住哦!住哦!1.1.白细胞的检测白细胞的检测 Lymon%=Lymon%=100%100%A AL LA AL L+A+AM M+A+AGGMono%=Mono%=100%100%A AMMA AL L+A+AM M+A+AGGGran%=Gran%=100%100%A AGGA AL L+A+AM M+A+AGGL LMMGGA AMMA AL LA AGGREL.REL.No.No.R1R1R2R2R3R3R4R43535
6、9090160160450 f1450 f1淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞单核细胞单核细胞单核细胞单核细胞粒细胞粒细胞粒细胞粒细胞三分群细胞分析仪:三分群细胞分析仪:Three-partThree-partDifferential BCADifferential BCA2.2.红细胞和血小板的检测红细胞和血小板的检测 红细胞和血红细胞和血小板共用一个小小板共用一个小孔管,正常人红孔管,正常人红细胞体积和血小细胞体积和血小板体积间有一个板体积间有一个明显界限,血小明显界限,血小板计数准确容易板计数准确容易 CPU对血小板和红对血小板和红细胞分布图进行判断细胞分布图进行判断 2.2.红细胞和血小
7、板的检测红细胞和血小板的检测 异常人红细胞体积和血小板体积间界限不清!异常人红细胞体积和血小板体积间界限不清!四、联合检测型血细胞分析仪的检测原理四、联合检测型血细胞分析仪的检测原理 主要体现在白细胞分类,实质是选主要体现在白细胞分类,实质是选用较特异的方法将血中含量较少的嗜酸、用较特异的方法将血中含量较少的嗜酸、嗜碱性粒细胞检出,发现异常细胞。嗜碱性粒细胞检出,发现异常细胞。共有特点是共有特点是:均使用鞘流技术。:均使用鞘流技术。前前 鞘鞘 流流前前 鞘鞘 流流后后鞘鞘流流后后鞘鞘流流检检 测测 窗窗检检 测测 窗窗1.1.容量、电导、光散射检测技术(容量、电导、光散射检测技术(VCSVCS
8、)(Volume(Volume、conductivityconductivity、light scatter)light scatter)1987年年 美国美国BECKMAN COULTER 公司发明公司发明VCS光散射光散射电导性电导性电阻抗电阻抗体积体积(volume,V)电阻抗原理测定细胞体积电阻抗原理测定细胞体积和数量和数量电导性电导性(conductivity,C)高频电磁探针,测高频电磁探针,测量细胞内部结构,包括细胞核、细胞浆的比量细胞内部结构,包括细胞核、细胞浆的比例及细胞内的化学成分。例及细胞内的化学成分。光散射光散射(scatter,S)细细 胞内粗颗粒的光散射强胞内粗颗粒
9、的光散射强 度要比细颗粒更强度要比细颗粒更强 2.光散射与细胞化学联合检测技术光散射与细胞化学联合检测技术 Bayer公司生产公司生产 ADVIA 120 血细胞分析仪。血细胞分析仪。这类仪器是应用激光散射与过氧化物酶染色这类仪器是应用激光散射与过氧化物酶染色技术对白细胞进行分类计数。技术对白细胞进行分类计数。仪器有四个通道:仪器有四个通道:血红蛋白测量通道血红蛋白测量通道血红细胞血红细胞/血小板测量通道血小板测量通道嗜碱性粒细胞测量通道嗜碱性粒细胞测量通道过氧化物酶测量(细胞分类)通道过氧化物酶测量(细胞分类)通道高角度前向散射光:高角度前向散射光:细胞核及颗粒的信息细胞核及颗粒的信息低角度
10、前向散射光低角度前向散射光:细胞大小的信息细胞大小的信息 结合细胞化学染色技术对白细胞进结合细胞化学染色技术对白细胞进行分类计数。行分类计数。染色剂:过氧化氢、染色剂:过氧化氢、1-氯氯-1-萘酚萘酚胞浆固定剂:甲醛胞浆固定剂:甲醛基本原理是:基本原理是:基于细胞大小、折射率、核形、核浆比基于细胞大小、折射率、核形、核浆比值、以及颗粒性质等,均可影响不同角值、以及颗粒性质等,均可影响不同角度下的散射光强度度下的散射光强度不同白细胞在以上几个方面完全一致的不同白细胞在以上几个方面完全一致的几率很小,从而对白细胞进行分类几率很小,从而对白细胞进行分类4.4.电阻抗、射频与细胞化学联合检测技术电阻抗
11、、射频与细胞化学联合检测技术 这类仪器是利用电阻抗、射频这一成这类仪器是利用电阻抗、射频这一成熟细胞计数技术结合细胞化学技术,通过熟细胞计数技术结合细胞化学技术,通过 4 4 个不同的检测系统对白细胞、幼稚细胞个不同的检测系统对白细胞、幼稚细胞进行分类和计数。进行分类和计数。嗜酸性粒细胞检测系统嗜酸性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统淋巴、单核和粒细胞检测系统淋巴、单核和粒细胞检测系统幼稚细胞检测系统幼稚细胞检测系统SysmexSysmex生产的生产的NE-8000NE-8000血细胞分析仪。血细胞分析仪。白细胞分类散射图白细胞分类散射图 联合使用多项技术联合使用多项技术(
12、流式、激光、射频、流式、激光、射频、电导、电阻抗、细胞化学染色电导、电阻抗、细胞化学染色)同时分析一个同时分析一个细胞,综合分析实验数据,从而得出较为准细胞,综合分析实验数据,从而得出较为准确的白细胞确的白细胞“五分群五分群”结果。结果。五、网织红细胞检测原理五、网织红细胞检测原理网织红细胞中嗜碱性物质网织红细胞中嗜碱性物质 RNARNA,在活体状,在活体状态下与特殊的荧光染料结合。态下与特殊的荧光染料结合。荧光强度与荧光强度与 RNA RNA 含量成正比。含量成正比。用流式细胞术检测用流式细胞术检测 网织红细胞大小和网织红细胞大小和 RNA RNA 含量及血红蛋含量及血红蛋 白的含量白的含量
13、细胞与细胞与试剂反应前后的变化试剂反应前后的变化反应前反应前反应后反应后血细胞分析仪血细胞分析仪网织红细胞成熟度分类网织红细胞成熟度分类荧光荧光荧光荧光(RNA)RNA)强度强度强度强度ReticulocytesReticulocytesPLTPLTRBCRBC高荧光强度高荧光强度高荧光强度高荧光强度低荧光强度低荧光强度低荧光强度低荧光强度低荧光强度低荧光强度低荧光强度低荧光强度WBCWBC前前前前向向向向散散散散射射射射光光光光(细细细细胞胞胞胞大大大大小小小小)六、血红蛋白测定原理六、血红蛋白测定原理 除干式、无创型外,各型除干式、无创型外,各型BCA对对血红蛋白测定都采用光电比色原理。血
14、红蛋白测定都采用光电比色原理。血细胞悬液中加入溶血剂后,红血细胞悬液中加入溶血剂后,红细胞溶解释放出血红蛋白,后者与溶细胞溶解释放出血红蛋白,后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍生物,进入血红蛋白测试系统。生物,进入血红蛋白测试系统。特定波长特定波长(530550nm)下进下进行光电比色。行光电比色。七、仪器基本结构七、仪器基本结构机械系统机械系统电学系统电学系统血细胞检测系统血细胞检测系统血红蛋白测定系统血红蛋白测定系统计算机计算机键盘控制系统键盘控制系统 1.1.机械系统机械系统 包括机械装置(如全自动有包括机械装置(如全自动有进样针、分血器、稀释器、混
15、匀进样针、分血器、稀释器、混匀器、定量装置等)和真空泵,以器、定量装置等)和真空泵,以完成样本的定量吸取、稀释、传完成样本的定量吸取、稀释、传送、混匀,以及将样本移入各种送、混匀,以及将样本移入各种参数的检测区。参数的检测区。2.电学系统电学系统 包括主电源、电压元器件、包括主电源、电压元器件、控温装置、自动真空泵电子控制控温装置、自动真空泵电子控制系统,以及仪器的自动监控、故系统,以及仪器的自动监控、故障报警和排除等。障报警和排除等。3.血细胞检测系统血细胞检测系统 国内常用的血细胞分析仪,使国内常用的血细胞分析仪,使用的检测技术可分为电阻抗检测技用的检测技术可分为电阻抗检测技术和光散射检测
16、技术两大类。术和光散射检测技术两大类。电阻抗检测技术:电阻抗检测技术:由检测器、放大由检测器、放大器、甄别器、阈值调节器、检测计数器、甄别器、阈值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成。系统和自动补偿装置组成。流式光散射检测技术:流式光散射检测技术:由激光光源、由激光光源、检测装置和检测器、放大器、甄别器、检测装置和检测器、放大器、甄别器、阈值调节器、检测计数系统和自动补阈值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成。偿装置组成。4.4.血红蛋白测定系统血红蛋白测定系统 由光源、透由光源、透镜、滤光片、流动比色池和光电传镜、滤光片、流动比色池和光电传感器等组成。感器等组成。5.5.计算机和键盘控制
17、系统计算机和键盘控制系统 二、仪器的性能指标、鉴定与调校二、仪器的性能指标、鉴定与调校(一)血细胞分析仪的性能指标(一)血细胞分析仪的性能指标 1.1.测试参数测试参数 2.2.细胞形态学分析细胞形态学分析 3.3.测试速度测试速度 4.4.样本量样本量 5.5.精密度与示值范围精密度与示值范围 6.6.打印打印(二)血细胞分析仪的鉴定(二)血细胞分析仪的鉴定 ICSH 公布了电子血细胞分析仪的公布了电子血细胞分析仪的评价方案:在细胞计数、血红蛋白测定评价方案:在细胞计数、血红蛋白测定方面,要鉴定评价仪器测试样本的总变方面,要鉴定评价仪器测试样本的总变异、携带污染率、线性范围、可比性和异、携带
18、污染率、线性范围、可比性和准确性等。准确性等。出厂前已经过厂方技术鉴定合出厂前已经过厂方技术鉴定合格,但由于运输振动或因故障维修格,但由于运输振动或因故障维修后或长时间停用后再启用等原因,后或长时间停用后再启用等原因,以及正常使用半年以上或认为有必以及正常使用半年以上或认为有必要时,都必须对仪器进行调校及性要时,都必须对仪器进行调校及性能测试,这对了解仪器性能,发现能测试,这对了解仪器性能,发现问题,确保检验质量有重要意义。问题,确保检验质量有重要意义。(三)血细胞分析仪的调校(三)血细胞分析仪的调校1.安装安装 洁净的环境、稳定的电源、可靠洁净的环境、稳定的电源、可靠的接地、适宜的温度和湿度
19、是保证的接地、适宜的温度和湿度是保证BCA正正常工作的前提。常工作的前提。三、仪器的维护与常见故障三、仪器的维护与常见故障(一)仪器的维护(一)仪器的维护2.2.维护维护 良好的工作环境是仪器正常工作良好的工作环境是仪器正常工作的前提,精心细致的维护是仪器处于良好的前提,精心细致的维护是仪器处于良好工作状态的保证。做好仪器的维护保养,工作状态的保证。做好仪器的维护保养,有助于提高仪器测量的准确性,减少故障有助于提高仪器测量的准确性,减少故障的发生,延长仪器的使用寿命。的发生,延长仪器的使用寿命。检测器的维护检测器的维护 采血顺利采血顺利 防止纤维丝堵孔防止纤维丝堵孔 关机前对检测器的微孔进行清
20、理冲洗关机前对检测器的微孔进行清理冲洗 计数期间,及时按计数期间,及时按“反冲反冲”键,冲掉键,冲掉沉积变性的蛋白质沉积变性的蛋白质 定期卸下检测器,用定期卸下检测器,用5%次氯酸钠浸泡次氯酸钠浸泡清洗清洗管路的维护管路的维护机械传动部位的维护机械传动部位的维护 有自我诊断有自我诊断功能,有故障发功能,有故障发生时,内置电脑生时,内置电脑的错误检查功能的错误检查功能显示出显示出“错误信错误信息息”,并伴有报,并伴有报警声。警声。(二)常见故障(二)常见故障1.1.开机时的常见故障开机时的常见故障2.2.测试过程中常见的错误信息测试过程中常见的错误信息 其其中检测器的微孔堵塞是影响检验结中检测器
21、的微孔堵塞是影响检验结果准确性最常见的原因。根据微孔果准确性最常见的原因。根据微孔堵塞的程度,将其分为完全堵孔和堵塞的程度,将其分为完全堵孔和不完全堵孔两种。不完全堵孔两种。仪器测试原理的不断创新仪器测试原理的不断创新 白细胞分类的改进白细胞分类的改进 红细胞和血小板计数原理的改进红细胞和血小板计数原理的改进 新血细胞分析参数的出现新血细胞分析参数的出现各种特殊技术的应用各种特殊技术的应用仪器自动化水平的提高仪器自动化水平的提高无创型全血细胞分析仪的研究无创型全血细胞分析仪的研究四、血细胞分析仪的进展四、血细胞分析仪的进展克服了电阻抗法在病理情况下测定克服了电阻抗法在病理情况下测定MCH、MC
22、HC结果结果不准及血小板计数精确性较差的缺点不准及血小板计数精确性较差的缺点 红细胞和血小板计数原理的改进红细胞和血小板计数原理的改进二维激光散射法测定红细胞和血小板二维激光散射法测定红细胞和血小板第二节第二节 血液凝固分析仪血液凝固分析仪血液凝固分析仪(血液凝固分析仪(automated coayulation automated coayulation analyzeranalyzer,ACAACA)是采用一定分析技术,对)是采用一定分析技术,对血栓与出血有关成分自动检测的临床常规检血栓与出血有关成分自动检测的临床常规检验仪器。验仪器。在血栓在血栓/出血实验室中最基本的设备是出血实验室中最
23、基本的设备是血液凝固分析仪(简称血凝仪)。血液凝固分析仪(简称血凝仪)。一、血液凝固分析仪概述一、血液凝固分析仪概述1910年,年,Kottman发明了血凝仪。发明了血凝仪。1950年,年,Schnitger和和Gross发明了基于电发明了基于电流法的血凝仪。流法的血凝仪。20世纪世纪70年代前为血凝仪的初级阶段。年代前为血凝仪的初级阶段。20世纪世纪70年代,较精确的各种自动血凝仪年代,较精确的各种自动血凝仪先后问世,其特点是:单通道、终点法的先后问世,其特点是:单通道、终点法的半自动血凝仪,也称第一代产品。半自动血凝仪,也称第一代产品。20世纪世纪80年代末,多通道、多种分析方法年代末,多
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