植物原生质体的分离与纯化ppt课件.ppt

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1、实验9 植物原生质体的分离与纯化实验目的：实验目的：2 了解原生质体在植物体细胞遗传学上的意义。了解原生质体在植物体细胞遗传学上的意义。1 学习植物原生质体的分离和纯化技术；学习植物原生质体的分离和纯化技术；实验原理：实验原理：植植物物原原生生质质体体即即为为去去除除了了细细胞胞壁壁的的植植物物细细胞胞。分分离离原原生生质质体体的的基基本本要要求求是是获获得得大大量量的的有有活活力力的的原原生生质质体体。去去除除细细胞胞壁壁有有两两种种方方法法，机机械械法法和和酶酶法法。其其中中酶酶法法是是一一种种温温和和、有有效效的的方方法法，但但是是仅仅局局限限于于具具有有初初生生细细胞胞壁壁的的组组织织

2、。植植物物的的细细胞胞壁壁由由纤纤维维素素、半半纤纤维维素素、果果胶胶质质和和少少量量的的蛋蛋白白质质和和脂脂类类组组成成的的，通通常常使使用用纤纤维维素素酶酶和和果果胶胶酶酶的的混混合合酶酶液液来来分分离离原原生生质体。质体。实验用品：实验用品：用用具具：尼尼龙龙过过滤滤网网（400400目目）、双双层层漏漏斗斗、吸吸管管、离心管、显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片等。离心管、显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片等。药药品品：纤纤维维素素酶酶、果果胶胶酶酶、8%8%甘甘露露醇醇盐盐溶溶液液、20%20%蔗糖蔗糖盐盐溶液等。溶液等。实验材料：实验材料：菠菜、油菜等。菠菜、油菜等。实验步骤：实验步

3、骤：1 取取材材：选选取取充充分分伸伸展展开开的的幼幼嫩嫩叶叶片片，冲冲洗洗干干净。净。3 酶酶解解：去去除除下下表表皮皮的的叶叶片片剪剪成成小小块块，铺铺于于酶酶液液中中，充充分分接接触触酶酶液液。25253030酶酶解解1 11.5小小时时，期期间可晃动培养皿间可晃动培养皿12次次。4 纯化：纯化：1 1）过过滤滤：用用双双层层漏漏斗斗将将原原生生质质体体过过滤滤到到离离心心管中。管中。2 2）纯纯化化-漂漂浮浮法法：用用比比原原生生质质体体比比重重大大的的20%20%蔗蔗糖糖盐盐溶溶液液经经过过离离心心后后原原生生质质体体漂漂浮浮在在蔗蔗糖糖溶溶液液的的表面。（还有表面。（还有沉降法沉降

4、法）2 去去下下表表皮皮：用用镊镊子子将将下下表表皮皮撕撕掉掉，让让叶叶肉肉细细胞暴露，注意不要损伤细胞。胞暴露，注意不要损伤细胞。过滤后的液体进行过滤后的液体进行500rpm，3min离心，离心，收集原生质体收集原生质体 弃上清，沉淀用弃上清，沉淀用 2 ml 8%甘露醇盐溶液甘露醇盐溶液轻轻悬浮轻轻悬浮在一新离心管中加入在一新离心管中加入68 ml的的20%蔗糖盐溶液，将原生蔗糖盐溶液，将原生质体悬浮液质体悬浮液轻轻轻轻环加环加在蔗糖盐溶液上面在蔗糖盐溶液上面1000rpm，3min离心，离心，漂浮原生质体漂浮原生质体原生质体在蔗糖溶液上面形成原生质体在蔗糖溶液上面形成绿环绿环，吸出原生质

5、体置于，吸出原生质体置于另一离心管中另一离心管中再加入再加入8%甘露醇盐溶液进行甘露醇盐溶液进行洗涤洗涤23次次 5 镜镜检检：将将原原生生质质体体悬悬浮浮液液滴滴在在载载玻玻片片上上，轻轻轻轻盖盖上上盖盖玻玻片片，先先在在低低倍倍镜镜下下找找到到原原生生质质体体，再再换换成高倍镜仔细观察。成高倍镜仔细观察。实验报告：实验报告：1 画出在显微镜下看到的原生质体的图像；画出在显微镜下看到的原生质体的图像；2 在整个实验操作过程中需要注意哪些问题？在整个实验操作过程中需要注意哪些问题？结果与讨论：结果与讨论：1 预预期期结结果果：完完整整的的原原生生质质体体形形态态上上是是圆圆球球状状的，颜色鲜艳，富含细胞质。的，颜色鲜艳，富含细胞质。过过 滤滤 前前 的的 酶酶 解解 液液过过 滤滤 前前 的的 酶酶 解解 液液过过 滤滤 前前 的的 酶酶 解解 液液 2 讨论：讨论：选选择择合合适适的的材材料料是是实实验验成成功功的的首首要要因因素素，请问该实验选材时注意什么问题？请问该实验选材时注意什么问题？酶解时酶液的组成及浓度如何确定？酶解时酶液的组成及浓度如何确定？研究原生质体的意义是什么？研究原生质体的意义是什么？