5.1 DNA的粗提取与鉴定.ppt

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1、2 2：如何证明他们是遗传物质？：如何证明他们是遗传物质？3 3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？1 1：构成生物体的遗传物质是什么？：构成生物体的遗传物质是什么？DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 一、基础知识一、基础知识（一）提取（一）提取（一）提取（一）提取DNADNADNADNA的的的的方法方法方法方法1 1 1 1、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理

2、选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子或化学性质的生物大分子或化学性质的生物大分子或化学性质的生物大分子2 2 2 2、生物大分子：、生物大分子：、生物大分子：、生物大分子：主要指蛋白质、酶和核酸主要指蛋白质、酶和核酸主要指蛋白质、酶和核酸主要指蛋白质、酶和核酸3 3 3 3、提取、提取、提取、提取DNADNADNADNA的基本思路的基本思路的基本思路的基本思路 利用利用利用利用DNADNADNADNA与与与与RNARNARNARNA、蛋白质和脂质等在物理和化蛋白质和脂质等在物理和化蛋白质和脂质等在物理和化蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取学性质方面的差异，

3、提取学性质方面的差异，提取学性质方面的差异，提取DNADNADNADNA，去除其他成分去除其他成分去除其他成分去除其他成分4 4 4 4、DNADNADNADNA的溶解性的溶解性的溶解性的溶解性 DNADNADNADNA和和和和蛋白质等其他成分在不同浓度的蛋白质等其他成分在不同浓度的蛋白质等其他成分在不同浓度的蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaClNaClNaCl溶液中溶液中溶液中溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使使使使DNADNA

4、DNADNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反5 5 5 5、讨论：、讨论：、讨论：、讨论：根据根据根据根据DNADNADNADNA在在在在NaClNaClNaClNaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在溶液中的溶解度曲线图，思考在溶液中的溶解度曲线图，思考在溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，什么浓度下，什么浓度下，什么浓度下，DNADNADNADNA的的的的溶解度最小？溶解度最小？溶解度最小？溶解度最小？DNADNADNADNA在在在在NaClNaClNaClNaCl溶溶溶溶液中的溶解度是如何变化

5、的？液中的溶解度是如何变化的？液中的溶解度是如何变化的？液中的溶解度是如何变化的？在在在在NaClNaClNaClNaCl溶液浓度低于溶液浓度低于溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，时，时，DNADNADNADNA的溶解的溶解的溶解的溶解度随度随度随度随NaClNaClNaClNaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在溶液浓度的增加而逐渐降低；在溶液浓度的增加而逐渐降低；在溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 0.14 0.14 0.14 mol/Lmol/Lmol/Lmol/L时，时，时，时，DNADNADNADNA溶解度

6、最小；当溶解度最小；当溶解度最小；当溶解度最小；当NaClNaClNaClNaCl溶液浓度继续溶液浓度继续溶液浓度继续溶液浓度继续增加时，增加时，增加时，增加时，DNADNADNADNA的溶解度又逐渐增大。的溶解度又逐渐增大。的溶解度又逐渐增大。的溶解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为 2mol2mol2mol2molL L L L时，时，时，时，DNADNADNADNA的的的的溶解度最大，浓度为溶解度最大，浓度为溶解度最大，浓度为溶解度最大，浓度为 0.14 mol0.14 mol0.14 mol0.14 molL

7、L L L时，时，时，时，DNADNADNADNA的溶的溶的溶的溶解度最低。利用这一原理，可以使解度最低。利用这一原理，可以使解度最低。利用这一原理，可以使解度最低。利用这一原理，可以使DNADNADNADNA在盐在盐在盐在盐溶液溶液溶液溶液中溶解或析出。中溶解或析出。中溶解或析出。中溶解或析出。如何通过控制如何通过控制如何通过控制如何通过控制NaClNaClNaClNaCl溶液的浓度使溶液的浓度使溶液的浓度使溶液的浓度使DNADNADNADNA在盐溶液中在盐溶液中在盐溶液中在盐溶液中溶解或析出？溶解或析出？溶解或析出？溶解或析出？根据根据根据根据DNADNADNADNA与杂质的溶解度不同分离

8、提取与杂质的溶解度不同分离提取与杂质的溶解度不同分离提取与杂质的溶解度不同分离提取DNADNADNADNANaCI酒精（体积分数酒精（体积分数为为95%的冷酒精）的冷酒精）DNA不溶不溶蛋白质蛋白质在在NaCI从从2mol/L逐渐稀释逐渐稀释的过程中溶解度逐渐增大的过程中溶解度逐渐增大某些蛋白质可溶某些蛋白质可溶95%95%95%95%的酒精在的酒精在的酒精在的酒精在DNADNADNADNA提取中的作用：提取中的作用：提取中的作用：提取中的作用：1.1.1.1.溶解某些蛋白质；溶解某些蛋白质；溶解某些蛋白质；溶解某些蛋白质；2.2.2.2.抑制核酸水解酶的活性，防止抑制核酸水解酶的活性，防止抑

9、制核酸水解酶的活性，防止抑制核酸水解酶的活性，防止DNADNADNADNA降解；降解；降解；降解；3.3.3.3.降低分子运动，易于形成沉淀析出；降低分子运动，易于形成沉淀析出；降低分子运动，易于形成沉淀析出；降低分子运动，易于形成沉淀析出；4.4.4.4.低温有利于增加低温有利于增加低温有利于增加低温有利于增加DNADNADNADNA分子的柔韧性，减少断裂。分子的柔韧性，减少断裂。分子的柔韧性，减少断裂。分子的柔韧性，减少断裂。根据根据根据根据DNADNADNADNA分子与杂质对酶、高温、洗涤分子与杂质对酶、高温、洗涤分子与杂质对酶、高温、洗涤分子与杂质对酶、高温、洗涤剂剂剂剂的耐受性不同来

10、的耐受性不同来的耐受性不同来的耐受性不同来分离提取分离提取分离提取分离提取DNA.DNA.DNA.DNA.DNADNA蛋白质蛋白质蛋白酶蛋白酶没影响没影响水解水解高高 温温80以上才会变性以上才会变性6080会变性会变性洗涤洗涤剂剂剂剂没影响没影响瓦解细胞膜瓦解细胞膜（破坏膜中的蛋白质分子）（破坏膜中的蛋白质分子）DNADNADNADNA不不不不溶溶溶溶于于于于酒酒酒酒精精精精溶溶溶溶液液液液，但但但但是是是是细细细细胞胞胞胞中中中中的的的的某某某某些些些些物物物物质质质质则则则则可可可可以以以以溶溶溶溶于于于于酒酒酒酒精精精精。利利利利用用用用这这这这一一一一原原原原理理理理，可可可可以以以

11、以将将将将DNADNADNADNA与与与与蛋蛋蛋蛋白白白白质进一步分离质进一步分离质进一步分离质进一步分离6 6 6 6、DNADNADNADNA在在在在酒精溶液中的酒精溶液中的酒精溶液中的酒精溶液中的溶解性溶解性溶解性溶解性7 7 7 7、DNADNADNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对蛋白酶能水解蛋白质，但是对蛋白酶能水解蛋白质，但是对蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNADNADNADNA没有影响没有影响没有影响没有影响大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白

12、质不能忍受6060606080808080的高温，而的高温，而的高温，而的高温，而DNADNADNADNA 在在在在80808080以上才会变性以上才会变性以上才会变性以上才会变性洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白去除脂质和蛋白去除脂质和蛋白去除脂质和蛋白 质质质质,但对但对但对但对DNADNADNADNA没有影响没有影响没有影响没有影响8 8 8 8、DNADNADNADNA的鉴定的鉴定的鉴定的鉴定 DNADNADNADNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，与二苯胺（沸水浴）会染成

13、蓝色，与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定因此，二苯胺可以作为鉴定因此，二苯胺可以作为鉴定因此，二苯胺可以作为鉴定DNADNADNADNA的试剂的试剂的试剂的试剂 紫外灯照射法紫外灯照射法紫外灯照射法紫外灯照射法A A A A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的 溴化已锭（溴化已锭（溴化已锭（溴化已锭（EBEBEBEB）B B B B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹

14、于蜡纸上，再滴一滴再滴一滴再滴一滴再滴一滴EBEBEBEB溶液染色溶液染色溶液染色溶液染色C C C C、将蜡纸放在紫外灯将蜡纸放在紫外灯将蜡纸放在紫外灯将蜡纸放在紫外灯(260nm)(260nm)(260nm)(260nm)下照射（暗室中），下照射（暗室中），下照射（暗室中），下照射（暗室中），可见橙红色的荧光可见橙红色的荧光可见橙红色的荧光可见橙红色的荧光(DNA(DNA(DNA(DNA的紫外吸收高峰在的紫外吸收高峰在的紫外吸收高峰在的紫外吸收高峰在260nm260nm260nm260nm处处处处)甲基绿甲基绿甲基绿甲基绿 （绿色）（绿色）（绿色）（绿色）二、二、二、二、DNADNADNA

15、DNA的粗提取与鉴定的实验设计的粗提取与鉴定的实验设计的粗提取与鉴定的实验设计的粗提取与鉴定的实验设计（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取1.1.1.1.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动 物原红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、物原红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、物原红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、物原红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中在液体培

16、养基中培养的大肠杆菌。（从中在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中 选取选取选取选取2 2 2 23 3 3 3种实验材料）种实验材料）种实验材料）种实验材料）2.2.2.2.原则：凡是含有原则：凡是含有原则：凡是含有原则：凡是含有DNADNADNADNA的生物材料都可以考虑，但选的生物材料都可以考虑，但选的生物材料都可以考虑，但选的生物材料都可以考虑，但选 用用用用DNADNADNADNA含量相对较高的生物组织，成功的可含量相对较高的生物组织，成功的可含量相对较高的生物组织，成功的可含量相对较高的生物组织，成功的可 能性更大。能性更大。能性更大。能性更大。动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液

17、中加动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水入一定量的蒸馏水入一定量的蒸馏水入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后，同时用玻璃棒搅拌，过滤后，同时用玻璃棒搅拌，过滤后，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可收集滤液即可收集滤液即可收集滤液即可（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNADNADNA的滤液的滤液的滤液的滤液1 1 1 1、动物细胞、动物细胞、动物细胞、动物细胞 答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水答：蒸馏水对于鸡

18、血细胞来说是一种低渗液体，水答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和细胞膜和细胞膜和细胞膜和核膜的破裂核膜的破裂核膜的破裂核膜的破裂)，从而释放出，从而释放出，从而释放出，从而释放出DNADNADNADNA讨论：为

19、什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜2 2 2 2、植物细胞、植物细胞、植物细胞、植物细胞讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，答：洗涤剂是一些

20、离子去污剂，能溶解细胞膜，答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于有利于有利于有利于DNADNADNADNA的释放；食盐的主要成分是的释放；食盐的主要成分是的释放；食盐的主要成分是的释放；食盐的主要成分是NaClNaClNaClNaCl，有有有有利于利于利于利于DNADNADNADNA的溶解的溶解的溶解的溶解实例：实例：实例：实例：提取洋葱提取洋葱提取洋葱提取洋葱DNADNADNADNA时，在切碎的洋葱中加入时，在切碎的洋葱中加入时，在切碎的洋葱中加入时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，一定的洗涤剂和食盐，进行从分的

21、搅拌和研磨，一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液过滤后收集研磨液过滤后收集研磨液过滤后收集研磨液答：研磨不充分会使细胞核内的答：研磨不充分会使细胞核内的答：研磨不充分会使细胞核内的答：研磨不充分会使细胞核内的DNADNADNADNA释放不完全，释放不完全，释放不完全，释放不完全，提取的提取的提取的提取的DNADNADNADNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝量变少，影响实验结果，导致看不到丝量变少，影响实验结果，导致看不到丝量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等状沉

22、淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的 影响？影响？影响？影响？（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的为了纯化提取的为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNADNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？讨论：此步骤获得的滤液中可能含有

23、哪些细胞成分？讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？答：可能含有核蛋白、多糖和答：可能含有核蛋白、多糖和答：可能含有核蛋白、多糖和答：可能含有核蛋白、多糖和RNARNARNARNA等杂质等杂质等杂质等杂质讨论：为什么反复地溶解与析出讨论：为什么反复地溶解与析出讨论：为什么反复地溶解与析出讨论：为什么反复地溶解与析出DNADNADNADNA，能够去除杂质能够去除杂质能够去除杂质能够去除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解DNADNADNADNA，能除去在高盐中能除去在高盐中能除去

24、在高盐中能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使不能溶解的杂质；用低盐浓度使不能溶解的杂质；用低盐浓度使不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNADNADNADNA析出，能除去析出，能除去析出，能除去析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出析出析出析出DNADNADNADNA，就能够除去与就能够除去与就能够除去与就能够除去与DNADNADNADNA溶解度不同的多种杂溶解度不同的多种杂溶解度不同的多种杂溶解度不同的多种杂质质质质讨论：方案二与方案三的原

25、理有什么不同？讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的提取的提取的提取的DNADNADNADNA与蛋白质分开；方案三利用的是与蛋白质分开；方案三利用的是与蛋白质分开；方案三利用的是与蛋白质分开；方案三利用的是DNADNADNADNA和和和和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，蛋白质对高温耐受性的不同

26、，从而使蛋白质变性，蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与与与与DNADNADNADNA分离。分离。分离。分离。（四）（四）（四）（四）DNADNADNADNA的的的的析出与鉴定析出与鉴定析出与鉴定析出与鉴定DNADNADNADNA的析出用的是与滤液体积相等的的析出用的是与滤液体积相等的的析出用的是与滤液体积相等的的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶冷却的酒精溶冷却的酒精溶冷却的酒精溶液（体积分数为液（体积分数为液（体积分数为液（体积分数为95 95 95 95），静置，静置，静置，静置2 2 2 23min3min3min3min，溶液中溶液中溶液中溶液中会出现会出现会出现会出现

27、白色丝状物，白色丝状物，白色丝状物，白色丝状物，这就是粗提取这就是粗提取这就是粗提取这就是粗提取DNADNADNADNA。用玻璃棒用玻璃棒用玻璃棒用玻璃棒沿沿沿沿一个方向一个方向一个方向一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水的水的水的水1 1 1 1、DNADNADNADNA的析出的析出的析出的析出用冷却的酒精析出用冷却的酒精析出DNADNA2 2 2 2、DNADNADNADNA的鉴定的鉴定的鉴定的鉴定 鉴定鉴定鉴定鉴定DNADNADNADNA时在试管中先加入物质的量的浓度为时在试管

28、中先加入物质的量的浓度为时在试管中先加入物质的量的浓度为时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 2mol/L 2mol/L 2mol/L 的的的的NaClNaClNaClNaCl溶液溶液溶液溶液5ml5ml5ml5ml于两只试管中，其中一只于两只试管中，其中一只于两只试管中，其中一只于两只试管中，其中一只加入加入加入加入DNADNADNADNA丝状物，各加入丝状物，各加入丝状物，各加入丝状物，各加入二苯胺二苯胺二苯胺二苯胺4ml 4ml 4ml 4ml 试剂。混合试剂。混合试剂。混合试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热均匀后，将试管置于沸水中加热均匀后，将试管置于沸水中加热均匀后，将试

29、管置于沸水中加热5min,5min,5min,5min,待试管冷却待试管冷却待试管冷却待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNADNADNADNA的溶液是否有的溶液是否有的溶液是否有的溶液是否有蓝色蓝色蓝色蓝色（一）案例一：以鸡血为实验材料进行（一）案例一：以鸡血为实验材料进行（一）案例一：以鸡血为实验材料进行（一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNADNADNADNA的粗提取的粗提取的粗提取的粗提取三、实验案例三、实验案例三、实验案例三、实验案例

30、鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长较高，操作繁琐，历时较长较高，操作繁琐，历时较长较高，操作繁琐，历时较长1 1 1 1、鸡血细胞做实验材料的原因、鸡血细胞做实验材料的原因、鸡血细胞做实验材料的原因、鸡血细胞做实验材料的原因鸡血细胞核的鸡血细胞核的鸡血细胞核的鸡血细胞核的DNADNADNADNA含

31、量丰富，材料易得含量丰富，材料易得含量丰富，材料易得含量丰富，材料易得2 2、实验原理、实验原理 DNADNADNADNA在在在在NaClNaClNaClNaCl溶液中的溶解度，是随着溶液中的溶解度，是随着溶液中的溶解度，是随着溶液中的溶解度，是随着NaClNaClNaClNaCl的浓度的浓度的浓度的浓度的变化而改变的。当的变化而改变的。当的变化而改变的。当的变化而改变的。当NaClNaClNaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为的物质的量浓度为的物质的量浓度为0.14 0.14 0.14 0.14 molmolmolmolL L L L时时时时,DNA,DNA,DNA,DNA的溶解度

32、最低。利用这一原理，可以的溶解度最低。利用这一原理，可以的溶解度最低。利用这一原理，可以的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在使溶解在使溶解在使溶解在NaClNaClNaClNaCl溶液中的溶液中的溶液中的溶液中的DNADNADNADNA析出。析出。析出。析出。DNADNADNADNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一

33、步提取出含杂质较少的步提取出含杂质较少的步提取出含杂质较少的步提取出含杂质较少的DNADNADNADNA。DNADNADNADNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNADNADNA的试剂。的试剂。的试剂。的试剂。3 3、实验材料和用具：、实验材料和用具：鸡血细胞液（鸡血细胞液（鸡血细胞液（鸡血细胞液（5 5 5 510ml10ml10ml10ml）；）；）；）；体积分数为体积分数为体积分数为体积分数为95%

34、95%95%95%的冷酒精的冷酒精的冷酒精的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却溶液（实验前置于冰箱内冷却溶液（实验前置于冰箱内冷却溶液（实验前置于冰箱内冷却24h24h24h24h）；）；）；）；蒸馏水；质量蒸馏水；质量蒸馏水；质量蒸馏水；质量浓度为浓度为浓度为浓度为0.0.0.0.g/mlg/mlg/mlg/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为为为为2mol/L2mol/L2mol/L2mol/L和和和和0.015mol/L0.015mol/L0.015mol/L0.015mol/L的氯化纳溶液；二苯胺试

35、剂。的氯化纳溶液；二苯胺试剂。的氯化纳溶液；二苯胺试剂。的氯化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网；铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网；铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网；铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（100ml100ml100ml100ml，一个）一个）一个）一个）；烧杯；（；烧杯；（；烧杯；（；烧杯；（100ml100ml100ml100ml，一个，一个，一个，一个，50ml50ml50ml50ml、

36、500ml500ml500ml500ml各二个）；各二个）；各二个）；各二个）；试管（试管（试管（试管（20ml20ml20ml20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。二个）；漏斗；试管夹；纱布。二个）；漏斗；试管夹；纱布。二个）；漏斗；试管夹；纱布。4 4 4 4、课前准备鸡血细胞液、课前准备鸡血细胞液、课前准备鸡血细胞液、课前准备鸡血细胞液 取质量浓度为取质量浓度为取质量浓度为取质量浓度为0.1g/ml0.1g/ml0.1g/ml0.1g/ml的的的的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）柠檬酸钠溶液（抗凝剂）柠檬酸钠溶液（抗凝剂）柠檬酸钠溶液（抗凝剂）100ml100ml100ml100ml，置于置于置于

37、置于500ml500ml500ml500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血（约烧杯中。注入新鲜的鸡血（约烧杯中。注入新鲜的鸡血（约烧杯中。注入新鲜的鸡血（约180ml180ml180ml180ml），），），），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血内，静置一天，使血细胞自行沉淀。

38、（也可以将血内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用液倒入离心管内，用液倒入离心管内，用液倒入离心管内，用1000r/min1000r/min1000r/min1000r/min的离心机离心的离心机离心的离心机离心的离心机离心2min2min2min2min，血细胞沉淀于离心管底部。实验时。血细胞沉淀于离心管底部。实验时。血细胞沉淀于离心管底部。实验时。血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离用吸管除去离用吸管除去离用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。）心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。）心管上部的澄清

39、液，就可以得到鸡血细胞液。）心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。）过程过程过程过程柠檬酸钠作用：柠檬酸钠作用：柠檬酸钠作用：柠檬酸钠作用：防止血液凝固防止血液凝固防止血液凝固防止血液凝固作用机理作用机理作用机理作用机理 柠檬酸钠能与血浆中的柠檬酸钠能与血浆中的柠檬酸钠能与血浆中的柠檬酸钠能与血浆中的CaCaCaCa2+2+2+2+发生反应，生成柠发生反应，生成柠发生反应，生成柠发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的檬酸钙络合物，血浆中游离的檬酸钙络合物，血浆中游离的檬酸钙络合物，血浆中游离的CaCaCaCa2+2+2+2+大大减少，血大大减少，血大大减少，血大大减少，血液就不会凝固液就

40、不会凝固液就不会凝固液就不会凝固 鸡血细胞破碎以后释放出的鸡血细胞破碎以后释放出的鸡血细胞破碎以后释放出的鸡血细胞破碎以后释放出的DNADNADNADNA，容易被玻璃容易被玻璃容易被玻璃容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少容器吸附，所以在提取过程中为了减少容器吸附，所以在提取过程中为了减少容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNADNADNADNA的损的损的损的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液注意事项注意事项注意事项注意事项讨论：提取鸡血中的讨论：提取

41、鸡血中的讨论：提取鸡血中的讨论：提取鸡血中的DNADNADNADNA时，为什么时，为什么时，为什么时，为什么除去血液中的除去血液中的除去血液中的除去血液中的 上清液？上清液？上清液？上清液？答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细 胞，离心后除去的上清液是血浆胞，离心后除去的上清液是血浆胞，离心后除去的上清液是血浆胞，离心后除去的上清液是血浆5 5 5 5、方法步骤、方法步骤、方法步骤、方法步骤 将制备好的鸡血细胞液将制备好的鸡血细胞液将制备好的鸡血细

42、胞液将制备好的鸡血细胞液5mL5mL5mL5mL10mL10mL10mL10mL，注入到注入到注入到注入到50mL50mL50mL50mL烧杯中。烧杯中。烧杯中。烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水向烧杯中加入蒸馏水向烧杯中加入蒸馏水向烧杯中加入蒸馏水20mL20mL20mL20mL，同时用同时用同时用同时用玻璃棒沿一个方向玻璃棒沿一个方向玻璃棒沿一个方向玻璃棒沿一个方向快速快速快速快速搅拌搅拌搅拌搅拌5min5min5min5min，使血细胞加速破裂。使血细胞加速破裂。使血细胞加速破裂。使血细胞加速破裂。然后，用放有然后，用放有然后，用放有然后，用放有3 3 3 34 4 4 4层层层层纱布纱布纱布纱

43、布的漏斗的漏斗的漏斗的漏斗将血细胞液过滤至将血细胞液过滤至将血细胞液过滤至将血细胞液过滤至1000mL1000mL1000mL1000mL的烧杯中。取其滤液。的烧杯中。取其滤液。的烧杯中。取其滤液。的烧杯中。取其滤液。提取鸡血细胞的细胞核物质提取鸡血细胞的细胞核物质提取鸡血细胞的细胞核物质提取鸡血细胞的细胞核物质鸡血细胞液鸡血细胞液鸡血细胞液鸡血细胞液10mL10mL10mL10mL，注入到注入到注入到注入到50mL50mL50mL50mL烧杯中烧杯中烧杯中烧杯中加入蒸馏水加入蒸馏水加入蒸馏水加入蒸馏水20mL20mL20mL20mL玻璃棒沿一个方向快速搅拌玻璃棒沿一个方向快速搅拌玻璃棒沿一个

44、方向快速搅拌玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min5min5min5min用用用用3 3 3 34 4 4 4层纱布的过滤，取其滤液备用。层纱布的过滤，取其滤液备用。层纱布的过滤，取其滤液备用。层纱布的过滤，取其滤液备用。讨论：讨论：讨论：讨论：答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸 水以至胀破水以至胀破水以至胀破水以至胀破（1 1 1 1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞）为什么要加

45、入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞 会有什么变化？会有什么变化？会有什么变化？会有什么变化？（2 2 2 2）用玻璃棒搅拌有什么意义？）用玻璃棒搅拌有什么意义？）用玻璃棒搅拌有什么意义？）用玻璃棒搅拌有什么意义？答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太 猛，防止打碎猛，防止打碎猛，防止打碎猛，防止打碎D

46、NADNADNADNA（3 3 3 3）滤去的是什么物质？）滤去的是什么物质？）滤去的是什么物质？）滤去的是什么物质？得到的是什么？得到的是什么？得到的是什么？得到的是什么？答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是 与蛋白质等物质结合在一起的与蛋白质等物质结合在一起的与蛋白质等物质结合在一起的与蛋白质等物质结合在一起的DNADNADNADNA溶解细胞核内的溶解细胞核内的溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNADNADNA 将物质的量浓度为将物质的量浓度

47、为将物质的量浓度为将物质的量浓度为 2mol2mol2mol2mol的氯化钠的溶液的氯化钠的溶液的氯化钠的溶液的氯化钠的溶液40mL40mL40mL40mL加加加加入到滤液中，并用入到滤液中，并用入到滤液中，并用入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌玻璃棒沿一个方向搅拌玻璃棒沿一个方向搅拌玻璃棒沿一个方向搅拌1min1min1min1min，使使使使其混合均匀，这时其混合均匀，这时其混合均匀，这时其混合均匀，这时DNADNADNADNA在溶液中呈溶解状态在溶液中呈溶解状态在溶液中呈溶解状态在溶液中呈溶解状态沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，

48、同时用沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不玻璃棒沿一个方向不玻璃棒沿一个方向不玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，停地轻轻搅拌，停地轻轻搅拌，停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏

49、水（这时溶越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于液中氯化钠的物质的量浓度相当于液中氯化钠的物质的量浓度相当于液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol0.14 mol0.14 mol0.14 molL L L L）析出含析出含析出含析出含DNADNADNADNA的粘稠物的粘稠物的粘稠物的粘稠物讨论：加入蒸馏水的目的？讨论：加入蒸馏水的目的？讨论：加入蒸馏水的目的？讨论：加入蒸馏水的目的？降低降低降低降低NaClNaClNaClNaCl溶液浓度到使溶液浓度到使溶液浓度到使溶液浓度到使DNADNADNA

50、DNA溶解度最低点，溶解度最低点，溶解度最低点，溶解度最低点，使使使使DNADNADNADNA从从从从NaClNaClNaClNaCl溶液中析出溶液中析出溶液中析出溶液中析出 将溶液中的将溶液中的将溶液中的将溶液中的DNADNADNADNA与其他杂质分离，这一步骤是实与其他杂质分离，这一步骤是实与其他杂质分离，这一步骤是实与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌