第九章 维生素类药.ppt

《第九章 维生素类药.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第九章 维生素类药.ppt（171页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、第九章第九章 维生素类药物的分析维生素类药物的分析主讲：马主讲：马 宁宁目的与要求目的与要求 掌握掌握维生素维生素A A、B1B1、C C、D D、E E的结构特点的结构特点与化学性质；与化学性质；掌握掌握维生素维生素A A、B1B1、C C、D D、E E鉴别反应；鉴别反应；掌握维生素掌握维生素A A含量测定中含量测定中紫外分光光度法紫外分光光度法测定测定原理与方法；维生素原理与方法；维生素B1B1含量测定中非含量测定中非水溶液滴水溶液滴定法和硫色素荧光法定法和硫色素荧光法的特点；维生素的特点；维生素C C含量测定含量测定中中碘量法碘量法,2,2，6 6二氯靛酚法二氯靛酚法等方法的特点；熟等

2、方法的特点；熟悉维生素悉维生素D D及维生素及维生素E E的含量测定方法。的含量测定方法。熟悉特殊杂质的检查。熟悉特殊杂质的检查。概概 述述 一、概念一、概念 维生素维生素1 1）维持人体正常代谢功能所）维持人体正常代谢功能所必需必需的一类的一类微量微量的的生物活性生物活性物质，主要用于机体的物质，主要用于机体的能量转能量转移移和和代谢调节代谢调节。2 2）大多数人体内）大多数人体内不能自行合成不能自行合成,必须从食物必须从食物中摄取。中摄取。二、化学结构：二、化学结构：醇、酯、酸、胺、醛，酚醇、酯、酸、胺、醛，酚三、分类三、分类脂溶性脂溶性维生素维生素:VitAVitA、D D2 2、D D

3、3 3、E E、K K1 1 水溶性水溶性维生素维生素:VitBVitB族族 (B1(B1、B2B2、B6B6、B12)B12)VitCVitC、叶酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、烟酸、烟酰胺SECTION 1 CONSIDERATIONS Vitamins are non-sugar,non-fatty,non-protein substances,but they are essential for normal metabolic function of body.Some vitamins can not be synthetized by mammalian(哺哺乳乳的的)species t

4、hemselves,only be absorbed and stored intact(完完 整整 的的)vitamins and provitamins(维维他他命命源源)of plant origin in foods that are consumed,and then convert enzymatically(酶酶)to vitamins in the intestinal wall.water-soluble vitamin and fat-soluble vitamin fat-soluble vitamin vitamin A,D,E,K water-soluble vita

5、min vitamin B group(such as B1,B2),nicotinic acid,pantothenic acid(泛酸泛酸),folic acid(叶酸叶酸),ascorbic acidClassification:In this chapter,we only discuss Vitamin A,E,B1,and C(ascorbic acid),brif the others,such as:Vitamin D groupsterol SbCl3 colorimetry Vitamin K12-methyl-1,4-naphthaquinone(萘萘醌醌)Ceric s

6、ulfate titration(after reduced)or UV-spectrophotography Vitamin B2stem nucleus,isoalloxazine(异咯嗪异咯嗪)ringUV-spectrophotography Nicotinic acid-COOH acid-base titrationAnalytical method:第一节第一节 维生素维生素A A（Vitamin AVitamin A）的分析）的分析 维生素A1活性最高，活性最高，维生素维生素A A2 2的生物活性是维生素的生物活性是维生素A A1 1的的30-40%30-40%，维生素维生素A

7、 A3 3的生物活性是维生素的生物活性是维生素A A1 1的的0.4%0.4%，故通常所说的故通常所说的维生素维生素A A系指维生素系指维生素A A1 1。第一节第一节 维生素维生素A A（Vitamin AVitamin A）的分析）的分析1 1、来、来 源源1 1）天然产物天然产物 主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油提取的脂肪油,即鱼肝油。从鱼肝油提取的即鱼肝油。从鱼肝油提取的V VA A多多为各种酯类的混合物，其中主要为醋酸酯和棕为各种酯类的混合物，其中主要为醋酸酯和棕榈酸酯。榈酸酯。2 2）人工合成产物人工合成产物 全反式维生素全反式维生素A A醋酸酯

8、醋酸酯中国药典中国药典收载的收载的VAVA是人工合成的是人工合成的VAVA醋酸醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂有有VADVAD胶丸和胶丸和VADVAD滴丸。滴丸。2 2、药典收载情况、药典收载情况V VA A及醋酸酯及醋酸酯棕榈酸酯棕榈酸酯混合物的混合物的食用油溶食用油溶液。液。人工合成的人工合成的V VA A醋酸酯结晶加醋酸酯结晶加精制植物油制精制植物油制成的油溶液，成的油溶液，其制剂有其制剂有V VADAD胶胶丸和丸和V VADAD滴丸。滴丸。浓缩浓缩V VA A油油混合物混合物Ch.PUSPBP一、结构和性质一、结构和性质（一）结构（一）结

9、构H 维生素维生素A A醇醇-COCH3-COCH3 维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯维生素维生素A 325.5 100%新维生素新维生素Aa 328 75%新维生素新维生素Ab 320.5 24%新维生素新维生素Ac 310.5 15%异维生素异维生素Aa 323 21%异维生素异维生素Ab 324 24%相对生物效价相对生物效价 1 1、具有、具有UVUV吸吸收收2 2、存在多种立、存在多种立体异构化合物体异构化合物环己烯环己烯共轭多共轭多烯侧链烯侧链存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物 具有具有UVUV吸收吸收 易发生脱氢、脱水、聚

10、易发生脱氢、脱水、聚合反应合反应v 1、具有具有UV吸收吸收v 2 2、存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物（二）性（二）性 质质v 3 3、易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应v 4、与三氯化锑发生呈色反应、与三氯化锑发生呈色反应v 5、溶解性：脂溶性、溶解性：脂溶性VitA2 VitA3 v 3 3、易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应去氢去氢维生维生素素A A去水去水维生维生素素A AO2H H+重排重排OOV VA A酸酸VA醛醛呋喃型氧化物呋喃型氧化物（无生物活性）（无生物活性）H+-H去水去水VA（VA3）丙烯型醇丙烯型醇遇酸易发生脱水反应遇

11、酸易发生脱水反应环氧化物环氧化物VitA醛醛VitA酸酸 4、与三氯化锑发生呈色反应、与三氯化锑发生呈色反应CHCl3 5、溶解性、溶解性不溶于水不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等二、鉴别反应二、鉴别反应CHCl3反应机理反应机理：V VA A与三氯化锑与三氯化锑(SbCl(SbCl3 3)中存在的亲电试中存在的亲电试剂氯化高锑（剂氯化高锑（SbClSbCl5 5）作用形成不稳定的）作用形成不稳定的蓝色正碳蓝色正碳离子。离子。注意事项：注意事项：反应需在无水、无醇条件下进行。反应需在无水、无醇条件下进行。水可使水可使SbClSbCl3 3水解成水解成SbOClSbOCl

12、乙醇可与正碳离子作用，乙醇可与正碳离子作用，使正电荷消失使正电荷消失溶剂：饱和溶剂：饱和无水三氯化无水三氯化锑的无醇氯锑的无醇氯仿溶液仿溶液2 2、紫外吸收特征紫外吸收特征去水维生素去水维生素A A（A A3 3）：）：6 6个共轭双键，其最大吸收个共轭双键，其最大吸收波长向红移，在波长向红移，在340340390nm390nm波长间出现波长间出现3 3个最大吸个最大吸收峰收峰(348348、367367、389nm389nm)。维生素维生素A A：5 5个共轭双键，其无水乙醇液在个共轭双键，其无水乙醇液在326nm326nm波长处有最大吸收。波长处有最大吸收。去水维去水维生素生素A A维生素

13、维生素A A在盐在盐酸催化下脱酸催化下脱水生物水生物VA3VA33 3、薄层色谱法薄层色谱法 BPBP USPUSP薄层板：硅胶薄层板：硅胶G G 硅胶硅胶展开剂：环已烷展开剂：环已烷-乙醚（乙醚（8 8：2 2）显色剂：三氯化锑显色剂：三氯化锑 磷钼酸磷钼酸现现 象：象：蓝色斑点蓝色斑点 蓝绿色斑点蓝绿色斑点三、含量测定三、含量测定1 1紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法2 2比色法比色法3 3高效液相色谱法高效液相色谱法（一）（一）紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法 利用维生素利用维生素A A醇和其醋酸酯分子中具醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭多烯共轭体系体系结构，在结构，在32532

14、5328nm328nm处有选择性吸收峰，故处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。可进行含量测定。u维生素维生素A A醋酸酯的环已烷溶液在醋酸酯的环已烷溶液在328nm328nm处有最大处有最大吸收，吸收系数：吸收，吸收系数：15301530；u维生素维生素A A醇的异丙醇溶液在醇的异丙醇溶液在325nm325nm处有最大吸收，处有最大吸收，吸收系数：吸收系数：18201820；由于维生素由于维生素A A中稀释用油与有关杂质也有吸收，中稀释用油与有关杂质也有吸收，干扰测定，所以采用三点校正法测定含量。干扰测定，所以采用三点校正法测定含量。立体异构体立体异构体 氧化产物氧化产物及光照产物及光照产物

15、合成中间合成中间体体 去氢维生素去氢维生素A A（VitA2VitA2）去水维生去水维生素素A A（VitA3VitA3）三点校正法三点校正法三波长测定法三波长测定法 1 1、原理：、原理：本法是在三个波长处分别测定吸收度根本法是在三个波长处分别测定吸收度根据校正公式计算据校正公式计算吸收度吸收度A A校正值校正值后，再计算含量，后，再计算含量，故本法亦称故本法亦称“三点校正法三点校正法”。2 2、条件、条件（1 1）杂质的吸收在）杂质的吸收在310-340nm310-340nm波长波长范围内呈一条直范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；线，且随波长的增大吸收度减小；（2 2）物质对光的

16、吸收具有）物质对光的吸收具有加和性加和性。1 1 VitAVitA的的 maxmax（328nm328nm）2 2 和和 3 3 在在 1 1的的两侧各选一点两侧各选一点3、波长选择波长选择 第一法：第一法：等波长差法：等波长差法：1 1-2 2=3 3-1 1直接测定法：直接测定法：V VA A醋酸酯醋酸酯（纯度较高）（纯度较高）第一法第一法4 4、测定方法、测定方法 egeg:中国药典中国药典中测定中测定V VA A醋酸酯，醋酸酯，1 1=328nm=328nm、2 2=316nm=316nm、3 3=340nm=340nm 规定值规定值 差值差值1 1、maxmax在在326-329nm

17、326-329nm之间，且分别计算之间，且分别计算5 5个波长处个波长处的差值均的差值均不超过不超过0.020.02，直接用测得的，直接用测得的A A328328，用下，用下述公式计算含量。述公式计算含量。标示量标示量%=A328D1900w/(W100L标示量标示量)100%纯度纯度较高较高2 2、最大吸收波长是否在、最大吸收波长是否在326-329326-329之间之间是是否否计算吸收度比值之差是否超过计算吸收度比值之差是否超过0.020.02第二法（皂化）第二法（皂化）是是否否计算计算A A328328（校正）校正）A A328328 -15%-3%0 3%皂化皂化 A A328328（

18、校正）校正）A A328328皂化皂化计算计算A A值值(一个或几个超过一个或几个超过0.02)0.02)VitAVitA胶丸的胶丸的含量计算含量计算？5 5、生物效价及换算因数、生物效价及换算因数 1IU的的VitA=0.300ug的全反式维生素的全反式维生素A醇醇 =0.344ug的全反式维生素的全反式维生素A醋酸酯醋酸酯（1 1）生物效价的定义）生物效价的定义维生素维生素A A含量是用生物效价表示含量是用生物效价表示单位单位 IU/gIU/g（国际单位）（国际单位）生物效价（生物效价（IU/gIU/g）=吸收系数吸收系数换算因数换算因数 （2 2）换算因数的计算）换算因数的计算1g1g维

19、生素维生素A A醋酸酯相当的醋酸酯相当的维生素维生素A A的的国际单位数为国际单位数为 1g1g维生素醇相当的维生素醇相当的维生素维生素A A的的国际单位数为国际单位数为 (VitAVitA酯酯)(VitAVitA醇醇)换算因子=IU/g/1 1、判断法选择、判断法选择A A A A测定或测定或A A校正校正2 2、求、求 3 3、计算效价、计算效价 （3 3）计算）计算 第二法（皂化法）：第二法（皂化法）：适用于维生素适用于维生素A A醇醇 不能用第一法测定的样品，用第二法测定。不能用第一法测定的样品，用第二法测定。维生素维生素A A酯用醇制氢氧化钾加热皂化（水解），用酯用醇制氢氧化钾加热皂

20、化（水解），用乙醚提取，挥干溶剂，残渣用异丙醇溶解，测定乙醚提取，挥干溶剂，残渣用异丙醇溶解，测定含量。含量。测定对象：测定对象：VitAVitA醇醇等吸收比法等吸收比法 300300、310310、325325、334nm334nm最大吸收波长是否在最大吸收波长是否在323-327323-327之间之间是是否否A A300300/A/A325325是否超过是否超过0.730.73色谱法纯化色谱法纯化是是否否计算计算A A325325（校正）校正），或，或A A值值计算计算A A值值03%3%1.1.（1 1）基本步骤基本步骤:v第一步第一步 A A选择选择 选择依据：所选选择依据：所选A A

21、值中杂质的干扰已基本值中杂质的干扰已基本消除。消除。总结测定法总结测定法注意：注意：C 为混合样品的浓度为混合样品的浓度 第二步第二步 求求第三步第三步 求效价求效价换算因数由纯品计算而得：换算因数由纯品计算而得：第四步：求标示量第四步：求标示量 示例：示例：VitADVitAD胶丸中胶丸中VitAVitA的含量测定的含量测定 精密称取本品精密称取本品(规格规格10000VitAIU/10000VitAIU/丸丸)装量差异项装量差异项下（平均装量下（平均装量0.07985g/0.07985g/丸）的内容物丸）的内容物 0.1287g 0.1287g 至至50ml50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻

22、度，摇匀；精密量取量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml2.0ml，置另一，置另一50 ml50 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm328nm，并在下，并在下列波长处测得吸收度为列波长处测得吸收度为A300 0.374 A316 ：0.592 A328 ：0.663 A340 ：0.553 A360 ：0.228A300/A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811 A360/A328

23、：0.299 求本品中维生素求本品中维生素A的含量？的含量？A300/A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.833 A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 +0.01 0.01 0 +0.02 +0.04 =以以A A328328（校正）（校正）计算含量计算含量三氯化锑比色法三氯化锑比色法（二）优点优点 简便简便 快速快速max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定 （5-10s5-10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标

24、准曲线温差1专属性差专属性差 三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性思考题思考题1 1）三点校正紫外分光光度法测定维生素）三点校正紫外分光光度法测定维生素A A含量的含量的依据（原理）是什么？依据（原理）是什么？2 2）三点校正紫外分光光度法测定维生素）三点校正紫外分光光度法测定维生素A A醋酸酯醋酸酯含量时，校正公式是什么？换算因子是多少？写含量时，校正公式是什么？换算因子是多少？写出测定其胶丸含量时标示量出测定其胶丸含量时标示量%的计算式。的计算式。三三 HPLCl维生素维生素B12B12为水溶性维生素，过量可直接通为水溶性维生素，过量可直接通过尿液排出体外；注射过量的维生素过尿液排出体外；注射

25、过量的维生素B12B12可可出现哮喘、荨麻疹、湿疹、面部浮肿、寒出现哮喘、荨麻疹、湿疹、面部浮肿、寒颤等过敏反应，也可能相发神经兴奋、心颤等过敏反应，也可能相发神经兴奋、心前区痛和心悸。前区痛和心悸。第二节第二节 维生素维生素B B1 1的分析的分析氨基嘧啶环氨基嘧啶环CHCH2 2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)氨基嘧啶氨基嘧啶环环噻唑环噻唑环UV（一）结构（一）结构一、结构与性质一、结构与性质还原性还原性1 1、溶解性、溶解性 易溶于水易溶于水；微溶于乙醇；不溶于乙醚微溶于乙醇；不溶于乙醚2 2、硫色素反应、硫色素反应（二）性质（二）性质3 3、紫外吸收特性、紫外吸收特性4 4、与生物碱沉淀试

26、剂反应、与生物碱沉淀试剂反应5 5、氯化物特性、氯化物特性l1 1 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性l2 2 硫色素反应：噻唑环在碱性介质中开硫色素反应：噻唑环在碱性介质中开环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾等氧化环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。剂氧化成具有荧光的硫色素。（二）性质（二）性质l3 3 盐酸液的盐酸液的246nm246nm波长处测定吸收度，吸波长处测定吸收度，吸收系数为收系数为421421。UV UV 共轭双键共轭双键 max=246nmmax=246nml4 4 碱性碱性 嘧啶环嘧啶环 伯氨伯氨 噻唑环噻唑环 季铵季铵1 1

27、、可与酸成盐、可与酸成盐2 2、与生物碱沉淀剂沉淀。、与生物碱沉淀剂沉淀。3 3、含量测定、含量测定 非水碱量法非水碱量法三、鉴别试验三、鉴别试验1、硫色素反应、硫色素反应2、生物碱沉淀反应、生物碱沉淀反应3、与硝酸铅的反应、与硝酸铅的反应4、氯化物反应、氯化物反应VitBVitB1 1+NaOHNaOH共热共热NaNa2 2S SNaNa2 2S+Pb(NOS+Pb(NO3 3)2 2PbSPbS2 2（黑色）（黑色）方法方法取本品约取本品约5mg，加氢氧化钠加氢氧化钠与正丁醇与正丁醇2.5ml，强烈振摇。放置分强烈振摇。放置分层，上面醇层显强烈兰色荧光。加酸层，上面醇层显强烈兰色荧光。加酸

28、消失，再加碱又重现。消失，再加碱又重现。专属性反应。专属性反应。1 1、硫色素反应（鉴别与含量测定）、硫色素反应（鉴别与含量测定）硫色素反应为硫色素反应为VitBVitB1 1的专属反应的专属反应原理原理NaOH环合环合环合环合2H硫色素硫色素鉴别试验鉴别试验VitB1H+H+H+H+2、沉淀反应、沉淀反应S S元素反应元素反应 Cl-反应反应3 3、其他反应、其他反应（一）非水溶液滴定法（一）非水溶液滴定法（原料药）（原料药）三、含量测定三、含量测定原原原原 理理理理利用噻唑环上季铵和嘧啶环上氨利用噻唑环上季铵和嘧啶环上氨基的弱碱性，在非水溶液中用高氯基的弱碱性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。

29、酸液滴定。喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝 （紫红（紫红天蓝）天蓝）（二）紫外吸收（鉴别与含量测定）（二）紫外吸收（鉴别与含量测定）VitBVitB1 1分子结构中具共轭双键，在分子结构中具共轭双键，在紫外区紫外区246nm246nm处有最大吸收，可进行处有最大吸收，可进行鉴别与含量测定。鉴别与含量测定。原原 理理差示分光光度法差示分光光度法？UV法法计算公式：计算公式：维生素维生素B1B1片的测定，取片的测定，取2020片称定。严细。片称定。严细。称取细粉适量，相当于称取细粉适量，相当于25 mg25 mg，置，置100ml100ml量量瓶中，取瓶中，取5ml5ml，在定溶于，在定溶于100ml

30、100ml，246nm246nm测。测。标准吸光系数标准吸光系数421421。注意所使用的溶剂。注意所使用的溶剂。（二）紫外可见分光光度法（二）紫外可见分光光度法（维生素维生素1 1片剂）片剂）片剂片剂=421（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=A=ECL规格规格 g/片片g/100mlChP 维生素维生素B1B1注射液的测定注射液的测定 取本品相当于取本品相当于B1 50mgB1 50mg，置置200ml200ml量瓶中，加水置刻度，取量瓶中，加水置刻度，取5ml5ml，用盐用盐酸定溶于酸定溶于100ml100ml，246nm246nm测，吸光系测，吸光系数数421421。注射剂

31、（注射剂（每每ml）相当于标示量的相当于标示量的%=规格规格g/mlmlNaOH（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法原理原理1、激发波长激发波长365nm 发射波长发射波长435nm方法与计算方法与计算2、制备氧化试剂、对照品溶液、供试品溶液制备氧化试剂、对照品溶液、供试品溶液 测定方法：测定方法：取取40ml40ml具塞试管具塞试管3 3支或支或3 3支以上，各精密加入支以上，各精密加入对照品溶液对照品溶液5ml5ml，于其中，于其中2 2支（或支（或2 2支以上支以上)试管中迅速（试管中迅速（1 12s2s）内加入氧化剂各）内加入氧化剂各3.0ml3.0ml，在，在30s30s内加入异丁醇

32、内加入异丁醇20.0ml20.0ml，闭塞，剧烈振摇，闭塞，剧烈振摇90s90s。于另一支试管中加。于另一支试管中加3.5mol/l3.5mol/l氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液3.0ml3.0ml以替代氧化剂，并照上述方以替代氧化剂，并照上述方法操作，作为空白。法操作，作为空白。另取另取3 3支或支或3 3支以上的相同试管，各精密加入供试品溶支以上的相同试管，各精密加入供试品溶液液5ml5ml，照上述对照品溶液管的方法，同法处理。，照上述对照品溶液管的方法，同法处理。于上述于上述6 6支或支或6 6支以上试管中，各加入无水乙醇支以上试管中，各加入无水乙醇2ml2ml，旋，旋摇数摇数s s，待分层后

33、，取上层澄清的异丁醇液约，待分层后，取上层澄清的异丁醇液约10ml10ml，测定，测定荧光强度。荧光强度。（三）硫色素荧光法（三）硫色素荧光法激发波长激发波长365nm 365nm 发射波长发射波长435nm435nm2 2、方法与、方法与计算计算对照液对照液+NaOHNaOH+铁氰化钾铁氰化钾 +异丁醇异丁醇+NaOHNaOH+异丁醇异丁醇+NaOHNaOH+铁氰化钾铁氰化钾 +异丁醇异丁醇+NaOHNaOH+异丁醇异丁醇供试液供试液SdAb含量测定含量测定5ml供试品溶液中维生素B1的ug数硫色素反应为维生素硫色素反应为维生素B1B1所特有的反应，专属性强，虽非定量所特有的反应，专属性强，

34、虽非定量完成，但控制好一定的条件可用于定量测定。完成，但控制好一定的条件可用于定量测定。注意（注意（1 1）氧化剂需新鲜配制，并在）氧化剂需新鲜配制，并在4h4h内使用；内使用；（2 2）贮备液需避光冷藏，并在）贮备液需避光冷藏，并在1 1个月内使用；个月内使用；（3 3）注意操作的平行性。）注意操作的平行性。2 2、特点、特点灵敏度高，线性范围宽灵敏度高，线性范围宽代谢产物不干扰，适用于体液分析代谢产物不干扰，适用于体液分析（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法（四）毛细管电泳法（四）毛细管电泳法L L（+）抗坏血酸（活性最高）抗坏血酸（活性最高）D D（-）异抗坏血酸（为前者）异抗坏血酸

35、（为前者5%5%）L L（+）异抗坏血酸（无活性）异抗坏血酸（无活性）D D（-）抗坏血酸（无活性）抗坏血酸（无活性）第三节第三节 维生素维生素C C的分析的分析一、结构与性质一、结构与性质(一）结构一）结构3、两个手性碳原子，有四个光学异构体、两个手性碳原子，有四个光学异构体1、二烯醇强还原性、二烯醇强还原性2、弱酸性（一元酸）、弱酸性（一元酸）4 4、紫外、紫外吸收吸收（二）性质（二）性质1 1、性状、性状 白色结晶或结晶性粉末；无臭，白色结晶或结晶性粉末；无臭，味酸；久置色渐变微黄，水溶液显酸性。味酸；久置色渐变微黄，水溶液显酸性。2 2、溶解性、溶解性 易溶于水；略溶于乙醇；不溶易溶于

36、水；略溶于乙醇；不溶于氯仿和乙醚。于氯仿和乙醚。3 3、旋光性、旋光性 比旋度比旋度+20.5+20.50 0-+21.5-+21.50 04 4、酸性、酸性烯二醇结构烯二醇结构由于由于共轭效应共轭效应的影响的影响 C C3 3OH OH pKapKa=4.17=4.17 C C2 2OH OH pKapKa=11.5=11.5故故V VC C表现为表现为一元酸一元酸，可与可与NaHCONaHCO3 3生成钠盐生成钠盐、水解性、水解性aOHa2CO3酮酸盐6 6、强还原性、强还原性二烯醇结构二烯醇结构（）抗坏血酸抗坏血酸（有生物活性）（有生物活性）去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸（有生物活性）（有生物

37、活性）二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸（无生物活性）（无生物活性）二酮基结构二酮基结构507 7、具糖的性质、具糖的性质 结构与结构与糖类糖类相似相似8 8、紫外吸收特性、紫外吸收特性 二、鉴别试验二、鉴别试验1 1、氧化反应、氧化反应（）与（）与AgNOAgNO3 3反应反应（）与）与2 2，6-6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应 还原型还原型原理原理 氧化型氧化型（玫瑰色）（玫瑰色）（无色）（无色）（3 3）与碱性酒石酸铜反应）与碱性酒石酸铜反应（4 4）与）与KMnOKMnO4 4反应反应2 2、糖类的反应、糖类的反应3 3、紫外分光光度法、紫外分光光度法 243nm243nm2 2、糖类的反应、糖类

38、的反应 USPUSP或盐酸或盐酸50吡咯吡咯（蓝色）（蓝色）(糠醛糠醛)戊糖戊糖50(吡咯吡咯)3 3、UVUV0.01mol/L 0.01mol/L HClHCl三、杂质检查三、杂质检查（一）溶液颜色与澄清度检查（一）溶液颜色与澄清度检查 Ch.PCh.P 采用控制吸光度的方法控制采用控制吸光度的方法控制有色杂质有色杂质的量。的量。1 1、原料、原料 取供试品取供试品3.0g3.0g，加水，加水15ml15ml，振摇使溶解，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4 4号垂熔玻号垂熔玻璃漏斗滤过，照紫外可见分光光度法，在璃漏斗滤过，照紫外可见分光光度法，在

39、420nm420nm的波长处测定吸光度，不得过的波长处测定吸光度，不得过0.030.03。2 2、片剂：、片剂：，在，在440nm440nm的波长处测定吸光度，的波长处测定吸光度，不得过不得过0.070.07。3 3、注射剂：、注射剂：，在，在420nm420nm的波长处测定吸光度，的波长处测定吸光度，不得超过不得超过0.060.06。（二）铁和铜的检查（二）铁和铜的检查 原子吸收光谱法原子吸收光谱法 供试品供试品 +标准溶液标准溶液 a供试品供试品b合格合格 b a-b指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液（一）碘量法（一）碘量法1 1 原理原理四四 、含量测定、含量测定 1 1、原理、原理（一

40、）碘量法（一）碘量法 取取本本品品约约0.2g0.2g，精精密密称称定定，加加新新沸沸过过的的冷冷水水100ml100ml与与稀稀醋醋酸酸10ml10ml使使溶溶解解，加加淀淀粉粉指指示示液液1ml1ml，立立即即用用碘碘滴滴定定液液（0.05mol/L0.05mol/L）滴滴定定，至至溶溶液液显显蓝蓝色色，在在3030秒秒内内不不褪褪。每每1ml1ml碘碘滴滴定定液液(0.05mol/L)(0.05mol/L)相相当当于于8.806mg8.806mg的的C C6 6H H8 8O O6 6。2 2、测定方法、测定方法1 1、酸性环境酸性环境 减慢减慢VitCVitC被被O O2 2氧化速度氧

41、化速度2 2、新沸冷新沸冷H H2 2O O 减免水中减免水中O O2 2的干扰的干扰3 3、立即滴定立即滴定 减少减少O O2 2的干扰的干扰 4 4、制剂测定时注意，注意消除辅料的干扰。、制剂测定时注意，注意消除辅料的干扰。Na2S2O5+H2O2NaHSO3NaHSO3+CH3COCH33 3、讨论、讨论2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法（二）（二）USPJP原理原理1、自身指示终点法自身指示终点法方法方法2、（2）快速滴定）快速滴定 2min内内 （1）酸性环境）酸性环境 HPO3-HAc 稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰讨论讨论3、（3）剩余比色测定）剩

42、余比色测定 （定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）（4）缺点）缺点 需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定干扰多干扰多 氧化力较强氧化力较强（四）高效液相色谱法（四）高效液相色谱法（三）紫外（三）紫外-可见分光光度法可见分光光度法第四节第四节 维生素维生素D D的分析的分析维生素维生素D D2 2结构式结构式一、结构与性质一、结构与性质1 1、结构、结构9 9，1010开环的骨化醇开环的骨化醇（calciferolcalciferol）或麦角）或麦角骨化醇骨化醇（ergocalciferolergocalciferol）9 9，1010开环的胆骨化开环的胆骨化醇醇（co

43、lecalciferolcolecalciferol）第四节第四节 维生素维生素D D的分析的分析2 2、性质、性质1 1、性状性状 无色针状结晶或白色结晶粉末；无臭、无色针状结晶或白色结晶粉末；无臭、无味：遇光或空气均易变质。无味：遇光或空气均易变质。2 2、溶解性溶解性 在氯仿中极易溶解，在植物油中略溶，在氯仿中极易溶解，在植物油中略溶，在水中不溶。在水中不溶。3 3、不稳定性不稳定性 含多个烯键，性质不稳定，遇光或空含多个烯键，性质不稳定，遇光或空气及其它氧化剂无发生氧化变质，使效价降低，毒气及其它氧化剂无发生氧化变质，使效价降低，毒性增强。性增强。4 4、旋光性旋光性 VDVD2 2：

44、6 6个手性碳，个手性碳，VDVD3 3：5 5个手性碳个手性碳 二二者均具有旋光性。者均具有旋光性。5 5、显色反应显色反应：甾醇类共有反应：甾醇类共有反应6 6、紫外吸收特性紫外吸收特性二、鉴别反应二、鉴别反应1234显色反应显色反应1.1.与醋酐与醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应2.2.与氯化锑与氯化锑反应反应3.3.其它其它比旋度测定比旋度测定其它其它HPLC,TLCm.p.,UV,IR维生素维生素D2D2维生素维生素D3D3的的区分反应区分反应 二、鉴别试验二、鉴别试验 （一）显色反应（一）显色反应 1 1、与醋酐与醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应 。2 2、与三氯化锑反应与三氯化锑反应 橙色

45、粉红色。氯仿维生素D3SbCl33、其他显色反应、其他显色反应 三氯化铁三氯化铁 橙黄色橙黄色 二氯丙醇二氯丙醇 绿色绿色 +乙酰氯试剂乙酰氯试剂 绿色绿色（二）比旋度鉴别（二）比旋度鉴别 维生素维生素D D2 2在无水乙醇中比旋度为在无水乙醇中比旋度为+102.5+102.5至至+107.5+107.5，维生素，维生素D D3 3为为+105+105至至+112+112。（注意应于容器开启后（注意应于容器开启后30min30min内取样，并在溶液配制内取样，并在溶液配制后后30min30min内测定。）内测定。）（三）其他鉴别方法（三）其他鉴别方法 TLCTLC、HPLCHPLC法、制备衍生

46、物测定熔点，法、制备衍生物测定熔点，UVUV、IR IR （四）维生素（四）维生素D2D2、D3D3的区分反应的区分反应 维生素维生素D D的的96%96%乙醇溶液加乙醇和乙醇溶液加乙醇和85%85%的硫酸，的硫酸，维生素维生素D D2 2显红色显红色，在，在570nm570nm有最大吸收；有最大吸收；维生素维生素D D3 3显黄色，在显黄色，在495nm495nm有最大吸收。有最大吸收。n （一）（一）麦角甾醇麦角甾醇的检查的检查三、杂质检查三、杂质检查（二）前维二）前维生素生素D D的光的光照产物检查照产物检查（一）麦角甾醇的检查（一）麦角甾醇的检查 利用其与洋地黄皂甙生利用其与洋地黄皂甙

47、生成沉淀，检查浑浊。成沉淀，检查浑浊。取取10mg10mg加加90%90%乙醇乙醇2 ml2 ml，加，加洋地黄皂甙洋地黄皂甙溶液溶液2ml2ml（取洋地黄皂甙（取洋地黄皂甙20mg20mg加加90%90%乙醇乙醇2 ml2 ml，加热溶解制，加热溶解制成）。混合，放成）。混合，放1818小时，不得浑浊和沉淀。小时，不得浑浊和沉淀。（二）前维生素（二）前维生素D D的光照产物的光照产物 有光甾醇、速甾醇、有光甾醇、速甾醇、5 5，6-6-反式维生素反式维生素D D。中国药典上未收载该项检查。中国药典上未收载该项检查。四、含量测定四、含量测定1 1）化学法）化学法2 2）光谱法）光谱法3 3）色

48、谱法）色谱法1 1）化学法）化学法2 2）色谱法）色谱法3 3）微生物）微生物法法 正相色正相色 谱法谱法USPBPCHP HPLC 根据样品中干扰物质存在的情况选择三种不根据样品中干扰物质存在的情况选择三种不同方法测定。同方法测定。讨论：讨论：1 1、采用以硅胶为填充剂，流动相为非极、采用以硅胶为填充剂，流动相为非极性溶剂正己烷正戊醇（性溶剂正己烷正戊醇（997997：3 3）的正相高效液）的正相高效液相色谱法，检测波长相色谱法，检测波长254nm254nm。2 2、避光，避免氧化。、避光，避免氧化。3 3、皂化提取过程复杂。、皂化提取过程复杂。4 4、内标可选用邻苯二甲酸二甲酯。、内标可选

49、用邻苯二甲酸二甲酯。苯苯 二氢吡喃二氢吡喃第五节第五节 维生素维生素E E的分析的分析一、结构与性质一、结构与性质 （一）结构：（一）结构：苯并二氢吡喃醇衍生物苯并二氢吡喃醇衍生物苯环苯环 +二氢吡喃环二氢吡喃环 +饱和烃链饱和烃链R1 R2 Vit E(dl-Tocopheryl Acetate)名名 称称R R1 1R R2 2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CHCH3 3CHCH3 3H HH HCHCH3 3H HCHCH3 3H H1.01.00.50.50.20.20.10.1*生物效价生物效价 右旋体右旋体 ：消旋体消旋体 =1.4=1.4

50、：1010（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）chpchp规定规定 维生素维生素E E（消旋消旋-生育酚醋酸酯）生育酚醋酸酯）（二）性质（二）性质2 2、溶解性、溶解性 易溶于有机溶剂，易溶于有机溶剂，不溶于水不溶于水3 3、紫外吸收特性、紫外吸收特性 284nm284nm1 1、性状、性状 微黄色至黄色或黄绿色澄清的微黄色至黄色或黄绿色澄清的粘稠液体粘稠液体;遇光色渐变深遇光色渐变深。吸收系数吸收系数41-4541-45。（二）性质（二）性质4 4、水解性、水解性 酯键酯键易水解（易水解（H H+、OHOH-）5 5、易氧化、易氧化对氧敏感，成对氧敏感，成-生育醌和生育醌和-生育酚二聚体