3.1菊花的组织培养.ppt

《3.1菊花的组织培养.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《3.1菊花的组织培养.ppt（24页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、课题课题1 1 菊花的组织培养菊花的组织培养一、一、植物组织培养植物组织培养细胞离体细胞离体必要条件：必要条件：一定的营养物质、激素和其他一定的营养物质、激素和其他外界条件外界条件原理原理:细胞的全能性细胞的全能性1.1.什么叫分化？其实质是什么什么叫分化？其实质是什么?2.2.什么叫脱（去）分化、再分化？什么叫脱（去）分化、再分化？3.3.愈伤组织的细胞有什么特点？愈伤组织的细胞有什么特点？4.4.如何控制细胞的脱分化与去分化？如何控制细胞的脱分化与去分化？请阅读请阅读P32P32解决下列问题：解决下列问题：二、植物组织培养的基本过程二、植物组织培养的基本过程、植物组织培养的理论基础：、植物

2、组织培养的理论基础：.、细胞分化：个体发育中，细胞在、细胞分化：个体发育中，细胞在、和和上出现上出现差异的过程。实质差异的过程。实质_、脱分化（去分化）：脱分化（去分化）：由高度分化的植物组织或由高度分化的植物组织或细胞产生细胞产生的过程的过程 再分化：再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成愈伤组织继续培养，重新分化成等等器官器官 愈伤组织愈伤组织：是通过细胞分裂形成的，其细胞排列是通过细胞分裂形成的，其细胞排列，高度，高度呈无定形状态的呈无定形状态的。细胞的全能性细胞的全能性形态形态结构结构生理功能生理功能稳定性稳定性愈伤组织愈伤组织根和芽根和芽疏松而无规则疏松而无规则液泡化液泡化薄壁细胞薄壁

3、细胞基因的选择性表达基因的选择性表达二、植物组织培养的基本过程二、植物组织培养的基本过程离体的植物器离体的植物器官、组织、细官、组织、细胞胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化根根芽芽植植物物体体（1 1）植物材料的选择）植物材料的选择烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果影响实验结果菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝上部新萌生的侧枝三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养

4、的因素：不同植物材料不同植物材料（2 2）离体的植物组织和细胞对营养、环境等条）离体的植物组织和细胞对营养、环境等条 件的要求相对特殊，件的要求相对特殊，需配置适宜的培养基。需配置适宜的培养基。MSMS培养基主要成分包括：培养基主要成分包括：大量元素大量元素:微量元素微量元素:有机物：有机物：植物激素：植物激素：N N、P P、S S、K K、CaCa、MgMg等等B B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoCo等等甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖蔗糖等等生长素、细胞分裂素等生长素、细胞分裂素等三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培

5、养的因素：MSMS培养基中各培养基中各营营养物养物质质的作用是什么？的作用是什么？微量元素和大量元素微量元素和大量元素提供植物提供植物细细胞生活所必胞生活所必须须的无机的无机盐盐；蔗糖蔗糖提供碳源，同提供碳源，同时维时维持持细细胞的渗透胞的渗透压压；甘氨酸、甘氨酸、维维生素生素等物等物质质，主要是，主要是满满足离体植足离体植物物细细胞的特殊胞的特殊营营养要求。养要求。旁栏思考：旁栏思考：（3 3）不同植物激素使用顺序）不同植物激素使用顺序使用顺序使用顺序 实验结果实验结果 先生长素，先生长素，后细胞分裂素后细胞分裂素 先细胞分裂素，先细胞分裂素，后生长素后生长素 同时使用同时使用 有利于细胞分

6、裂有利于细胞分裂,但不分化但不分化细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化分化频率提高分化频率提高三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素：（4 4）不同植物激素使用量）不同植物激素使用量生长素生长素/细胞分裂素比值细胞分裂素比值结果结果 比值高时比值高时 比值低时比值低时 比值适中比值适中 促根分化，促根分化，抑芽形成抑芽形成促芽分化，促芽分化，抑根形成抑根形成促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素：（5 5）pHpH、温度、光照、温度、光照（菊花组培）（菊花组培）pH=5.8pH=5.8 温度温度控制在控制在18182222 每日每日光

7、照光照12h12h（6 6）消毒消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素：、植物材料的选择：植物的、植物材料的选择：植物的、材料的年、材料的年龄、龄、的长短的长短、营养：、营养：培养基，主要成分是培养基，主要成分是、和和。、激素：关键激素是、激素：关键激素是和和，其其、使用的、使用的及用量的及用量的会影响结果。会影响结果。、环境条件、环境条件:。种类种类保存时间保存时间大量元素大量元素微量元素微量元素有机物有机物生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素pHpH、温度、光照、温度、光照浓度浓度先后先后比例比

8、例未开花植物的茎上部未开花植物的茎上部新萌生的侧枝新萌生的侧枝三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素：四、植物组织培养过程四、植物组织培养过程:离离离离体体体体组组组组织织织织或或或或细细细细胞胞胞胞植植植植物物物物体体体体脱分化脱分化脱分化脱分化细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素生长素生长素生长素生长素愈愈愈愈伤伤伤伤组组组组织织织织芽芽芽芽根根根根细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素再分化再分化再分化再分化（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基（二）外植体消毒（二

9、）外植体消毒（三）接种（三）接种（四）培养（四）培养（五）移栽（五）移栽（六）栽培（六）栽培四、植物组织培养过程四、植物组织培养过程:（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基MSMSMSMS培养基包括培养基包括培养基包括培养基包括20202020多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用4 4 4 4保存配制好的培养基保存配制好的培养基保存配制好的培养基保存配制好的培养基母液母液母液母液来制备来制备来制备来制备1 1、配制各种母液、配制各种母液无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩无机物中大量元

10、素浓缩10101010倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩100100100100倍，常温保存倍，常温保存倍，常温保存倍，常温保存激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml1mg/ml1mg/ml1mg/ml的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的

11、浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量倍数，计算用量倍数，计算用量倍数，计算用量2 2、配制培养基、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml100ml 配制培养液配制培养液 调调PHPH 培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素因此不必添加植物激素3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌压蒸汽灭菌1 1 1 1、选材：、选材：、选材：、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝

12、菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒（二）外植体消毒2 2 2 2、消毒、消毒、消毒、消毒 流水冲洗流水冲洗流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许菊花茎段用流水冲洗后可少许菊花茎段用流水冲洗后可少许菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉洗衣粉洗衣粉洗衣粉，用软刷，用软刷，用软刷，用软刷轻轻轻轻轻刷洗轻刷洗轻刷洗轻刷洗，刷洗后在流水下，刷洗后在流水下，刷洗后在流水下，刷洗后在流水下冲洗冲洗冲洗冲洗20min20min20min20min左右左右左右左右 酒精处理酒精处理酒精处理酒精处理用无菌吸水纸用无菌吸水纸用无菌吸水纸用无菌吸水纸吸干吸干吸干吸干外植体表面的水分，

13、放入体积分外植体表面的水分，放入体积分外植体表面的水分，放入体积分外植体表面的水分，放入体积分数为数为数为数为70707070的酒精的酒精的酒精的酒精中摇动中摇动中摇动中摇动2 2 2 23 3 3 3次，持续次，持续次，持续次，持续6 6 6 67s7s7s7s，立即，立即，立即，立即将外植体取出，在将外植体取出，在将外植体取出，在将外植体取出，在无菌水中清洗无菌水中清洗无菌水中清洗无菌水中清洗 消毒液处理消毒液处理消毒液处理消毒液处理取出后用无菌吸水纸取出后用无菌吸水纸取出后用无菌吸水纸取出后用无菌吸水纸吸干吸干吸干吸干外植体表面的外植体表面的外植体表面的外植体表面的水分水分水分水分，放，

14、放，放，放入质量分数为入质量分数为入质量分数为入质量分数为0.10.10.10.1的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中1 1 1 12min2min2min2min，取，取，取，取出后在出后在出后在出后在无菌水中至少清洗无菌水中至少清洗无菌水中至少清洗无菌水中至少清洗3 3 3 3次次次次，漂净，漂净，漂净，漂净消毒液消毒液消毒液消毒液（三）接种（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用是至关重要的。用是至关

15、重要的。用是至关重要的。用70707070的酒精喷雾使空气消毒，的酒精喷雾使空气消毒，的酒精喷雾使空气消毒，的酒精喷雾使空气消毒，酒酒酒酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20202020分钟分钟分钟分钟1 1、接种室消毒、接种室消毒2 2、无菌操作要求、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。

16、要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种4 4、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，每接种一块外植体前，镊子需镊子需放入体积分数为放入体积分数为7575的酒精溶液中的酒精溶液中消毒一次消毒一次，然后在酒精灯火焰上，然后在酒精灯火焰上烧烧一遍，冷却一遍，冷却后再接种后再接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3 34 4块，菊的茎或块，菊的茎或叶叶6 68 8块

17、，也不要太少，以充分利用培养基中的营养块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件成分和光照条件插入时应注意方向，插入时应注意方向，不要倒插不要倒插。茎段的茎尖基部插。茎段的茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分入培养基利于吸收水分和养分（四）培养（四）培养n n接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒培养期间应定期消毒n n培养温度控制在培养温度控制在18-2218-22n n每日用日光灯每日用日光灯光照光照12h12h（五）移栽（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗

18、在培养间生长几日瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1 1、打开封口膜、打开封口膜2 2、清洗转移、清洗转移用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间3 3、移栽、移栽幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培适合栽培珍珠岩珍珠岩 ,珍珠岩是一种火山喷发的珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍质岩石，有弧形或圆形裂隙，如

19、珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩。珠的结构，所以被命名为珍珠岩。蛭石蛭石是一种天然、无毒的矿物质，是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。（六）栽培（六）栽培幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，况，适时浇水、施肥，直至开花适时浇水、施肥，直至开花思考思考：在整个操作过程中，是如何来在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？实现无菌环境的？1、培养基要培养基要 。2 2、外植体要用、外植体要用 消消毒。毒。3 3、接种的无菌操作、接种的无菌操作 .4 4、培养在、培养在 。5 5、移栽到、移栽到 的环境中生存一段时间。的环境中生存一段时间。高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌酒精、氯化汞酒精、氯化汞酒精、酒精灯酒精、酒精灯灼烧灼烧无菌箱无菌箱消过毒消过毒