实验二细菌染色实验(精品).ppt

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1、本次实验的内容实验五 细菌的简单染色法实验六 细菌的革兰氏染色法实验七 细菌的芽胞染色法实验八 细菌的荚膜染色法微生物染色的基本知识一 微生物染色的意义1 进行微生物研究的基本技术;2 微生物形态特征观察的基本方法;3 不同形态微生物鉴别的基本技能。二 微生物染色的染料 碱性染料（basic dye）电离后为带正电荷的阳离子，可与细胞中带负电的组分结合。如Crystal violet,Safranin,Methylene blue，malachite green等。酸性染料（Acid dye）电离后为带负电荷的阴离子，可与细胞中带正电的组分结合。如Eosin,Congo red,Acid fu

2、chsin 等。脂溶性染料如Sudan black。细菌染色的方法实验五 细菌的简单染色法一 目的与要求 1 掌握细菌的简单染色法 2 初步认识细菌的形态 3 巩固油镜的使用方法二 基本原理 碱性染料电离后带正电能与带负电荷的细菌结合合,使其着色。三 主要器材 1 枯草芽胞杆菌(1218h培养物)2 吕氏碱性美兰染色液 3 仪器与用具(略)四染色方法 见下图 涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色2min水洗、吸干镜检镜检实验五 细菌简单染色的操作步骤沾取菌样五 染色结果 六 注意事项1 菌龄合适。2 注意涂片均匀，不宜过厚。枯草芽胞杆菌示意图实验六 细菌的革兰氏染色法一 目的与要求 1 掌握细菌的

3、革兰氏染色法 2 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性二 基本原理 革兰氏染色法基本步骤：涂片固定 结晶紫初染色 碘液媒染 乙醇脱色 番红复染 革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性(G-)表现出不同染色反应的根本原因在于它们的细胞壁结构存在差异。革兰氏阳性菌：紫色革兰氏阴性菌：红色 Structure of a Gram-Positive Cell Wall Structure of a Gram-Negative Cell Wall革兰氏阳性、阴性菌细胞壁结构的差异革兰氏阳性、阴性菌细胞壁结构的差异实验六 细菌的革兰氏染色法三 主要器材 1 金黄色葡萄球、大肠杆菌(约24培养物)2

4、 结晶紫、番红染色液 四染色方法 结晶紫初染2min碘液媒染1min乙醇脱色30sec番红复染2min涂片固定涂片制作水洗水洗水洗五 染色结果 革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌紫色紫色 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌红色红色六 注意事项1 菌龄合适。2 注意涂片均匀，不宜过厚。3 注意控制好脱色程度。实验七 细菌的芽胞染色法一 目的与要求 1 掌握细菌芽孢染色的方法及原理 2 初步了解芽孢杆菌的形态特征二 基本原理 芽胞的简介；芽孢染色的原理；三 主要器材 1 枯草芽胞杆菌(约2d的培养物)2 5%孔雀绿、0.5%番红染色液四 实验操作步骤（改良的Schaeffer-Fulton染色法)1 菌液制备：取2滴

5、生理盐水或蒸馏水于EP管中，沾取菌苔2环在水中混匀。2 染色：EP管中加入5%孔雀绿3滴混匀，将在沸水浴中加热1520min。3 涂片固定：过火焰固定。4 脱色：水洗至无绿色。5 复染：0.5%番红染色3min。6 镜检：油镜观察，绘出显微镜下观察到的结果。五 染色结果 六 注意事项1 注意掌握供试验菌种的培养时间。2 制备菌液时，取菌量适宜。兰绿色部分为芽胞；红色部分为菌体和孢囊实验八 细菌的荚膜染色法一 目的与要求 掌握细菌荚膜染色的方法及原理二 基本原理 荚膜不易着色，且易被水洗，采用衬托染色使菌体和前景着色，荚膜在菌体周围形成一透明圈。三 主要器材 1 胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus，俗称“钾细菌”）无氮培养 基约2d的培养物。2 绘图墨水（用滤纸过滤后的绘图墨水稀释1倍使用）。四 实验操作步骤（湿墨水法)1 制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。2 加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向 下轻压，吸去多余的菌液。3 镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。五 染色结果 六 注意事项1 注意掌握供试验菌种的培养时间。2 控制好墨水的稀释倍数。透明部分为荚膜