专题五DNA的粗提取与鉴定[1](精品).ppt

《专题五DNA的粗提取与鉴定[1](精品).ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《专题五DNA的粗提取与鉴定[1](精品).ppt（15页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、复习：复习：DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 DNADNA的溶解性的溶解性DNADNA和和蛋白质等成分蛋白质等成分在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液溶液中溶解度不同中溶解度不同利用这一特点，利用这一特点，选择适当的盐浓度选择适当的盐浓度就能使就能使DNA充分溶解，充分溶解，而使杂质沉淀；而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，或者让其他成分溶解，DNA析出析出 DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性1 1、提取、提取DNADNA的原理的原理DNADNA不溶于酒精溶液，不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。但细胞中某些蛋

2、白质则溶于酒精。将将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质，水解蛋白质，对对DNADNA没有影响没有影响 高高 温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080 而而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂溶解细胞膜溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质去除脂质和蛋白质 但对但对DNADNA没有影响没有影响（1 1）实验材料的选取）实验材料的选取从下列材料中选取从下列材料中选取2 23 3种种原则：原则：菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜

3、；菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌凡是含有凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑选用选用DNADNA含量相对较高的组织含量相对较高的组织2 2、DNADNA提取的实验步骤提取的实验步骤从核从核DNA数目来看，猪数目来看，猪38条，鸡条，鸡7

4、8条，哺条，哺乳动物血乳动物血0条，猕猴桃条，猕猴桃58条，洋葱条，洋葱16条，条，豌豆豌豆14条，菠菜条，菠菜12条，大肠杆菌条，大肠杆菌1条。请条。请选择动植物材料各一种。选择动植物材料各一种。哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。液体培养基中的大肠杆菌的液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。量减少。鱼卵是减数分裂的产物。鱼卵是减数分裂的产物。（1 1）实验材料的选取）实验材料的选取2 2、DNADNA提取的实验步骤提取的实验步骤（2 2）破碎细胞，获取含）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液1 1、动物细胞、动物细胞2 2、植物细胞、植物细胞容易破碎容易

5、破碎需要溶解细胞膜需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液：鸡血细胞溶液：鸡血细胞溶液：鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液过滤后收集滤液过滤后收集滤液过滤后收集滤液 加入一定的洗涤剂和食盐加入一定的洗涤剂和食盐 充分的充分的搅拌和研磨，搅拌和研磨，过滤后收集研磨液过滤后收集研磨液2 2、DNADNA提取的实验步骤提取的实验步骤（3 3）除去滤液中的杂质）除去滤液中的杂质 DNADNA的溶解：滤液的溶解：滤液2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶液40m

6、L40mL，玻棒沿一个方向玻棒沿一个方向轻缓搅拌轻缓搅拌。析出析出含含DNADNA的粘稠物：的粘稠物：滤取含滤取含DNADNA的粘稠物：的粘稠物：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻轻轻搅拌搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时（此时NaClNaCl溶液的浓度相当于溶液的浓度相当于0.14mol/L0.14mol/L）。）。用多层纱布用多层纱布过滤过滤，含，含DNADNA的粘稠物留在纱布上。的粘稠物留在纱布上。1 1、DNADNA的初次溶解与析出：的初次溶解与析出：2 2、DNADNA提取的

7、实验步骤提取的实验步骤2 2、DNADNA粘稠物的再溶解与析出：粘稠物的再溶解与析出：20mL2mol/L20mL2mol/L的的NaClNaCl溶溶液液 含含DNADNA的粘稠物的粘稠物在在20mL20mL烧杯中烧杯中轻缓搅轻缓搅拌拌3 3minmin，使尽可能多的，使尽可能多的DNADNA溶解在溶解在NaClNaCl溶液。溶液。过滤含有过滤含有DNADNA的的NaClNaCl溶液：溶液：用放有两层纱布的漏斗用放有两层纱布的漏斗过滤过滤步骤步骤所得的溶液，所得的溶液，滤液中含有滤液中含有DNADNA。提取含有杂质较少的提取含有杂质较少的DNADNA：所得的滤液体积分数为所得的滤液体积分数为9

8、5%95%的冷却酒精的冷却酒精50mL50mL，用玻棒沿一个方向用玻棒沿一个方向轻缓搅拌轻缓搅拌，溶液中（，溶液中（析出析出）出现乳白）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。水分。（3 3）除去滤液中的杂质）除去滤液中的杂质1.1.共有共有“五次搅拌、五次搅拌、三次过滤，两次析出三次过滤，两次析出”2.2.加入加入“两次蒸馏水，两次蒸馏水，两次两次NaClNaCl溶液溶液，一次酒精，一次酒精”试剂：试剂：（二）（二）DNADNA的鉴定的鉴定条件：条件：二苯胺二苯胺沸水浴条件下，沸水浴条件下，DNADNA遇遇二苯胺被染成二苯

9、胺被染成蓝色蓝色沸水浴沸水浴现象：现象：1.DNA1.DNA的鉴定的原理的鉴定的原理的鉴定的原理的鉴定的原理2.DNA2.DNA的鉴定的鉴定的鉴定的鉴定 向两支试管中分别加入向两支试管中分别加入向两支试管中分别加入向两支试管中分别加入 2mol/L 2mol/L 2mol/L 2mol/L NaClNaClNaClNaCl 溶液溶液溶液溶液5ml5ml5ml5ml 其中一支试管中加入其中一支试管中加入其中一支试管中加入其中一支试管中加入DNADNADNADNA丝状物丝状物丝状物丝状物 各加入各加入各加入各加入二苯胺二苯胺二苯胺二苯胺试剂试剂试剂试剂4ml4ml4ml4ml 混匀后，置于沸水浴中

10、加热混匀后，置于沸水浴中加热混匀后，置于沸水浴中加热混匀后，置于沸水浴中加热5min5min5min5min 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象：观察现象：观察现象：观察现象：溶解丝状物的溶液变为溶解丝状物的溶液变为蓝色蓝色2.实验中实验中NaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为2 molL和和0.14 molL对对DNA有何影响有何影响?1.在在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血

11、液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaCl浓度使浓度使DNA析出析出C.使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答：答：B答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使后者是使DNA析出析出3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺(沸水浴沸水浴)会染成会染成()()A.A.砖红色砖红色 B.B.橘黄色橘黄色 C.C.紫色紫色 D.D.蓝色蓝色4.提取鸡血中的提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液时，为什么要除去血液中的上清液中的上清液?答：答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以所以要除去上清液要除去上清液(含有蛋白质含有蛋白质)。答：答：D