HPLC 常见故障分析及日常保养知识.ppt

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1、WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSMHPLC 常见故障分析及日常保养知识马克刚马克刚马克刚马克刚WATERS CAGWATERS CAGHPLCHPLC的梯度系统的梯度系统溶剂输送系统(泵)检测器进样器色谱柱色谱柱梯度混合器溶剂输送系统(泵)高压梯度比例阀检测器进样器ABCD色谱柱色谱柱溶剂输送系统(泵)低压梯度 阻尼器 混合器WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM能引起能引起能引起能引起HPLCHPLCHPLCHPLC发生问题的潜在因素发生问题的潜在因素发生问题的潜在因素发生问题的潜在因素:工作环境工作环境工作

2、环境工作环境电源及地线电源及地线电源及地线电源及地线流动相流动相流动相流动相泵泵泵泵进样器进样器进样器进样器保护柱保护柱保护柱保护柱在线过滤器在线过滤器在线过滤器在线过滤器连接管路连接管路连接管路连接管路色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱检测器检测器检测器检测器数据处理装置数据处理装置数据处理装置数据处理装置操作操作操作操作Waters ConnectionsSM逻辑判断及处理逻辑判断及处理问题问题问题问题 化学品化学品环境环境 机器机器*色谱柱色谱柱/保护柱保护柱*电源电源 *泵泵*溶液溶液*地线地线 *进样器进样器*样品样品*温度温度 *检测器检测器*湿度湿度 *数据处理单元数据处理单元*清洁程度清

3、洁程度从最简单从最简单,容易之处入手容易之处入手:如如 1.1.停止流速停止流速;2.2.去掉柱子去掉柱子;Waters ConnectionsSM 系统冲洗系统冲洗系统冲洗系统冲洗-去掉柱子和保护柱去掉柱子和保护柱去掉柱子和保护柱去掉柱子和保护柱1.1.检查反压检查反压-应该为零或者很小应该为零或者很小;2.2.进空白进空白-基线应无问题基线应无问题;3.3.检查基线状况检查基线状况;WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM基线问题分析基线问题分析基线问题分析基线问题分析WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM基线噪

4、声基线噪声基线噪声基线噪声流动相内含有空气流动相内含有空气流动相内含有空气流动相内含有空气 -脱气处理脱气处理脱气处理脱气处理检测池内有气泡检测池内有气泡检测池内有气泡检测池内有气泡 -冲洗检测池或在检测池出口接一段内径冲洗检测池或在检测池出口接一段内径冲洗检测池或在检测池出口接一段内径冲洗检测池或在检测池出口接一段内径0.009“0.009“的管子的管子的管子的管子(此此此此 法只适用于法只适用于法只适用于法只适用于UVUV检测器检测器检测器检测器!)!)色谱柱内有未洗脱尽的组份色谱柱内有未洗脱尽的组份色谱柱内有未洗脱尽的组份色谱柱内有未洗脱尽的组份-洗脱色谱柱洗脱色谱柱洗脱色谱柱洗脱色谱柱

5、.系统有漏液之处系统有漏液之处系统有漏液之处系统有漏液之处 -检漏并处理检漏并处理检漏并处理检漏并处理电噪声电噪声电噪声电噪声 -去除噪声源去除噪声源去除噪声源去除噪声源,信号线屏蔽信号线屏蔽信号线屏蔽信号线屏蔽,检查系统接地状况检查系统接地状况检查系统接地状况检查系统接地状况检测器光源灯能量低检测器光源灯能量低检测器光源灯能量低检测器光源灯能量低 -更换光源灯更换光源灯更换光源灯更换光源灯检测池污染检测池污染检测池污染检测池污染 -冲洗检测池冲洗检测池冲洗检测池冲洗检测池WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM基线周期性噪声基线周期性噪声基线周期性噪声基

6、线周期性噪声绝大多数情况下是来源于泵的问题绝大多数情况下是来源于泵的问题绝大多数情况下是来源于泵的问题绝大多数情况下是来源于泵的问题泵头内有气泡泵头内有气泡泵头内有气泡泵头内有气泡 -流动相脱气流动相脱气流动相脱气流动相脱气 ,泵头排气泵头排气泵头排气泵头排气(注意正确的排气方法注意正确的排气方法注意正确的排气方法注意正确的排气方法)泵进出口阀有问题泵进出口阀有问题泵进出口阀有问题泵进出口阀有问题 -更换阀组件更换阀组件更换阀组件更换阀组件柱塞杆有问题柱塞杆有问题柱塞杆有问题柱塞杆有问题 -更换柱塞杆及其密封圈更换柱塞杆及其密封圈更换柱塞杆及其密封圈更换柱塞杆及其密封圈溶剂混合不良溶剂混合不良

7、溶剂混合不良溶剂混合不良 -加装混合器加装混合器加装混合器加装混合器电噪声电噪声电噪声电噪声 -去除噪声源去除噪声源去除噪声源去除噪声源非周期性噪声非周期性噪声非周期性噪声非周期性噪声气泡气泡 -流动相脱气流动相脱气检测池内有气泡检测池内有气泡 -流动相脱气流动相脱气,检测池后加适当反压检测池后加适当反压系统有漏液之处系统有漏液之处 -检漏并处理检漏并处理溶剂混合不良溶剂混合不良 -加装混合器加装混合器电噪声电噪声 -去除噪声源去除噪声源WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM基线漂移基线漂移基线漂移基线漂移系统未充分平衡系统未充分平衡梯度系统梯度系统-溶

8、剂溶剂A A于溶剂于溶剂B B的的ABSABS值相差大值相差大 -试用另种溶剂或使用基线扣除法试用另种溶剂或使用基线扣除法色谱柱有其他组份被洗脱出色谱柱有其他组份被洗脱出 -冲洗冲洗,直至基线稳定直至基线稳定溶剂发生变化溶剂发生变化(如溶入气体或溶剂挥发如溶入气体或溶剂挥发)-氦气或脱气机脱气氦气或脱气机脱气,溶剂瓶避光溶剂瓶避光,密封密封(但但要要 注意防止溶剂瓶内产生负压注意防止溶剂瓶内产生负压)系统有漏液之处系统有漏液之处-检漏并处理检漏并处理环境温度影响环境温度影响(尤其对示差尤其对示差,电导电导,电化学检测电化学检测)-室温室温,柱温柱温,检测池温度控制检测池温度控制反压变化反压变化

9、 -溶剂和样品过滤溶剂和样品过滤.注意黏度过大的样品注意黏度过大的样品 WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSMWatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM基线周期性波动基线周期性波动基线周期性波动基线周期性波动温度影响温度影响 -环境温度及检测池温度控制环境温度及检测池温度控制.注意空调机的影响注意空调机的影响溶剂混合不良溶剂混合不良 -加装混合器加装混合器流动相脱气不良流动相脱气不良 -流动相脱气流动相脱气供电电源的影响供电电源的影响 泵不良泵不良 -检修处理检修处理 WatersWaters ConnectionsC

10、onnectionsSMSM基线有无规律的尖峰基线有无规律的尖峰基线有无规律的尖峰基线有无规律的尖峰气泡气泡 -溶剂脱气溶剂脱气电路接触不良电路接触不良-保证清洁保证清洁,接线牢固接线牢固,接点无氧化接点无氧化光源灯不良光源灯不良-检查处理检查处理电噪声电噪声-去除噪声源去除噪声源WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM脱气方法脱气方法脱气方法脱气方法在线脱气机脱气在线脱气机脱气 氦气脱气氦气脱气真空过滤脱气真空过滤脱气注意注意:溶剂应每天脱气溶剂应每天脱气WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM无样品峰无样品峰未进样

11、 泵未工作漏液流动相或样品的问题柱子或保护柱的问题数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题最简单快捷的检查-泵是否工作,系统是否漏液,进一针丙酮溶液检查检测器读数及数据单元是否有响应 WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM负峰负峰负峰负峰组份的组份的ABSABS值小于溶剂的值小于溶剂的ABSABS值值气泡通过了检测池气泡通过了检测池对对RIRI检测器不一定是有了问题，很可能是正常的检测器不一定是有了问题，很可能是正常的所有峰都是负峰所有峰都是负峰-可能是检测器输出与数据单元连线可能是检测器输出与数据单元连线 极性接反极性接反WatersWaters Co

12、nnectionsConnectionsSMSM峰形不好峰形不好峰形不好峰形不好-如峰拖尾如峰拖尾如峰拖尾如峰拖尾,峰分叉峰分叉峰分叉峰分叉,出肩膀出肩膀出肩膀出肩膀在线过滤器在线过滤器(IN LINE FILTER)IN LINE FILTER)污染污染(通常会伴随有系统压力升高之现象通常会伴随有系统压力升高之现象)色谱柱污染色谱柱污染系统有不正常的死体积系统有不正常的死体积-检查管路连接是否正确检查管路连接是否正确-内径内径,接头接头保护柱保护柱(GUARD COLUMN)GUARD COLUMN)污染污染溶剂不好或使用不对溶剂不好或使用不对样品不好样品不好色谱柱坏了色谱柱坏了-*PH 2

13、 PH 8 8 会破坏柱子内的填料会破坏柱子内的填料 *流速变化率太大流速变化率太大-操作上应注意操作上应注意 WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM系统性能系统性能系统性能系统性能两个要点两个要点两个要点两个要点-峰保留时间峰保留时间峰保留时间峰保留时间(RT)RT)RT)RT)重现性重现性重现性重现性,峰面积重现性峰面积重现性峰面积重现性峰面积重现性RTRTRTRT重现性不好重现性不好重现性不好重现性不好 -无规律变化无规律变化:*:*流量不稳流量不稳-气泡气泡,漏液漏液,泵泵 *温度影响温度影响 有规律的变化有规律的变化,且逐渐趋于稳定且逐渐趋于稳

14、定:系统未充分平衡系统未充分平衡 RT RT RT RT 重现性好重现性好重现性好重现性好,但峰面积重现性不好但峰面积重现性不好但峰面积重现性不好但峰面积重现性不好 -*进样量进样量-选用定量管进样时选用定量管进样时,进样进样 体积应大于体积应大于3 3倍定量管容积倍定量管容积;*样品样品,气泡气泡;*样品在流动相各组份中不能充分样品在流动相各组份中不能充分 溶解溶解(通常伴随有柱压逐渐升高通常伴随有柱压逐渐升高 且经反冲后且经反冲后,柱压会恢复正常之现柱压会恢复正常之现 象象););*基线噪声的影响基线噪声的影响;*积分处理的影响积分处理的影响;WatersWaters Connection

15、sConnectionsSMSM工作环境工作环境工作环境工作环境电源电源 -容量容量 稳定性稳定性地线地线 -系统统一电源系统统一电源,统一接地统一接地清洁清洁 -不要轻视灰尘的影响不要轻视灰尘的影响湿度湿度 -特别是近海地区特别是近海地区温度温度 -空调机的影响空调机的影响 WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM某些意想不到的因素或不良的工作习惯会影响您的工作某些意想不到的因素或不良的工作习惯会影响您的工作某些意想不到的因素或不良的工作习惯会影响您的工作某些意想不到的因素或不良的工作习惯会影响您的工作无线装置或于仪器同一供电线路中的高频设备及频繁无线装

16、置或于仪器同一供电线路中的高频设备及频繁启动的大功率设备可能会带来噪声干扰启动的大功率设备可能会带来噪声干扰载液载液/气容器不清洁带来干扰气容器不清洁带来干扰质量不良的化学品或使用不当质量不良的化学品或使用不当(如滤膜如滤膜)带来的影响带来的影响实验前实验前/后的准备和收尾工作后的准备和收尾工作.实验器皿和器械的清洁实验器皿和器械的清洁正确的开机正确的开机/关机操作关机操作WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM用户可自己作的日常检查用户可自己作的日常检查用户可自己作的日常检查用户可自己作的日常检查泵泵泵泵耐压检查耐压检查流量检查流量检查-用脱气的甲醇用脱

17、气的甲醇,泵后要有约泵后要有约10001000PSIPSI的反压的反压 进样器进样器进样器进样器同样进样量的重现性同样进样量的重现性检测器检测器检测器检测器开机自检开机自检(CALIBRATION)CALIBRATION)SE/RESE/RE值值(UVUV检测器检测器)定期清洗系统定期清洗系统定期清洗系统定期清洗系统-溶剂过滤头溶剂过滤头,泵泵,进样器进样器,检测器检测器 清洗方法清洗方法定期清洁系统定期清洁系统定期清洁系统定期清洁系统-除尘除尘 清洁电路时清洁电路时,需注意人身安全及防止静电损坏电路板需注意人身安全及防止静电损坏电路板510泵示意图515泵示意图7725i717自动进样器48

18、6光路示意图2487光路示意图示差检测器流路示意图WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM想一想想一想,看一看看一看:1.1.HPLCHPLC系统中各机器是否开机正常系统中各机器是否开机正常2.2.溶剂瓶内溶剂是否新鲜且脱气溶剂瓶内溶剂是否新鲜且脱气3.3.泵是否已初始化且工作正常泵是否已初始化且工作正常4.4.系统管路及电路是否连接正常系统管路及电路是否连接正常5.5.检测器是否通过自检且工作正常检测器是否通过自检且工作正常6.6.溶剂瓶会不会产生负压溶剂瓶会不会产生负压7.7.溶剂的溶剂的PHPH值是否合适值是否合适8.8.对温度敏感的检测器是否被阳光

19、直射或被空调直吹对温度敏感的检测器是否被阳光直射或被空调直吹9.9.溶剂瓶是否被阳光直射溶剂瓶是否被阳光直射10.10.停机前是否将系统及柱子中的缓冲液置换干净停机前是否将系统及柱子中的缓冲液置换干净11.11.较长时间停机之前是否将柱子摘下较长时间停机之前是否将柱子摘下,且系统最后用甲醇冲洗过且系统最后用甲醇冲洗过(系统不能在系统不能在缓冲液或缓冲液或THFTHF下长时间停机下长时间停机)12.12.样品是否能完好的溶于流动相样品是否能完好的溶于流动相13.13.所选用的过滤膜是否正确所选用的过滤膜是否正确14.14.若用若用77257725进样器进样器,所用的进样针是否正确所用的进样针是否

20、正确WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM切忌切忌:示差示差/荧光检测器的出口管堵塞荧光检测器的出口管堵塞 直接用甲醇置换缓冲液直接用甲醇置换缓冲液 进的样品会在流动相中产生沉淀进的样品会在流动相中产生沉淀 用水溶性滤膜过滤有机溶剂用水溶性滤膜过滤有机溶剂 溶剂溶剂,特别是缓冲液撒漏在机器内特别是缓冲液撒漏在机器内 流速变化率太大流速变化率太大 高温使用下的柱子尚未降下温度就停泵高温使用下的柱子尚未降下温度就停泵 阳光直射溶剂瓶或检测器阳光直射溶剂瓶或检测器 空调直吹检测器空调直吹检测器 溶剂瓶完全密封溶剂瓶完全密封 THFTHF在不密封情况下长期存放在

21、不密封情况下长期存放WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSMWATERS WATERS WATERS WATERS 仪器保险合同仪器保险合同仪器保险合同仪器保险合同(TAP)TAP)TAP)TAP)介绍介绍介绍介绍:(TAP=Total Assurance Plan)TAP=Total Assurance Plan)好处好处:*:*每年定期保养每年定期保养每年定期保养每年定期保养,保证仪器长期处于良好状况保证仪器长期处于良好状况保证仪器长期处于良好状况保证仪器长期处于良好状况;*大大减少故障停机时间大大减少故障停机时间大大减少故障停机时间大大减少故障停机时

22、间,提高您的工作效率提高您的工作效率提高您的工作效率提高您的工作效率,节省您的时间和节省您的时间和节省您的时间和节省您的时间和 化学品的消耗化学品的消耗化学品的消耗化学品的消耗;*延长您的机器寿命延长您的机器寿命延长您的机器寿命延长您的机器寿命;*便于您预先作出每年的仪器维修保养便于您预先作出每年的仪器维修保养便于您预先作出每年的仪器维修保养便于您预先作出每年的仪器维修保养,零件采购经费计划零件采购经费计划零件采购经费计划零件采购经费计划;TAPTAP内容内容:*:*每年定期更换机器易损件每年定期更换机器易损件每年定期更换机器易损件每年定期更换机器易损件.如各密封件如各密封件如各密封件如各密封

23、件,光源灯等光源灯等光源灯等光源灯等;*除定期更换的部件外除定期更换的部件外除定期更换的部件外除定期更换的部件外,其他部件若出现故障其他部件若出现故障其他部件若出现故障其他部件若出现故障,包包包包 括价格高的部件括价格高的部件括价格高的部件括价格高的部件,维修或更换无需再付费维修或更换无需再付费维修或更换无需再付费维修或更换无需再付费;*可获得优先响应的临时性维修申请可获得优先响应的临时性维修申请可获得优先响应的临时性维修申请可获得优先响应的临时性维修申请;TAPTAPTAPTAP特别适用于工作量大的质检特别适用于工作量大的质检特别适用于工作量大的质检特别适用于工作量大的质检/质控实验室质控实

24、验室质控实验室质控实验室;您的经费支出和您所获得的利益相比您的经费支出和您所获得的利益相比您的经费支出和您所获得的利益相比您的经费支出和您所获得的利益相比-值得值得值得值得;WatersWaters ConnectionsConnectionsSMSM十分感谢各位朋友的光临和对十分感谢各位朋友的光临和对十分感谢各位朋友的光临和对十分感谢各位朋友的光临和对WATERSWATERSWATERSWATERS的支持的支持的支持的支持欢迎各位对欢迎各位对欢迎各位对欢迎各位对WATERSWATERSWATERSWATERS的售后服务提出宝贵意见或建议的售后服务提出宝贵意见或建议的售后服务提出宝贵意见或建议的售后服务提出宝贵意见或建议祝各位来宾诸事一帆风顺祝各位来宾诸事一帆风顺祝各位来宾诸事一帆风顺祝各位来宾诸事一帆风顺!预祝圣诞节和新年快乐预祝圣诞节和新年快乐预祝圣诞节和新年快乐预祝圣诞节和新年快乐!