徐康森最新2010版药典生化药汇总.ppt

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1、2010版药典版药典生化药总结报告生化药总结报告徐康森l第一部分:生化药的基本概况l第二部分:2010年版中国药典生化药归总第一部分：生化药的基本概况第一部分：生化药的基本概况1、生化药的定义2、生化药的发展1、生化药的定义、生化药的定义 生化药物是我国医药产品的一个大类。生化药主要从动、植物及微生物发酵提取的、化学合成、生物-化学半合成或用现代生物重组技术制得的一类药品 尤其对于严重危害人类健康和生命的疾病，如心脑血管病、癌症、糖尿病和病毒疾患等有其独特的治疗效果。深受人民的欢迎和重视。2、生化药的发展历程、生化药的发展历程时间时间发展阶段发展阶段品种标准品种标准产值产值1950年-1978

2、年初具规模1978年-1995年准备发展品种100个左右产值20亿1995年-2005年初步发展品种350个左右产值200亿2005年-2009年发展品种400个左右产值500-600亿医药行业的发展状况医药行业的发展状况增长率增长率2005年年2006年年2007年年2008年年2009年年医药行业25%18%23%27%25%化学原料31%5%17%22%15%化药制剂17%23%22%32%30%中药饮片-18%28%43%36%35%中成药35%19%19%23%18%生物生化药生物生化药11%29%28%42%40%20092009年年1 1月月-12-12月医药制药业总值月医药制药

3、业总值 单位：亿元单位：亿元名称名称总产值（当年价）总产值（当年价）本月本月同期增长同期增长 本月累计本月累计 同期增长同期增长医药制造医药制造业业982.90982.9027.93%27.93%9403.059403.0520.22%20.22%化学药品化学药品制造制造487.32487.3222.94%22.94%4831.834831.8316.21%16.21%中成药制中成药制造造237.24237.2434.53%34.53%2111.682111.6822.38%22.38%生物生化生物生化制品制造制品制造94.4694.4640.17%40.17%918.71918.7127.8

4、8%27.88%20092009年年1 1月月-12-12月医药制药业工业销售产值月医药制药业工业销售产值 单位：亿元单位：亿元名称名称工业销售产值（当年价）工业销售产值（当年价）本月本月同期增长同期增长本月累计本月累计同期增长同期增长医药制造医药制造业业946.11946.1128.58%28.58%8965.898965.8921.19%21.19%化学药品化学药品制造制造460.58460.5823.45%23.45%4596.094596.0916.86%16.86%中成药制中成药制造造225.52225.5232.91%32.91%1997.971997.9723.95%23.95%

5、生物生化生物生化制品制造制品制造97.1897.1846.02%46.02%887.15887.1529.05%29.05%20092009年年1 1月月-12-12月医药制药业出口交货值月医药制药业出口交货值 单位：亿元单位：亿元名称名称出口交货值出口交货值本月本月同期增长同期增长 本月累计本月累计 同期增长同期增长医药制造医药制造业业78.9378.9334.53%34.53%755.76755.766.84%6.84%化学药品化学药品制造制造48.5848.5828.99%28.99%491.92491.920.54%0.54%中成药制中成药制造造6.316.3193.50%93.50%

6、47.8147.8123.10%23.10%生物生化生物生化制品制造制品制造13.4113.4158.44%58.44%112.94112.9435.74%35.74%20092009年年1 1月月-12-12月医药制药业新产品产值月医药制药业新产品产值 单位：亿元单位：亿元名称名称新产品产值（当年价）新产品产值（当年价）本月本月同期增长同期增长本月累计本月累计同期增长同期增长医药制造医药制造业业145.99145.9950.80%50.80%1313.741313.7428.38%28.38%化学药品化学药品制造制造85.8485.8446.55%46.55%793.13793.1325.3

7、0%25.30%中成药制中成药制造造32.9432.9454.76%54.76%279.27279.2732.82%32.82%生物生化生物生化制品制造制品制造13.0413.0446.75%46.75%121.07121.0718.79%18.79%第二部分：第二部分：2010年版中国药典生年版中国药典生 化药归总化药归总 为贯彻党的十七大精神，落实科学发展观，建国以来的第九版药典中国药典2010年版，已完成增修订任务，目前已经正式出版发行。宗旨：宗旨：l提高药典质量，l应用高新技术，l解决安全隐患，l赶超国际水平。本届药典生化药修订工作的特点本届药典生化药修订工作的特点l时间短l任务重l难

8、度大l要求高中国药典中国药典2010版生化药版生化药标准品种数汇总标准品种数汇总类别2005版标准（品种）2010版标准（品种）增加标准（品种）标准（品种）增长%删除氨基酸及其衍生物 44（23）53（26）9（3）20.5%（13%）核酸及其衍生物 44（10）51（11）7（1）15.9%（10%）酶与辅酶 28（11）34（14）6（3）21.4%（27%）多肽、蛋白 26（11）30（13）8（3）30.8%（27%）4多糖 15（5）19（6）4（1）26.6%（20%）脂 2（1）4（2）2（1）100.0%（100.0%）1总数 159（61）191（72）36（12）22.6%

9、（19.6%）5范围范围特点特点工艺（制剂）工艺（制剂）质标增修订内容质标增修订内容氨基酸及其衍生物氨基酸及其衍生物人人生生命命的的基基本本组组成成单单位位，人人健健康康的的基基本本营营养养成成分分，救死扶伤十分重要。救死扶伤十分重要。85年年200万瓶万瓶08年年2亿万瓶亿万瓶合成、发酵、提取、酶转化合成、发酵、提取、酶转化固：片、胶囊、颗粒、散、口含固：片、胶囊、颗粒、散、口含液：口服液、滴眼液、注射、冲洗液液：口服液、滴眼液、注射、冲洗液TLC其它其它aa检查检查 有关物质有关物质渗透压渗透压 红外图谱红外图谱*可见异物可见异物 旋光度：系数法计算旋光度：系数法计算*抑菌剂抑菌剂 含量测

10、定：非水滴定、比色、含量测定：非水滴定、比色、*微生物限度微生物限度 HPLC*细内细内核酸及其衍生物核酸及其衍生物生生命命的的基基本本物物质质、临临床床治治病病毒毒、心心血血管管、脑脑损损伤伤、缺氧等缺氧等合成、发酵合成、发酵固：片、含、胶、颗、冻干固：片、含、胶、颗、冻干液：口服、注射、滴液（眼、鼻）液：口服、注射、滴液（眼、鼻）Nacl注射、葡萄糖注射注射、葡萄糖注射 有关物质有关物质 含量均匀度含量均匀度异常毒性异常毒性 TLC渗透压渗透压 含量测定含量测定残留溶剂残留溶剂 热源修订为细内热源修订为细内溶液颜色和澄清溶液颜色和澄清 说明书增加用法、用量、注射途径、说明书增加用法、用量、

11、注射途径、注速注速 酶与辅酶酶与辅酶参参与与一一切切代代谢谢、生生物物体体内内催化剂、往往有生物活性催化剂、往往有生物活性大大部部分分从从生生物物体体组组织织提提取取、少少部部分分发发酵酵法法固固：片片、胶胶囊囊、颗颗粒粒、软软胶胶囊囊、冻冻干干、粉粉液：注射液、溶液液：注射液、溶液溶液的颜色溶液的颜色 无菌无菌高分子物质高分子物质 过敏过敏有关物质有关物质 降压物质降压物质异常毒性异常毒性细菌内毒素细菌内毒素微生物限度微生物限度多肽多肽蛋白蛋白aa残残基基组组成成肽肽链链，由由肽肽链链组成生命的基本物质蛋白组成生命的基本物质蛋白是是国国内内外外新新崛崛起起一一类类新新品品种种 3-32aa很

12、关注很关注大大部部分分合合成成，少少部部分分提提取取、重重组组产产品品归归发酵工艺发酵工艺固：注射用固：注射用液：注射液溶液液：注射液溶液高分子蛋白高分子蛋白 异毒异毒有关物质有关物质 细内细内相关蛋白相关蛋白 微生物限度微生物限度含量：含量：HPLC 过敏过敏金属离子：吸收光谱金属离子：吸收光谱多糖、多糖、脂脂机机体体代代谢谢中中提提供供能能源源、碳碳源源，亦亦是是细细胞胞结结构构主主要要组组成部分成部分提取、发酵提取、发酵固：片、胶囊、乳膏、软胶囊、注射用固：片、胶囊、乳膏、软胶囊、注射用液：注射液、液：注射液、Nacl、葡萄糖注射液、葡萄糖注射液金属离子：吸收光谱金属离子：吸收光谱 有关

13、物质：有关物质：HPLC 比活：比活：含测：含测：HPLC、GC比旋度比旋度 过氧化值过氧化值有机残留有机残留 *甲氧基胺值甲氧基胺值细内细内 不皂化值不皂化值一、氨基酸及其衍生物类一、氨基酸及其衍生物类1、基本介绍 该类品种是组成蛋白质的基本单位。组成人体蛋白质的氨基酸只有20种左右，均为L-a-氨基酸（除甘氨酸外）。因为是人类健康的基本营养成分，故在救死扶伤中扮演十分重要角色。临床上除单方使用aa外，其还是复方aa注射液的主要组成成分。临床上常用的氨基酸注射液有3aa、6aa、9aa、11aa、15aa、17aa、18aa（I-II）等。从1985年销售100万瓶，到2008年销售量已经达

14、到2亿万瓶，市场潜力很大，前景美好。2、2010年版中国药典收载的氨基酸年版中国药典收载的氨基酸及其衍生物类品种及其衍生物类品种 牛磺酸及其制剂（片、散、颗粒、胶囊、滴眼液）；盐酸精氨酸及其制剂（片、注射液）；色氨酸；谷氨酸（钠）及其制剂（片、注射液、钾注射液）；组氨酸及盐酸组氨酸；脯氨酸；精氨酸；酪氨酸；丝氨酸；异亮氨酸；亮氨酸；赖氨酸（盐酸、醋酸、苄达）；缬氨酸；门冬酰胺（片）、甘氨酸（冲洗液）、胱氨酸（片、盐酸）、丙氨酸、甲硫氨酸（片）、苏氨酸、苯丙氨酸、谷丙甘氨酸胶囊、乙酰半胱氨酸（滴眼液、颗粒）、乙酰谷氨酸（注射液）、羧甲司坦（口服溶液、片、颗粒）等53个品种。3、收载的氨基酸及其衍

15、生物类药品、收载的氨基酸及其衍生物类药品基本特点基本特点l几乎包含了国内外所有氨基酸类产品l方便临床使用，该类产品呈现制剂系列化特点，如固体制剂包括：片、胶囊、颗粒、散、口含片；液体制剂有：口服溶液、滴眼液、注射液等4、品种增修订情况、品种增修订情况 增订、修订和统一有关检查项目内容、使得该类标准基本与国外同类标准接轨。增订情况增订情况修订情况修订情况TLC法检查其他氨基酸 增加方法学系统适用性 试验渗透压可见异物抑菌剂（滴眼液、注射液）微生物限度细菌内毒素 增加限度要求、干扰试验等有关物质 增加灵敏度要求、最小检测量热原修订为细菌内毒素溶液的颜色红外光谱旋光度用系数法计算含量测定 非水滴定

16、比色法 HPLC法二、核酸及其衍生物类二、核酸及其衍生物类1、简介：核酸是生命的最基本物质，存在于一切生物细胞内，DNA只要存在细胞的染色体中，RNA主要存在细胞的微粒体中。2、2010年版药典收载的核酸及其衍生年版药典收载的核酸及其衍生物类药品的品种物类药品的品种 三磷酸腺苷二钠、注射用ATP（注射液）、胞磷胆碱钠（注射用、注射液）、肌苷（口服溶液、片、注射液、胶囊、注射用）、环磷腺苷（注射用）、盐酸阿糖胞苷（注射用）、腺苷钴胺（片）、更昔洛韦（注射液、注射用）、利巴韦林原料及其制剂、阿昔洛韦原料及其制剂、泛昔洛韦（片、胶囊）、盐酸伐昔洛韦（片、胶囊）等51个品种。3、收载的核酸及其衍生物类

17、药品品种、收载的核酸及其衍生物类药品品种的基本特点的基本特点l临床上治疗病毒疾患为主，部分治疗心血管及脑损伤、缺氧等疾病。如早期阿糖胞苷酸是治疗威胁人类健康的病毒疾患的首创药物；第一代核苷酸类药物利巴韦林，第二代阿昔洛韦、更昔洛韦直至泛昔洛韦等。l该类产品大部分是微生物发酵或半合成的，化学结构清楚、成分明白、质量标准较完善。l2010年版药典收载的核酸类药物品种较为齐全，尤其制剂，剂型完整，低的2-3种，多的7-8种。如利巴韦林有11种：固体制剂有4种，片、口含片、胶囊、颗粒；液体制剂有7种，滴眼液、滴鼻液、口服溶液、注射剂、氯化钠注射液、葡萄糖注射液、注射用。4、品种增修订情况、品种增修订情

18、况 该类药品大部分标准项目比较完善，大部分未增订和修订，少部分进行了增修订。增订情况增订情况修订情况修订情况有关物质异常毒性渗透压残留溶剂含量均匀度热原修订为细菌内毒素含量测定方法TLC法分离度要求溶液的澄清度与颜色用法、用量注射途径、注射速度Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍 盐酸阿糖胞苷（上海所起草，标准已全面达到或超过国外标准，有代表意义值得借鉴）l修订了含量测定为HPLC法，限度达到98%-102%l增订项目共6项：氯含量（因盐酸盐）、溶液的澄清度与颜色、有关物质、炽灼残渣、重金属、残留溶剂等。特别是其中的氯含量测定、有关物质检查、残留溶剂检查等很重要l氯含量：电位

19、滴定法测定，回收率100.4%，RSD=0.8%（n=6）；l有关物质：对阿糖腺苷、尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷等进行考察，采用2种C18色谱柱进行系统适用性考察，得出相应结果。经天津所和广东所复核，结果一致；l残留溶剂：对5个企业的8种溶剂进行考察（聚乙二醇毛细管柱，进行系统适用性、回收率和最低检出限进行考察）。经天津所和广东所复核，结果一致。盐酸阿糖胞苷质量标准对比盐酸阿糖胞苷质量标准对比2010版版 2005版版 BP2007 USP30 JP15 盐酸阿糖胞苷盐酸阿糖胞苷 同左同左 阿糖胞苷阿糖胞苷 阿糖胞苷阿糖胞苷 阿糖胞苷阿糖胞苷 含量含量限度限度 无水干燥无水干燥98.0%102.0%

20、97.0%103.0%99.0%100.5%98.0%102.0%98.5%101.0%性状性状 白色、类白色细小针状结白色、类白色细小针状结晶或结晶粉末，水易溶，晶或结晶粉末，水易溶，乙醇略溶，乙醚几乎不溶乙醇略溶，乙醚几乎不溶 同左同左 白色或近白结晶性粉末白色或近白结晶性粉末 同左同左 白色晶体或晶粉，白色晶体或晶粉，水易溶，乙醇略水易溶，乙醇略溶溶 熔点熔点 189198 同左同左 215 214 比旋度比旋度 127+133 同左同左 154+160 同左同左 同左同左 鉴别鉴别 紫外紫外-可见：可见：280nm最最大吸收，大吸收，241nm最小吸收最小吸收;含测：与对照液主峰含测：

21、与对照液主峰RT一致一致;红外图谱红外图谱;溶液呈氯化物鉴别反应溶液呈氯化物鉴别反应 同左同左 154+160 紫紫外外-可可见见:230-350检检测测，281 nm最最大大吸吸收收；特特 殊殊 吸吸 收收 最最 大大 值值 在在540nm570nm;红红外外图图谱谱;相相关关物物检检查查：与对照品斑点一致与对照品斑点一致 红外图谱红外图谱含测：与对照含测：与对照品主峰品主峰RT一致一致 红外图谱红外图谱紫外紫外-可见与对可见与对照在相同照在相同nm有相有相同吸收同吸收 澄清度与澄清度与颜色颜色 1号颜色号颜色2号号1.2g10ml 澄清无色澄清无色 1g10ml 澄清且不得澄清且不得比对照

22、溶液比对照溶液Y5颜色深颜色深 0.2g20ml，澄澄清无色清无色 PH 0.20g/20ml水溶水溶液，液，6.58.0 三、酶及其辅酶类三、酶及其辅酶类1、简介：酶是生物体内的催化剂，参与一切代谢过程。酶的组成为单纯蛋白质和结合蛋白质。后者为酶蛋白，非蛋白部分为辅酶或辅基。酶又可以按照各种催化反应分类，如氧化还原酶、转移酶、水解酶、异构酶、合成酶等。2、2010年版药典收载的酶及辅酶类年版药典收载的酶及辅酶类药品品种药品品种 胰酶（肠溶片、肠溶胶囊）、胰蛋白酶（注射用）、糜蛋白酶（注射用）、胃蛋白酶（片、颗粒、含糖胃蛋白酶）、玻璃酸酶（注射用）、抑肽酶（注射用）、凝血酶冻干粉、尿激酶（注射

23、用）、门冬酰胺酶、*（注射用）、细胞色素C（注射用、注射液）、乌司他丁*（溶液、注射用）、辅酶Q10（片、注射液、胶囊、软胶囊）、激肽原酶*等34个品种。*为新增品种3、收载的酶及辅酶类品种的基本特点、收载的酶及辅酶类品种的基本特点l国外药典收载的品种，本次药典大部分均已收入。l大部分是生物体某些组织中提取、纯化和精制的；另一部分是微生物经发酵、破壁后再从发酵液中提取、纯化和精制而成的。l酶是蛋白质，具有生物活性，通常用于提纯和纯化蛋白质的方法都适用于酶。l质量指标的制定中注意酶的总活性和比活力纯度的关系。l新增订的药品品种仅有3个。4、增修订情况、增修订情况l溶液的颜色l高分子物质检查l有关

24、物质l异常毒性l细菌内毒素l微生物限度l无菌l过敏Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍抑肽酶抑肽酶该品种由上海药检所起草Chp2005、Bp2008/Ep6.0、USP32版均收载，本版继续收载，但依据USP作了三个方面的修订。1.检查去丙aa-去甘aa-抑肽酶和有关物质参照USP32采用附录新技术毛细管电法：这是我国第一个用该法上药典的品种。柱：石英毛细管分离柱毛细管温度：30电极液：磷酸二氢钾溶液分离压：12KV波长：214nm结果：去丙aa抑肽酶抑肽酶RT0.99（上海所0.989）去丙aa-去甘aa-抑肽酶抑肽酶RT0.98（上海所0.978）（两相关物分离度1.40

25、，去丙aa-抑肽酶抑肽酶分离度1.24、抑肽酶拖尾因子1.8）对照品图供试品图Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍2.检查N-焦谷氨酰-抑肽酶和有关物（参照USP32）色谱柱：TSK-GEL IC-Cation-SW柱温：40 流动相：磷酸二氢钾缓冲液流速：1.0ml/min 梯度洗程序结果：N-焦谷氨酰-抑肽酶抑肽酶 RT0.9（分离度2.2，抑肽酶拖尾因子0.92，最低检出量：82ng）对照品图供试品图Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍3.检查高分子蛋白（USP32）关键是采用三根串联Gel色谱柱（TSK-G4000SWXL柱）柱温35，流速1.0ml

26、/min,二聚体相对RT0.9，分离度1.4，拖尾因子0.91。以上用新技术的三项检以上用新技术的三项检查，有效控制抑肽酶产品的查，有效控制抑肽酶产品的纯度，使产品质量有一个飞纯度，使产品质量有一个飞跃，使标准的制定达到或超跃，使标准的制定达到或超过国外标准。过国外标准。对照品图供试品图项项目目ChP 2010版版ChP 2005版版BP2008/EP6.0USP32性状同右白色、微黄几乎白色粉，易湿溶解性同右易溶于水、0.9%NaCl，不溶于乙醇、丙酮、乙醚溶于水溶液不溶于有机溶剂鉴别（1）胰蛋白酶能使底物显紫红色，本品不能；（2）HPLC（同USP31）同左（1）1.（1）TLC法2.（2

27、）抑制抑肽酶活性1.（1）TLC法（2）HPLC法pH同右5mg/ml：5.07.0溶液澄清度同右2mg/ml：溶液应澄清吸光度同右3U/ml：277nm最大吸收度0.8同左同左干燥失重0.1g真空干燥6.0%0.1g真空3h6.0%水分6.0%6.0%去丙aa抑肽酶和去丙aa-去甘aa 抑肽酶同USP32毛细管电泳法，分别7.5%和8.0%N-焦谷氨酰-抑肽酶和有关物质同USP32HPLC：已知1.0%，单个0.5%，未知总量1.0%高分子蛋白同USP32凝胶柱3.0%分子排阻，抑肽酶前不得有峰分子排阻1.0%细菌内毒素0.14 IU/抑肽酶同左热原15 U/kg，应符合同左同左异常毒性同右

28、4 U/ml，iv，应符合同左同左降压1.5 U/kg，应符合效价同右酶底物法3.0 U/mg同左同左抑肽酶国内外质量标准比较四、多肽、蛋白类四、多肽、蛋白类1、简介：肽类是氨基酸相互结合成多肽链。蛋白质就是由多个氨基酸残基组成的多肽链。一般以51个aa残基，分子量为5733的Insulin划分，高于此分子量的称为蛋白，小于的为肽类。l肽键(peptide bond)的形成2、2010年版药典收载的多肽及蛋白类年版药典收载的多肽及蛋白类药品品种药品品种 尿促性素、注射用HMg、绒促性素、注射用HCg、醋酸丙氨瑞林、注射用醋酸丙氨瑞林、硫酸鱼精蛋白及其注射液、五肽胃泌素及其注射液、缩宫素注射液、

29、鲑降钙素及其注射液、生长抑素及其注射用、甲状腺素片、醋酸奥曲肽（注射液、注射用）、胸腺法新（注射用）、胰岛素（系列产品）、重组人生长激素（注射用）等30个品种。3、收载多肽及蛋白类品种的基本特点、收载多肽及蛋白类品种的基本特点l本次药典收载的产品中少部分为脏器提取的激素、肽类。安全性无法保障的品种如垂体后叶粉、注射液；缩宫素溶液；甲状腺粉等删除。l部分肽和小分子蛋白中的生物活性、生物鉴别由化学测定法代替。l本次药典收载的合成肽类药品，纯度较高、质量优良，大部分质量标准与国际接轨。生物生物测测定法修定法修订订情况情况修订类型品种名称修订内容（修订原因）删除品种垂体后叶粉工艺粗糙；产品纯度差、杂质

30、多、质量低；安全没有保障删除品种垂体后叶注射液工艺粗糙；产品纯度差、杂质多、质量低；安全没有保障删除品种缩宫素溶液工艺粗糙；产品纯度差、杂质多、质量低；安全没有保障删除品种甲状腺粉工艺粗糙；产品纯度差、杂质多、质量低；安全没有保障删除部分生物测定胰岛素猪胰岛素注射液中性胰岛素注射液精蛋白胰岛素注射液删除生物效价和兔血糖法，改用HPLC法测定，加限度试验（动物减半，随机涉及生物统计，结果为等效）简化效价测定为活性鉴别。删除生物测定硫酸鱼精蛋白*国外用化学滴定法替代生物测定删除生物测定缩宫素注射液*国外已用HPLC法代替生物测定。国内目前产品因杂质多，大于30%，故未收载删除生物测定肝素及其制剂*

31、国外已用抗II和抗Xa（分光法）取代生物测定国内尚待尽快改用分光法替代生物测定减少生物测定注射用重组人生长激素常规用HPLC法测定，同时一年进行至少一次生物测定减少生物测定鲑降钙素常规用HPLC法测定，同时一年进行至少一次生物测定*暂未修订4、增修订情况、增修订情况l高分子蛋白l有关物质l相关蛋白l含量测定：HPLCl金属离子：吸收光谱l细菌内毒素l异常毒性l微生物限度l过敏Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍（一）生长抑素（一）生长抑素BP09；EP60有收载；ChP和USP均未收载浙江省所参照各国药典，进口标准等进行起草。1、含量限度：同国外使用HPLC法，C18柱，进样

32、量少，等度洗脱。2、鉴别：TLC法，点样量改成10ul，Rf=0.25，展开剂改为冰醋酸。3、有关物质：无中间体、粗品，故进行强制降解试验，最低检测限为0.1ug4、氨基酸组成：经方法学改进采用二硫代二丙酸先与半胱氨酸结合再水解进行测定。5、醋酸：参照国内外合成肽有关方法，用HPLC法进行方法学研究。210nm检测，梯度洗脱，线性10-500ug/ml，回收率101.6%（n=3），检测限2.5ng，定量限7.6ng。6、细菌内毒素：方法学研究包括限值与热原对比，灵敏度、干扰试验、确证试验等。7、残留溶剂：进行了乙腈、甲醇、乙醚、三乙胺、二甲基甲酰胺进行测定Chp2010版生化药标准实例介绍版

33、生化药标准实例介绍（二）胰岛素（二）胰岛素ChP2010版依据USP33、EP6.0标准，参照2005版分别对来源、性状、鉴别、检查项下含量测定项、活性检查作了修订和补充，（该品种江苏所起草，检定所复核）1.肽图分析：经V8酶水解胰岛素、对其分子碎片中的肽图进行分析，该法能确定不同种属的胰岛素，该法专属性强。人胰岛素酶解-HPLC肽图猪胰岛素酶解-HPLC肽图Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍胰岛素胰岛素2.相关蛋白：参照USP32、EP6.0由SDS-PAGE改为分离度较好的HPLC法，梯度洗脱及系统适用性试验，使A21脱酰胺胰岛素0.5%，其它相关蛋白限值5.0%，而实

34、测样前者0.5%；后者3.94.0%。3.高分子蛋白：将一般柱色谱改为分子排阻色谱，色谱条件和系统实用性试验均与ChP2005重组人胰岛素标准一致。Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍胰岛素胰岛素 4.含量测定含量测定：用HPLC法代替生物测定法。ChP 2010版考虑到胰岛素生物活性的重要性，故除改用HPLC法外，原料在检查项中再加生物活性测定，参考USP32，动物数减半，生物统计简化，作限度实验，为常规测定用，该法既能省时、省力、省成本，又能有效控制质量。五、多糖、脂类五、多糖、脂类1、简介：糖类是自然界中一类重要的含碳化合物，主要生物学功能是在机体代谢中提供能源和碳源，

35、也是组织和细胞结构的主要组成成分。主要分类有单糖（简单的多羟基醛或酮）和聚糖（单糖缩合而成，20个单糖结构以下的为低聚糖，20个以上的为多糖。低聚糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；纯多糖：右旋糖酐、香菇多糖；杂多糖：肝素、硫酸软骨素、透明质酸）2、2010年版药典收载的糖及脂类品种年版药典收载的糖及脂类品种 硫酸软骨素片、胶囊 肝素钠、注射液、乳膏 右旋铁、片、注射液 右旋糖酐20、氯化钠注射液、葡萄糖注射液 右旋糖酐40、氯化钠注射液、葡萄糖注射液 右旋糖酐70、氯化钠注射液、葡萄糖注射液 前列地尔、注射用前列地尔 多烯酸乙酯、软胶囊3、收载的糖及脂类品种的主要特点、收载的糖及脂类品种的主要特点l采用

36、高科技、新方法，是质量显著提高（如肝素、硫酸软骨素等）l脂类，采用新的质控指标是多烯酸乙酯的质量与EP、JP等基本一致。4、增修订情况、增修订情况l金属离子：吸收光谱l有关物质：HPLCl比活l含量测定：HPLC、GCl比旋度l残留溶剂l甲氧基苯胺值l不皂化值l细菌内毒素Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍（一）肝素钠肝素钠 （中检所起草）比活比活：从原150u/mg提高到170u/mg(USP32180，BP2008为150，JP15为130)产品纯度提高比旋度：比旋度：从原+35到+50（因杂质严控，故该项提高）吸收度吸收度：260nm、280nm是核酸和蛋白质吸收峰，因

37、杂质严控，260nm 吸收度从原0.20到0.10，280nm吸收度从原0.15到0.10 说明杂质减少。Na+：用原子吸收光谱限度9.5-12.5%（同EP）有机残留有机残留：甲醇，乙醇，丙酮中国药典规定细菌内毒素细菌内毒素：原1单位0.015Eu到1单位0.01Eu 以上六项标准均有十分明显的提高Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍（一）肝素钠肝素钠 （中检所起草）有关物质有关物质：应用离子色谱HPLC，使杂质硫酸皮肤软骨素5.0%，多硫酸软骨素不得检出。该法USP,EP,BP,JP均没订。美国药典论坛可能要采用该法，因该法能十分清晰分析：肝素，硫酸皮肤素，多硫软骨素，可

38、代替昂贵核磁共振及毛细管电泳。ChP 2010的该项目超过国际水平，有十分重要的意义。Chp2010版生化药标准实例介绍版生化药标准实例介绍（二）硫酸软骨素（中检所起草）该品质量指标有显著性提高，从含量原来40%左右直提至90%（口服），直接与国际接轨。除标准中来源猪、红外、吸收度、细内、有机残留增修有提高外，主要含量测定：用专一性很强且灵敏的酶解法分离硫酸软骨素呈A、B、C。再用离子色谱柱法很好分离硫酸软骨素成B、C和A。使硫骨素含量为90%（固）、95%（固）、97%（注、眼）。该法的特点，抵能测猪软骨素（A/C有固定值），因国外来源很杂（牛、猪、禽、海洋动物），灵敏度优于USP 和EP的

39、电泳法、EP为滴定时，因无专属性使将其它多糖混杂于方法中，使硫酸软骨素含量偏高。2010版药典生化药完成情况总结版药典生化药完成情况总结1、标准和品种完成情况、标准和品种完成情况l标准完成标准完成191个规格，增加个规格，增加36个，增加率（与个，增加率（与chp2005年版比较）为年版比较）为22.6%l品种完成品种完成72个、增加个、增加12个新品种，增加率（与个新品种，增加率（与chp2005年版比较）为年版比较）为19.6%l删除标准共删除标准共5个个 2、附录和指导原则增订情况、附录和指导原则增订情况（1）蛋白质含量测定（提供六种可选择的方法，适应各有关品种的选择）（2）多肽醋酸含量

40、测法（为合成肽的检查项提供统一的方法）（3）电泳附录中等点聚焦法（电泳附录中增加先进技术及常用方法）（4）氨基酸分析中的衍生法（为考虑各有关单位习惯等）其中的（4）为指导原则中增订（1）蛋白质含量测定方法）蛋白质含量测定方法第一法：凯氏定氮法（提供了非蛋白氮供试品制备方法）。灵敏度较低，适用于0.2-2.0mg氮。换算系数因蛋白质所含氨基酸结构差异会稍有区别。第二法：福林酚法（Lowry法）。灵敏度高，测定范围通常可达20-250ug。干扰物质较多（还原物质、酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、甘露醇、糖类、甘油等）第三法：双缩脲法。快速、灵敏度低，测定范围为1-10mg。干扰物质有

41、硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸第四法：2,2-联喹啉-4,4-二羧酸法（BCA法）。灵敏度较高，测定范围80-400ug。样品中不能有还原剂和铜螯合物。第五法：考马斯亮蓝法（Bradford法）。灵敏度高，可测定1-200ug蛋白量。干扰物质有去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠等。样品缓冲液呈强碱性也会影响显色。第六法：紫外分光光度 法。干扰因素多，常用于纯化蛋白质的微量测定（2）合成多肽中的醋酸测定法）合成多肽中的醋酸测定法 采用液相色谱法测定合成多肽中的醋酸或醋酸盐的含量。C18柱、210nm检测、梯度洗脱。醋酸峰的保留时间约为3-4分钟。（3）增订了电泳法）增订了电泳法

42、 增订第六法等电聚焦水平板电泳法 用于检测蛋白类和肽类供试品的等电点。原理：原理：两性电解质在电泳场中形成一个pH梯度，由于蛋白质为两性化合物，所带电荷与介质的pH值有关，带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移，到达等电点（此处的pH值使相应的蛋白质不再带电荷）时，电流达到最小，不再移动。（4）氨基酸分析法）氨基酸分析法第一法：PITC柱前衍生氨基酸分析法第二法：AQC柱前衍生氨基酸分析法第三法：OPA和FMOC柱前衍生氨基酸分析法第四法：DNFB柱前衍生氨基酸分析法第五法：茚三酮柱后衍生氨基酸分析法3、质量标准水平状况、质量标准水平状况l紧跟国际水平，与国际USP、BP和EP同标准接轨，尽

43、可能就高不就低。lChp2010版药典生化药中氨基酸类、核酸类、多肽、蛋白、酶、辅酶和脂类品种其中大部分或绝大部分产品已赶上或有的项目已超过国外标准。4、标准方法和技术、标准方法和技术l应有高新技术使Chp2010版更专属、灵敏和准确。lChp2010版第一次用毛细管电泳分析样品、抑肽酶是用该法上药典的品种，能灵敏分出有关物及用三根串联TSL柱，准确分离出样品的高分子聚体杂质。l在2010版中用更专属、灵敏的酶解HPLC法有效地分离出产品的杂质或有关物质，为有效控制质量，保障产品安全做出积极贡献（如胰岛素、软骨素）；用高灵敏、特异性离子型HPLC分析鉴定产品中的不相关物，避免了国际纠纷（如肝素

44、钠中的多硫软骨素规定为不得检出）。5、安全指标控制、安全指标控制 Chp2010版生化药中凡是从动、植物或微生物发酵源的组织、细胞为原料的产品，大部分均有生物安全性检查，如无菌、细菌内毒素、异常毒性、过敏试验等，有的甚至要考虑降压物质检查；此外尚增加理化项目（如可见异物、微粒检查等）。原料中增加微生物限度有关物质、有机溶剂残留）；滴眼液增加渗透压、抑菌剂和抗氧化剂等检查。工艺上有的亦有明确规定，要加上制法工艺，有的人尿为原料甚至加上病毒灭活工艺和统一要求用酶免免疫法测HBSAg。6、药典标准与生产企业结合情况、药典标准与生产企业结合情况 Chp2010版生化药，有相当一部分与生产企业相结合，凡

45、结合好的，标准提高的快又好，因标准最有发言权的是企业，因他们对生产了解深、研究透。总之，中国药典2010版生化药整体水平较2005版无论其量，质，技术先进程度，安全保障，统一规范均有十分明显的提高，该工作的完成为我国药典水平和产品质量提高及保障人民安全用药做出了积极的贡献。存在问题存在问题l监督检查(按科研：质、量、时）l协调 （如，附录先行等）l优秀领头人才匮乏展望展望l原则：以高新技术为依托，积极培养优秀人才。全面赶超国际先进，努力开创新的未来。l措施：收集信息，挑选品种，科研先行，落实到位，反馈协调，监督检查，保质保量，按时完成。（生化药专委会已摸底、排队28品种，54个标准供药典会选择）谢谢大家!