CELL-基本培养方法.ppt

《CELL-基本培养方法.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CELL-基本培养方法.ppt（39页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、Your company sloganYour company slogan细细胞培胞培养养操作前及操作中操作前及操作中应应注意事注意事项项 无菌操作贯穿细胞培养的始终Your company sloganYour company slogan一、培养操作前注意一、培养操作前注意1.1.培养用物品的灭菌消毒（写出物品清单）。培养用物品的灭菌消毒（写出物品清单）。2.2.操作台消毒（各物品布局合理进行紫外线操作台消毒（各物品布局合理进行紫外线消毒消毒3030分钟）。分钟）。3.3.洗手和着装（原则上与外科手术相同）。洗手和着装（原则上与外科手术相同）。4.4.火焰消毒（酒精灯使用、金属器械、吸过

2、火焰消毒（酒精灯使用、金属器械、吸过培养液的吸管）。培养液的吸管）。Your company sloganYour company slogan二、培养操作中注意：二、培养操作中注意：动作准确敏捷有序；培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口；一个吸管只能吸一种液体；不能面向操作台讲话或咳嗽。Your company sloganYour company slogan基本的培养方法基本的培养方法v悬滴培养方法悬滴培养方法：Your company sloganYour company slogan悬滴培养用的凹载玻片 单位：mmYour company sloganYour com

3、pany slogan（一）（一）单单盖玻片培盖玻片培养养方法方法Your company sloganYour company slogan左图；凹载玻片支架右图：单盖玻片培养法操作图解 1、胚胎浸出液2、血浆3、心肌块 4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣压7热溶石蜡密封 a为正确操作 b错误操作Your company sloganYour company sloganv8 8、将密封好的凹玻片放到凹玻片、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养支架上，放到培养箱内培养v9 9、培养、培养7-87-8个小时，组织块向外生个小时，组织块向外生长，培养长，培养2424小时在组织块外周形

4、成小时在组织块外周形成生长晕（一圈薄而透明的细胞圈），生长晕（一圈薄而透明的细胞圈），4848小时候生长减慢甚至停止。需要小时候生长减慢甚至停止。需要重新加入鸡胚浸出液。重新加入鸡胚浸出液。Your company sloganYour company slogan盖玻片法再培养 1、2、眼科刀切除生长晕 3 方型培养物切为两到四片 4、5培养物漂洗 6、7、再培养Your company sloganYour company sloganv（二）双盖玻片悬滴培养法（二）双盖玻片悬滴培养法Your company sloganYour company slogan 双盖玻片图解：1、载体盖玻片

5、 2、带培养物盖玻片 Your company sloganYour company sloganv与单盖玻片不同之处：与单盖玻片不同之处：1 1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面。带有组织块的另一面。2 2、再培养时：直接取下带培养物的、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片,可减少污染。可减少污染。Your company sloganYour company sloganv二、培二、培养瓶养瓶培培养养方法方法v2020世纪世纪5050年代年代CarrelCarrel设计了卡氏瓶设计了卡氏瓶v

6、EarleEarle设计了设计了T-T-培养瓶培养瓶Your company sloganYour company sloganv用血浆固定组织块的培养方法用血浆固定组织块的培养方法Your company sloganYour company slogan 图:卡氏瓶培养组织块 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略烧瓶口 3.取少量血浆加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接种组织块 7.上盖 8.消毒 9加入培养液 10.通气Your company sloganYour company sloganv用透明纸固定组织块的培养方法用透明纸固定组织块的培养方法Your company sloganYo

7、ur company slogan图:内放有孔透明纸的培养瓶培养 a.一个T培养瓶内放有有孔透明纸b.卡氏瓶接种后图解 1.有孔透明纸 2.组织块 3.培养液Your company sloganYour company sloganv旋转管培养法：旋转管培养法：v与前两种培养方法不同之处：与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细和空气直接接触，有利于细胞的生长。胞的生长。Your company sloganYour company slogan旋转管培养方法用具 a.简易旋转鼓，可放入培养箱内 b.带旋转鼓装置的培养箱 c.培养用的

8、旋转管 1.示血浆的高度 2.示接种组织间间距 3.示加培养液 4.示可放旋转鼓内培养 d.放旋转管的支架.(1.接种组织块时用 2.观察时用)Your company sloganYour company sloganv四四.灌注小室培养法灌注小室培养法优点优点v1.连续观察活细胞的动态变化连续观察活细胞的动态变化v2.研究理化性质对培养细胞的研究理化性质对培养细胞的影响和作用影响和作用v3.活细胞的反应活细胞的反应.Your company sloganYour company slogan不锈钢培养小室图 A 中央切面图 B侧面图(mm)Your company sloganYour c

9、ompany slogan灌注小室及灌注系统示意图 A.排液瓶 B.受液瓶 C.不锈钢灌注小室 D.扁锥型小孔道 E、F、J.2号注射针头 G、H.塑料导管 I玻璃导管 K、L.14号注射针头(塞以棉花)Your company sloganYour company sloganv五五.培养板培养方法培养板培养方法Your company sloganYour company sloganYour company sloganYour company slogan培养过程：培养过程：v1 1、取材并制备拟用于培养的细胞悬液、取材并制备拟用于培养的细胞悬液、取材并制备拟用于培养的细胞悬液、取材并

10、制备拟用于培养的细胞悬液v2 2、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内v3 3、给培养板各孔补加足够的培养液、给培养板各孔补加足够的培养液、给培养板各孔补加足够的培养液、给培养板各孔补加足够的培养液v4 4、加盖，放入、加盖，放入、加盖，放入、加盖，放入CO2CO2培养箱中培养。（贴壁能力培养箱中培养。（贴壁能力培养箱中培养。（贴壁

11、能力培养箱中培养。（贴壁能力弱的细胞在接种后放置于弱的细胞在接种后放置于弱的细胞在接种后放置于弱的细胞在接种后放置于CO2 CO2 培养箱中培养培养箱中培养培养箱中培养培养箱中培养3-53-5小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养）继续培养）继续培养）继续培养）v5 5、每隔、每隔、每隔、每隔2-32-3天换液，换液时先将旧的培养液吸出，天换液，换液时先将旧的培养液吸出，天换液，换液时先将旧的培养液吸出，天换液，换液时先将旧的培养液吸出，加入平衡盐溶液洗涤，

12、吸出平衡盐溶液，再加入加入平衡盐溶液洗涤，吸出平衡盐溶液，再加入加入平衡盐溶液洗涤，吸出平衡盐溶液，再加入加入平衡盐溶液洗涤，吸出平衡盐溶液，再加入新的培养液。盖上盖子继续培养。新的培养液。盖上盖子继续培养。新的培养液。盖上盖子继续培养。新的培养液。盖上盖子继续培养。Your company sloganYour company sloganv六、转瓶培养六、转瓶培养Your company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganY

13、our company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganv生物观测台生物观测台Your company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company sloganYour company slogan