选修1---章末归纳整合.ppt

《选修1---章末归纳整合.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《选修1---章末归纳整合.ppt（15页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、1统计微生物数目的方法统计微生物数目的方法(1)显微镜直接计数法显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。定容积的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上

2、的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。推测出样品中大约含有多少个活菌。方法：平板划方法：平板划线线法、稀法、稀释释混合平板法、稀混合平板法、稀释释涂布平板法。涂布平板法。缺点：当两个或多个缺点：当两个或多个细细胞胞连连在一起在一起时时，平板上，平板上观观察到的是一个菌察到的是一个菌落。落。注意事注意事项项：a.设设置重复置重复组组，增，增强强实验实验的的说说服力与准确性。服力与准确性。b.为为了了保保证结证结果准确，一般果准确，一般选择选择菌落数在菌落数在30300的平板的平板进进行行计计数。数。计计算公式：每克算公式：每克样样品中的菌株数品中的菌株数C/VM，其中，其中C代表某一稀代

3、表某一稀释释度下平板上生度下平板上生长长的平均菌落数，的平均菌落数，V代表涂布平板代表涂布平板时时所用的稀所用的稀释释液的液的体体积积(mL)，M代表稀代表稀释释倍数。倍数。1自然界中的微生物往往是混自然界中的微生物往往是混杂杂生生长长的。人的。人们们在研究微生物在研究微生物时时一一般要将它般要将它们们分离提分离提纯纯，然后，然后进进行数量的行数量的测测定。下面是定。下面是对对大大肠肠杆菌杆菌进进行行数量数量测测定的定的实验实验，请请回答有关回答有关问题问题。步。步骤骤如下：如下：(1)制制备备稀稀释释倍数倍数为为102、103、104、105、106的系列稀的系列稀释释液。液。(2)为为了得

4、到更加准确的了得到更加准确的结结果，你果，你选选用用_(平板划平板划线线法、稀法、稀释释混合平板法、稀混合平板法、稀释释涂布平板法涂布平板法)接种接种样样品。品。(3)适宜温度下培养。适宜温度下培养。结结果分析：果分析：测测定定大大肠肠杆杆菌菌数数时时，在在对对应应稀稀释释倍倍数数为为106的的培培养养基基中中，得得到到以以下几种下几种统计结统计结果，正确可信的是果，正确可信的是()A一个平板，一个平板，统计统计的菌落数是的菌落数是23B两个平板，两个平板，统计统计的菌落数是的菌落数是22和和26，取平均，取平均值值24C三个平板，三个平板，统计统计的菌落数分的菌落数分别别是是21、5和和52

5、，取平均，取平均值值26D四个平板，四个平板，统计统计的菌落数分的菌落数分别别是是21、30、24和和25，取平均，取平均值值25 一同学在稀一同学在稀释释倍数倍数为为106的培养基中的培养基中测测得平板上菌落数的平均得平板上菌落数的平均值为值为23.4，那么每毫升，那么每毫升样样品中的大品中的大肠肠杆菌数是杆菌数是(涂布平板涂布平板时时所用稀所用稀释释液的体液的体积为积为0.2 mL)_。用用这这种方法种方法测测定密度，定密度，实际实际活菌数量要比活菌数量要比测测得的数量得的数量_，因，因为为_。某同学在某同学在测测定大定大肠肠杆菌的密度杆菌的密度时发现时发现，在培养基上，在培养基上还还有其

6、他有其他杂杂菌的菌菌的菌落，能否据此肯定落，能否据此肯定该该大大肠肠杆菌的品系被杆菌的品系被污污染了？染了？为为什么？什么？_。解析：解析：平板划线分离法是指由接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，平板划线分离法是指由接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，经培养后，可细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，经培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释倒平板法又分为稀释涂布平板法和稀释混合在平板表面得到单菌落。稀

7、释倒平板法又分为稀释涂布平板法和稀释混合平板法。稀释涂布平板法就是将稀释后的菌液分别涂布在固体培养基的表平板法。稀释涂布平板法就是将稀释后的菌液分别涂布在固体培养基的表面进行培养；稀释混合平板法就是将不同浓度的稀释液与已溶化并冷却至面进行培养；稀释混合平板法就是将不同浓度的稀释液与已溶化并冷却至45 左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间后即可出现菌落。凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间后即可出现菌落。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单

8、个细在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。随后挑取该单个菌落，或胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。由于大肠杆菌属于兼性厌氧重复以上操作数次，便可得到纯培养。由于大肠杆菌属于兼性厌氧菌，为了得到更加准确的结果，最好选用稀释混合平板法。统计菌菌，为了得到更加准确的结果，最好选用稀释混合平板法。统计菌落数计算的平板越多，其平均值越接近实际值。但是落数计算的平板越多，其平均值越接近实际值。但是C选项中出现选项中出现一个菌落数只有一个菌落数只有5的结果，不可信，因此答案选的结果，不可信，因此

9、答案选D。计算公式：。计算公式：每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数C/VM，其中，其中C代表某一稀释度下平板上生代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，长的平均菌落数，V代表稀释平板时所用的稀释液的体积代表稀释平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数代表稀释倍数。用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量多，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个量多，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落。在培养基上还有其他杂菌的菌落，其原因可能有多种，一是菌落。在培养基上还有其他杂菌的菌落，其原因可能有多种，一是大肠

10、杆菌被污染了，二是培养基被污染了，三是培养过程中被污染大肠杆菌被污染了，二是培养基被污染了，三是培养过程中被污染了。了。答案：答案：(2)稀释混合平板法稀释混合平板法(3)结果分析：结果分析：D1.17108多当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落多当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落不能，因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程不能，因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程2影响果胶酶活性的实验设计技巧影响果胶酶活性的实验设计技巧在设计实验检验影响果胶酶活性的因素时，要注意以下几点：在设计实验检验影响果胶酶活性的因素时，要注意以下几点：(1)无论是研究温度，还是

11、研究无论是研究温度，还是研究pH对酶活性的影响时，注意设对酶活性的影响时，注意设置合适的梯度。置合适的梯度。(2)实验时，要保证酶促反应在恒温或恒定酸碱度的条件下进实验时，要保证酶促反应在恒温或恒定酸碱度的条件下进行，否则，会影响实验结果。行，否则，会影响实验结果。(3)必须设计对照实验，这就要求在实验中，所用一切试剂，必须设计对照实验，这就要求在实验中，所用一切试剂，包括蒸馏水，都要做到量的一致性，保证唯一变量，尽量避免干包括蒸馏水，都要做到量的一致性，保证唯一变量，尽量避免干扰因素。扰因素。(4)梯度实验，是无法得到酶的最适温度或最适酸碱度的，只梯度实验，是无法得到酶的最适温度或最适酸碱度

12、的，只能得到一个大致的适宜范围。能得到一个大致的适宜范围。3归纳外植体污染的原因归纳外植体污染的原因植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。(1)培养材料的取材应很好地加以选择，老的材料比幼嫩的材

13、料带培养材料的取材应很好地加以选择，老的材料比幼嫩的材料带菌多，田间比温室生长材料带菌多。菌多，田间比温室生长材料带菌多。(2)消毒材料不彻底，植物组织只能进行表面灭菌，对材料内部所消毒材料不彻底，植物组织只能进行表面灭菌，对材料内部所带的细菌、霉菌等杂菌往往难以对付，可在培养基中添加抗生素解带的细菌、霉菌等杂菌往往难以对付，可在培养基中添加抗生素解决。决。(3)人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排出细菌；手接触材料或人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排出细菌；手接触材料或器皿边缘，使用过的工作器具未消毒而再继续使用，造成交叉污染；器皿边缘，使用过的工作器具未消毒而再继续使用，造成交叉污染；接种室

14、空气污染，使真菌孢子在培养基上繁殖。接种室空气污染，使真菌孢子在培养基上繁殖。2(2011年广州测试年广州测试)下下图图是月季花是月季花药药离体培养离体培养产产生花粉植株的两种生花粉植株的两种途径，途径，请请据据图图回答有关回答有关问题问题：(1)选选用的材料合适与否是能否成功用的材料合适与否是能否成功诱导诱导出花粉植株的重要因素，一出花粉植株的重要因素，一般来般来说选说选用用_期的花粉可提高成功率。期的花粉可提高成功率。选择选择花粉花粉时时，一般要通，一般要通过过_来确定花粉是否来确定花粉是否处处于合适的于合适的发发育期，育期，这时这时需要需要对对花粉的花粉的细细胞核胞核进进行染色，常用的染

15、色行染色，常用的染色剂剂是是_。(2)上上图图中花中花药经药经脱分化脱分化产产生胚状体生胚状体还还是愈是愈伤组织伤组织主要取决于培养基主要取决于培养基中中_。(3)胚状体与愈胚状体与愈伤组织伤组织在在结结构上的主要区构上的主要区别别在于愈在于愈伤组织伤组织的的细细胞排列胞排列疏松无疏松无规则规则，是一种高度，是一种高度_的薄壁的薄壁细细胞，胚状体与胞，胚状体与_发发育形成的胚有育形成的胚有类类似的似的结结构，即具有胚芽、胚构，即具有胚芽、胚轴轴和胚根。和胚根。(4)无菌技无菌技术术也是成功也是成功诱导诱导出花粉植株的重要因素，出花粉植株的重要因素，请说请说明下列各明下列各项项需要消需要消毒，毒

16、，还还是需要是需要灭灭菌。菌。培养基，培养基，培养皿，培养皿，接种接种环环，花蕾，花蕾，实验实验操操作者的双手，作者的双手，三角三角锥锥形瓶。形瓶。_(填填编编号号)需要需要灭灭菌，菌，_(填填编编号号)需要消毒。需要消毒。(5)试试管苗移栽到土壤前，通常要管苗移栽到土壤前，通常要进进行壮苗行壮苗处处理，理，应应如何壮苗？如何壮苗？_。解析：解析：(1)单核期花粉对离体刺激敏感，选用该期花粉可提高培养的成功单核期花粉对离体刺激敏感，选用该期花粉可提高培养的成功率；选择花粉时可用显微镜观察、筛选；对花粉细胞核染色应选择碱性染料，率；选择花粉时可用显微镜观察、筛选；对花粉细胞核染色应选择碱性染料，

17、常用醋酸洋红。常用醋酸洋红。(2)细胞培养成植株的两条途径取决于植物激素的种类及比细胞培养成植株的两条途径取决于植物激素的种类及比例，尤其是生长素和细胞分裂素。例，尤其是生长素和细胞分裂素。(3)愈伤组织细胞的特点为细胞排列疏松愈伤组织细胞的特点为细胞排列疏松无规则、高度液泡化；胚状体是具有与胚相似的根或芽的结构。无规则、高度液泡化；胚状体是具有与胚相似的根或芽的结构。(4)灭菌对灭菌对象为培养基和实验器材，消毒对象为要保持活性的材料和实验者自身。象为培养基和实验器材，消毒对象为要保持活性的材料和实验者自身。(5)壮苗即使试管苗逐步适应外界环境的做法。壮苗即使试管苗逐步适应外界环境的做法。答案：答案：(1)单单核核镜检镜检(显显微微镜观镜观察察)醋酸洋醋酸洋红红(2)激素的种激素的种类类及其及其浓浓度度配比配比(3)液泡化正常受精卵液泡化正常受精卵(或受精卵或受精卵)(4)(5)将将试试管管苗移栽到苗移栽到经经消毒消毒过过的培养基中生活一段的培养基中生活一段时间时间，等幼苗，等幼苗长长壮后再移栽到土壤中壮后再移栽到土壤中本小节结束请按ESC键返回