实验二_微生物纯培养.ppt

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1、实验二实验二 微生物的纯培养微生物的纯培养一一.实验目的实验目的1.1.掌握常用的分离纯化微生物的基本操作技术：掌握常用的分离纯化微生物的基本操作技术：n连续划平板法及分区划平板法；连续划平板法及分区划平板法；n掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物无菌操作技术；2.2.熟悉各种微生物在固体斜面、半固体和液体培养基熟悉各种微生物在固体斜面、半固体和液体培养基上的生长特征。上的生长特征。二二.实验原理实验原理n1.1.微生物在自然界中无处不在。但自然界中的微生微生物在自然界中无处不在。但自然界中的微生物都以混杂状态存在。要研究某种微生物的性质，物都以混杂状态存在。要研究某种微生物的性质，首先要获得这

2、种微生物的纯培养物。微生物纯化培首先要获得这种微生物的纯培养物。微生物纯化培养的方法有：显微操作单细胞挑取法、稀释涂平板养的方法有：显微操作单细胞挑取法、稀释涂平板法、稀释混合平板法和平板划线法四种。现在又发法、稀释混合平板法和平板划线法四种。现在又发展了基于其展了基于其DNADNA和蛋白质的分子生物学分离和鉴定方和蛋白质的分子生物学分离和鉴定方法用于分离鉴定难以或不能培养的微生物。而厌氧法用于分离鉴定难以或不能培养的微生物。而厌氧微生物的纯化由于其厌氧或低氧化还原电位，要求微生物的纯化由于其厌氧或低氧化还原电位，要求使用特殊的分离方法。使用特殊的分离方法。n2.2.微生物在固体斜面、半固体和

3、液体培养基上，不微生物在固体斜面、半固体和液体培养基上，不同的微生物有其固有的培养特征。这些培养特征可同的微生物有其固有的培养特征。这些培养特征可以作为微生物分类鉴定的指标，也可作为检测纯培以作为微生物分类鉴定的指标，也可作为检测纯培养物是否被污染的指标。养物是否被污染的指标。三、实验操作三、实验操作（每组接种四种菌（大肠杆菌，变形杆菌，葡萄球菌，枯草杆菌）每组接种四种菌（大肠杆菌，变形杆菌，葡萄球菌，枯草杆菌）四个同学分别接种四个同学分别接种1种菌至四种培养基，写清楚菌种名，姓名，日期）种菌至四种培养基，写清楚菌种名，姓名，日期）（一）纯培养（一）纯培养n1.1.将菌悬液于肉膏蛋白胨平板上将

4、菌悬液于肉膏蛋白胨平板上划线分离划线分离。n2.372.37倒置培养，倒置培养，24h24h后观察结果。后观察结果。平板划线分离操作法示意图平板划线分离操作法示意图平板划线菌落分离效果图平板划线菌落分离效果图（二）其他接种方法（二）其他接种方法n将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基上，这个过程就称为接种。上，这个过程就称为接种。常用的几种方法如下：常用的几种方法如下：1.1.在液体培养基上接种；在液体培养基上接种；2.2.在固体斜面培养基上接种；在固体斜面培养基上接种；3.3.在半固体培养基上接种；在半固体培养基上接种；于于3737下培养

5、下培养24h24h后观察各种菌株在不同的培养基上的培后观察各种菌株在不同的培养基上的培养特征，比较它们培养特征之间的差异。养特征，比较它们培养特征之间的差异。1.1.斜面接种：斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微生物的接种。法。此法用于好气性微生物的接种。左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时

6、将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。2.2.穿刺接种：穿刺接种：用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力等。气性细菌接种、检查细菌的运动能力等。3.3.液体接种：液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。中的方法。操

7、作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。管接种。实验结果观察实验结果观察（每组四个同学一起对比观察）（每组四个同学一起对比观察）1 1、平板划线分离结果观察、平板划线分离结果观察是否得到较多的单菌落；是否得到较多的单菌落；四种菌比较观察：单菌落的大小、形态、

8、颜色、湿四种菌比较观察：单菌落的大小、形态、颜色、湿润度、是否凸起等。润度、是否凸起等。2 2、斜面培养结果观察、斜面培养结果观察观察斜面上的生长线观察斜面上的生长线（明天上午第四节课）（明天上午第四节课）3 3、液体培养结果观察、液体培养结果观察 四种菌比较观察：晃动前，在液体培养基中的生长情四种菌比较观察：晃动前，在液体培养基中的生长情况（液体是否混浊、清亮、液面是否有菌膜）记录好况（液体是否混浊、清亮、液面是否有菌膜）记录好后，晃动培养液，再观察有什么变化。后，晃动培养液，再观察有什么变化。4 4、半固体培养结果观察、半固体培养结果观察 四种菌比较观察：穿刺线是否清楚？培养基的透明度，四种菌比较观察：穿刺线是否清楚？培养基的透明度，培养基表面是否铺满菌苔。培养基表面是否铺满菌苔。思考题思考题1 1、接种时，为何要尽量使试管平放？、接种时，为何要尽量使试管平放？2 2、你所做划线法是否较好地得到了单菌落你所做划线法是否较好地得到了单菌落?如果不是如果不是,请分析其原因。请分析其原因。3 3、在恒温培养箱中培养微生物时为何培养皿需倒置、在恒温培养箱中培养微生物时为何培养皿需倒置?