马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究.docx

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1、马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究陈丽花,李志军,王定勇 【内容摘要】 目的 研究马鞭草( verbena officinalis l.)抗乙肝有效部位的化学成分。方法 采取柱层析和薄层层析分离马鞭草有效部位中的化学成分;用ir、esims、1hnmr、13cnmr等波谱技术鉴定构造。结果 分离并鉴定了6个化合物，分别为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)。结论 初次报道马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分;化合物3、6为初次从该植物中分离得到。 【本文关键词语】 马鞭草 杨梅素 抗乙肝作用 abstract:objective to study the

2、 chemical constituents in the antihbv active fraction of verbena officinalis. methods the constituents were separated and purified by column chromatography and thin layer chromatography,and their structures were elucidated by ir,ms,1hnmr and 13cnmr. results six compounds were isolated from the effec

3、tive fraction of verbena officinalis: kaempferol (1),quercetin (2),myricetin (3),ursolic acid (4),verbenalin (5) and myricetrin (6). conclusions chemical constituents in the antihbv active fraction of verbena officinalis were first reported. compounds 3 and 6 were obtained from this plant for the fi

4、rst time. key words:verbena officinalis; chemical constituents; myricetin; antihepatitis b virus 马鞭草(verbena officinalis l.)为马鞭草科(verbenaceae)多年生草本植物，始载于名医别录，民间以其全草或带根全草入药。马鞭草作为传统中药，具有清热解毒、消肿利尿、活血通经等成效，广泛用于治疗伤风感冒、水肿、痢疾、黄疸等证1。现代研究表示清楚，马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(hbv)和hbsag，并能抗乙肝纤维化2-3。利用酶联免疫吸附检测(elisa)技术4，作者挑选到马鞭草抗

5、乙肝活性的有效部位。为说明其药效物质基础，本文对该有效部位进行系统的化学成分研究，从中分离得到6个化合物，分别鉴定为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)，其中化合物3和6为初次从该植物中分离得到。 1 仪器与材料 熔点用xrc1显微熔点仪(四川大学科仪厂制作)测定,温度计未校正;红外光谱用 nicolet protg460 光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用bruker am500 型核磁共振仪测定,tms为内标;esims 在 hp1100 lc/ ms上测定。柱色谱用硅胶(200300目)、薄层色谱用硅胶(1040 m)均为青岛海洋化工厂生产

6、，sephadex lh20为美国ge公司产品，ods为日本ymc产品。马鞭草于2008年8月采自广东省广州市，由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(verbena officinalis l.)。 2 提取与分离 取阴干的马鞭草10 kg，粉碎至约60目，用适量甲醇室温浸泡3次,每次7 d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280 g。取该提取物250 g分散于适量热水中再转移至2 500 ml分液漏斗,依次用石油醚、chcl3萃取3次(每次用1 000 ml溶剂)，除掉极性小的化学成分,再用etoac萃取3次(每次用1 000 ml),减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸

7、乙酯萃取物35 g。elisa法检测结果表示清楚乙酸乙酯萃取物为马鞭草抗乙肝活性有效部位4。有效部位经硅胶柱层析(200300目)，三氯甲烷甲醇系统(体积比20101) 梯度洗脱。tlc检测，合并一样组分，共得到7个部分;各部分再经sephadex lh20柱层析洗脱剂为甲醇水(体积比32)、ods柱层析洗脱剂为乙腈水(体积比11)、制备薄层层析(展开剂为氯仿甲醇体系)等反复分离纯化，得到化合物1(20 mg)、2 (38 mg)、3 (15 mg)、4 (30 mg)、5 (55 mg)和6 (10 mg)。 3 构造鉴定 化合物1：黄色粉末，mp 275.0276.5 。hclmg试验显阳

8、性。esims(m/z): 287.0 m+h+。1hnmr(500 mhz,dmsod6) : 12.18 (1h,s,5oh),8.15 (2h,d,j=8.5 hz,h2,6),7.02 (2h,d,j=8.5 hz,h3,5),6.55 (1h,d,j=2.0 hz,h8),6.27 (1h,j=2.0 hz,h6)。13cnmr (125 mhz,dmsod6 ) : 146.9 (c2),133.5 (c3),176.5 (c4),162.2 (c5),99.0 (c6),164.9 (c7),94.3 (c8),157.6 (c9),103.9 (c10),123.1 (c1),

9、130.3 (c2,6),116.2 (c3,5),160.1 (c4)。以上波谱数据与文献5报道的山柰酚一致。 化合物2：黄色粉末，mp 303.0304.5 。hclmg试验显阳性。esims(m/z): 325.0 m+na+。1hnmr (500 mhz,dmsod6) : 12.20 (1h,s,5oh),7.80 (1h,d,j=1.8 hz,h2),7.68 (1h,dd,j=8.6,1.8 hz,h6),6.98 (1h,d,j=8.6 hz,h5),6.51 (1h,j=2.0 hz,h8),6.26 (1h,j=2.0 hz,h6)。13cnmr (125 mhz,dmso

10、d6 ) : 146.8 (c2),136.5 (c3),176.6 (c4),157.5 (c5),99.1 (c6),164.8 (c7),94.3 (c8),162.6 (c9),104.0 (c10),123.6 (c1),115.6 (c2),145.7 (c3),148.1 (c4),116.0 (c5),121.3 (c6)。以上波谱数据与文献5报道的槲皮素一致。 化合物3：棕黄色针晶(meoh),mp 324.0325.5 。hclmg试验显阳性。esims(m/z): 319.3 m+h+。 ir (kbr) max/cm-1: 3 350, 3 028,1 660,1 60

11、9,1 544, 1 447,1 316,1 245, 1 200, 1 163,1 113,1 095,1 026,939。1hnmr (500 mhz,dmsod6) : 12.50 (1h,s,5oh),7.25 (2h,s,h2,6),6.37 (1h,d,j=2.0 hz,h6),6.17 (1h,j=2.0 hz,h6)。13cnmr (125 mhz,dmsod6 ) : 147.3 (c2),136.5 (c3),176.2 (c4),161.2 (c5),98.6 (c6),164.8 (c7),93.8 (c8),156.6 (c9),103.4 (c10),121.2 (

12、c1),107.7 (c2,6),146.2 (c3,5),136.5 (c4)。以上波谱数据与文献6报道的杨梅素一致。 化合物4：白色针状晶体(etoac)，mp 285.6287.0 ，硫酸香兰醛显紫色。esims(m/z): 455.2 mh-。1hnmr (500 mhz,cdcl3) : 5.13 (1h,t,j=3.6 hz,12h),3.75 (1h,dd,j=10.4,4.6 hz,3h),0.68 (3h,s),0.75 (3h,s,me),0.87 (3h,s,me),0.89 (3h,s,me),1.05 (3h,s,me),0.80 (3h,d,j=6.5 hz,me)

13、,0.92 (3h,d,j=6.3 hz,me)。13cnmr (125 mhz,chcl3) : 38.3 (c1),26.9 (c2),76.8 (c3),38.7 (c4),54.8 (c5),18.0 (c6),32.7 (c7),39.0 (c8),40.1 (c9),36.5 (c10),22.8 (c11),124.5 (c12),138.1 (c13),41.6 (c14),27.5 (c15),23.8 (c16),46.8 (c17),52.3 (c18),38.5 (c19),38.4 (c20),30.2 (c21),36.3 (c22),28.2 (c23),15.2

14、 (c24),16.0 (c25),16.8 (c26),23.2 (c27),178.1 (c28),16.9 (c29),21.0 (c30)。以上波谱数据与文献7报道的熊果酸一致。 化合物5：无色针状晶体(meoh)，mp 181.5183.0 。esims(m/z): 389.1 m+h+。1hnmr (500 mhz,cd3od) : 1.22 (3h,d,j=6.7 hz,h10),2.01 (1h,dd,j=4.0,18.3 hz,h7),2.21 (1h,m,h9),2.48 (1h,m,h8),2.54 (1h,dd,j=8.0,18.3 hz,h7),3.62 (1h,dd

15、,j=5.6,12.0 hz,h5),5.22 (1h,d,j=7.2 hz,h1),7,45 (1h,s,h3),3.58 (3h,s,11och3),4.64 (1h,d,j=7.8 hz,h1),3.23 (1h,dd,j=9.0,7.8 hz,h2),3.36 (1h,t,h3),3.28 (1h,m,h4),3.27 (1h,m,h5),3.84 (1h,dd,j=11.4,0.6 hz,h6a),3.63 (1h,dd,j=11.4,5.4 hz,h6b)。13cnmr (125 mhz,cd3od) : 97.5 (c1),153.8 (c3),105.4 (c4),43.5 (

16、c5),215.8 (c6),43.7 (c7),29.8 (c8),45.5 (c9),20.6 (c10),169.1 (c11),51.9 (11och3),100.5 (c1),74.8 (c2),77.9 (c3),71.5 (c4),78.5 (c5),62.7 (c6)。以上波谱数据与文献8报道的马鞭草苷一致。 化合物6：黄白色片状结晶(meoh),mp 182.5184.0 。hclmg试验和molish试验均显阳性。esims(m/z): 465.3 m+h+。ir (kbr) max/cm-1: 3 401, 2 928, 1 655, 1 606, 1 458, 1 34

17、5, 1 290,1 201,1 165,1 075,1 040,969,917。1hnmr (500 mhz,dmsod6) : 12.68 (1h,s,5oh),6.88 (2h,s,h2,6),6.36 (1h,d,j=2.1 hz,h6),6.20 (1h,j=2.1 hz,h6),5.21 (1h,brs,h1),3.76 (1h,brs,h2),3.56 (1h,dd,j=9.4,2.9 hz,h3),3.16 (1h,t,j=9.5 hz,h4),3.98 (1h,brs,h5), 0.85 (3h,d,j=6.1 hz,h6)。 13cnmr (125 mhz,dmsod6)

18、: 156.8 (c2),134.5 (c3),178.2 (c4),161.9 (c5),99.1 (c6),164.7 (c7),94.0 (c8),158.0 (c9),104.4 (c10),121.1 (c1),108.2 (c2,6),146.2 (c3,5),136.8 (c4),102.5 (c1),70.8 (c2),71.1 (c3),71.7 (c4),70.5 (c5),18.0 (c6)。以上波谱数据与文献6报道的杨梅苷一致。 【以下为参考文献】 1 江苏新医学院.中药大辞典(上册)m.上海:上海科学技术出版社,2000:303-305. 2 钟有添.药治疗乙型肝炎研

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