确定NTS内参与心脏伤害性感受的谷氨酸受体亚型,人体生理学论文.docx

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1、确定NTS内参与心脏伤害性感受的谷氨酸受体亚型,人体生理学论文位于延髓的孤束核 ，在心血管、呼吸以及胃肠道的初级感觉信息的整合和传递中扮演重要的角色。心脏伤害性感受信息主要由伴随心交感神经和心迷走神经的传入纤维传递，经不同的传入通路上传到中枢引起相应的反响。解剖学研究表示清楚： 既是心迷走神经传入的中枢投射部位，同时也是心交感神经的中转部位。在伤害性信息的传递中扮演不同的角色，既有抑制作用也有易化作用，但对心脏伤害性感觉信息的作用到当前为止尚不清楚。 谷氨酸是内主要的兴奋性神经递质，谷氨酸受体分为大类：一类为离子型受体，包括甲基天 冬 氨 酸 ，型、 氨 基羟 基甲 基恶 唑丙 酸 ，型和海人

2、藻酸 ，型，后种也统称为非受体，其与离子通道偶联，构成受体通道复合物，介导快信号或快突触传递；另一类为促代谢型谷氨酸受体 ，其与膜内的蛋白偶联，被激活后通过蛋白效应器酶、胞内第二信使等组成的信号转导系统起作用，产生包括慢突触传递等较缓慢的生理反响。 受 体 和介入痛觉过敏， 但内谷氨酸及其受体亚型在心脏伤害感受中的作用尚不清楚。辣椒素是伤害性感受神经元的选择性激活物质，能够选择性地作用于有伤害性感受作用的和 神经纤维末梢。研究表示清楚：心脏外表给予辣椒素能够激活伴随迷走和交感神经的传入纤维，心包内注射辣椒素能够诱发心脏躯体运动反射 ，背斜方肌肌电，活动明显加强。本研究利用心包内注射辣椒素诱发的

3、为心脏伤害性感受指标，于内分别微量注射谷氨酸及各受体亚型拮抗剂观察其对的影响，确定内介入心脏伤害性感受的谷氨酸受体亚型，旨在为内介入心脏伤害性感受信息调控的神经递质和受体提供新的证据。 材料与方式方法 主要试剂和仪器 辣椒素溶于吐温和无水乙醇按比 例 混 合溶 液 中，配 制 成 的储存液，实验时用生理盐水稀释到所需浓度 。鹅膏蕈氨酸 ，、谷氨酸、受体拮抗剂 ，、非受 体 拮抗 剂，二 硝 基 喹 喔 啉，二 酮 ，均 用 生 理盐水溶解。 拮抗剂 甲基，羧基苯丙氨酸 ，先用 溶解后，再用生理盐水稀释，所有药物最终的值调整为，所用药物均购自美国公司。 生物信号采集与分析系统成都泰盟生物科技有限

4、公司，压力换能器成都泰盟生物科技有限公司，蠕动泵，保定兰格恒流泵有限责任公司，小动物呼吸机型，淮北正华生物仪器设备有 限公司，大鼠脑立 体 定 位 仪 日 本公司，生物显微镜，日本公 司 ， 微 量 注 射 器，。 实验动物、动物分组及处理方式方法 健康雄性大鼠只，体质量，将其随机分为组、 谷 氨 酸 组、组、组、联合组和组；各组大鼠孤束核内分别微量注射 ，、 谷 氨 酸 ，受体拮抗剂和 ，代谢型谷氨酸受体拮抗剂和 ， 联合 ，非受体拮抗剂和 。 大鼠心包插管术和 内微量注射手术大鼠称质量后以初始剂量的戊巴比妥钠 静脉滴注麻醉。取俯卧位，暴露左侧背斜方肌，以记录背斜方肌。再取仰卧位，行气管插管

5、术，右侧颈动脉插管监测动脉血压，左侧颈静脉插管以便在整个实验经过中维持戊巴比妥钠的麻醉 。以动脉血压和瞳孔直径监测实验动物麻醉深度。心包插管术：左侧上胸部第到第肋软骨处行开胸术，暴露胸腺。中线处分离胸腺，暴露心包膜。玻璃分针尖端直径在心包膜上扎开个小孔，将一长远端有数个小洞的硅胶管内径、外径 经 此 孔 插 入 心 包 约，缝合胸腺和各层胸壁组织，以固定心包插管。 内微量注射：将大鼠固定于脑立体定位仪上，剪开枕骨处头皮，钝性分离附着于枕骨处的肌肉，暴露枕骨。微型电钻钻透枕骨后，用咬骨钳剥离部分颅骨，在闩部水平去除硬脑膜和软脑膜。实验中药物注射位点以写翮第脑室尾侧最后点为零坐标相当于前囟后水平，

6、左侧旁开，吻侧，脑外表下。微量注射使用尖端与玻璃微电极相连的 微量注射器，微电极尖端直径为 。内微量注射量为 ，速度为 。根据以往研究以及预实验选择药物的剂量。 记录经过同芯电极以 的角度插入左侧背斜方肌，记录其信号，根据肌肉大小调节电极插入深度，插入深度一般为。手术完毕，待动物状态稳定后记录基线活动，内微量注射生理盐水 ， 后心包腔内注射辣椒素 后 回 抽 并 冲 洗 心 包次，同 时 记 录 。 后内注射谷氨酸或者谷氨酸受体不同的拮抗剂，后心包腔内注射辣椒素后回抽并冲洗心包，同时记录 ，观察药物对活动的影响。间隔后心包腔内注射辣椒素，观察恢复情况。 以反响中的放电单位总数计算，以内注射生理

7、盐水后的反响为对照，将其定义为。计算注射药物后的与生理盐水比拟的百分比。 以反响中的放电单位总数计算，以内注射生理盐水后的反响为对照，将其定义为；计算注射药物后变化的百分比。实验结束后，微量注射位点原位微注射膀胺天蓝，以标记药物注射位点及扩散范围。 后 静 脉 内 注 入 过 量 戊 巴 比 妥 钠 深麻大鼠，经左心室插管至升主动脉，先用生理盐水快速灌注冲洗血液，再用约 甲醛溶液灌流固定。灌流结束后取脑组织，放置于的甲醛固定液中室温固定，再转移到的蔗糖溶液中沉糖。待组织沉糖完全后进行冰冻切片，片厚 ，行尼氏染色，显微镜下根据大鼠脑图谱进一步确定注射位点图。 统计学分析 采用 统计软件对数据进行

8、分析处理。变化的百分比以 表示，多组间样本均数比拟采用单因素重复测量方差分析。 结果 内微量注射 后 的变化 联合部微量注射 ，和后放电总数分别为 和 ，与 对 照 组 比 较 明 显 下 降 。见图。 内微量注射谷氨酸后 的变化 内分别微量注射、和 谷氨酸后，活动分别为 、 和 ，与生理盐水对照组比拟均增加 。见图。 内微量注射谷氨酸受体亚型拮抗剂后 的 变 化 内 微 量 注 射和 后，活动分别为 和 ，与生理盐水对照组比拟明显下降 。内微量注射和 后，活动分别为 和 ，与生理盐水对照组比拟明显下降 。内联合微量注射 和 后，活动为 ，与单独注射或者后比拟活动明显下 降 。内 微 量 注

9、射和 后，反响为 和 ，与生理盐水对照组比拟差异无统计学意义 。见图。 讨论 以往研究表示清楚：心脏感觉传入神经纤维至少通过条通路上传到中枢神经系统，即伴随心交感神经的传入纤维和伴随心迷走神经的传入纤维。大部分迷走传入神经纤维直接投射到位于延髓的。束路追踪研究表示清楚：心脏交感传入神经纤维通过星状神经节和交感神经链投射到上胸段脊髓背角，而来自脊髓颈部和胸部背角的投射纤维中枢部同样也会终止于。等研究表示清楚：心包内注射化学致痛剂能够诱发在内的表示出。这些结果提示是心脏伤害性感觉信息传递的重要驿站。在本实验中联合部微量注射选择性的神经元胞体损毁剂，抑制了心包腔内注射辣椒素诱发的反响；联合部内微量注

10、射兴奋性神经递质谷氨酸以选择性地激活神经元胞体，结果显示谷氨酸对心包内注射辣椒素诱发的有明显的易化作用，且呈剂量依靠性的增加关系。这项结果提示： 在心脏伤害性感觉信息的中枢调控经过中起易化作用，且这种易化作用是以谷氨酸作为其兴奋性神经递质的。该结果与以往的研究结果一致，解剖学以及电生理学实验研究证明：谷氨酸是内重要的兴奋性神经递质，激活内神经元能够对伤害性感受产生易化调控作用。由于同时是心脏伤害性感受的初级传入中枢，对于这种易化作用的产生有种可能：一种是谷氨酸激活了介入的伤害性信息的内源性下行易化调控通路；另外可能是因谷氨酸是 心脏 伤害性感受 初 级 传 入 纤 维 在内的神经递质，注射谷氨

11、酸增加了初级传入信息进而产生易化效应。对于这种可能性还需进一步的研究证实。 免疫细胞研究以及分子生物学研究证实： 受体、非受体以及代谢型谷氨酸受体亚型在内均有表示出。不同的谷氨酸受体亚型在伤害性感受的作用有所不同。研究表示清楚： 内的受体介导胃内注射盐酸诱发的胃痛觉感受；对炎症诱发的脊髓超兴奋的产生是必须的，并且介入痛觉过敏的行为学反响的构成。但是，内谷氨酸各受体亚型在心脏伤害性感觉信息的调控中的作用尚未见报道。 为了进一步明确不同的谷氨酸受体亚型在心脏伤害性感受中的作用，本研究观察不同受体亚型拮抗剂对心包内注射辣椒素诱发的的影响，结果显示：微量注射受体拮抗剂对有明显的抑制作用，提示内的受体介

12、入心脏伤害性感受的易化调控作用。该结果与以往研究结果一致。以往研究已经明确表示清楚：脑干受体在痛觉的下行易化调节通路中有重要的作用。 受体拮抗剂直接注射到延髓头端腹内侧部 阻止了结肠炎症和芥子油诱发的内脏痛觉过敏。但是，本研究中非受体拮抗剂对无明显的影响，讲明内非受体未介入对心脏伤害性信息的易化调控作用。 是与蛋白偶联的受体家族。研究显示：脊髓对炎症诱发的脊髓超兴奋的产生有重要的意义；同时的激活介入痛觉过敏的行为学反响的产生，提示在痛觉的下行易化调节中有重要的作用。本研究中内微量注射拮抗剂使心包腔内注射辣椒素诱发的肌肉痛觉过敏降低，提示内的介入心脏伤害性感受的易化调控。但是，不同的亚型在心脏伤害性感受调控中的作用还需进一步的研究证实。 以下为参考文献 ， ： ， ， ： ： ，： ， ， ， ，： ， ，： ， ， ， ，： ，： ， ， ，： ， ，： ， ， ， ，： ， ， ， ： ，： ， ， ，： ， ，： ， ， ， ，： ， ，： ， ， ， ，： ， ， ， ，：