《基因毒性杂质》PPT课件.ppt

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1、基于风险评估的药物杂质研究分析方法开发策略&杂质研究常见问题解析汇报人：杨爔炎2019.03一、一、药药品品杂质杂质研究研究评评估策略估策略二、痕量二、痕量杂质杂质定量分析方法的建立定量分析方法的建立提提 纲纲三、案例分析与三、案例分析与讨论讨论四、未知四、未知杂质杂质分离分离鉴鉴定案例分析定案例分析一、一、药药品品杂质杂质研究研究评评估策略估策略1.药品杂质研究的法规依据2.药品杂质评估一般步骤3.药品杂质来源途径分析4.药品杂质毒性判别方法5.药品杂质研究限度策略6.药品杂质风险评估的分析方法建立策略6杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、疗效，甚至对人体的健康有害的物质产产

2、品品质质量重点关注量重点关注杂质杂质：工艺杂质、降解杂质安全性重点关注高毒性安全性重点关注高毒性杂杂质质：致癌、致突变类杂杂质中国药典、美国药典、欧洲药典、日本药典等各国药典ICH Q3A(R2):新型原料药中的杂质问题(2006.10)ICH Q3B(R2):新型药品中的杂质问题(2006.06)ICH Q3C(R6):杂质：残留溶剂的指导原则(2016.10)ICH Q3D:元素杂质的指导原则(2014.12)ICH Q11:原料药开发和生产（化学实体和生物技术生物实体药物）(2012.05)ICH M7(R1):评估和控制药物中 DNA 反应性（致突变）杂质以限制潜在的致癌风险(2017

3、.03)化学药品注射剂与包装材料相容性研究技术指导原则（塑料、玻璃、弹性体密封件）杂 质 研 究 相 关 法 规1.药药品品杂质杂质研究的法研究的法规规依据依据重点关注：法规适用范围2.药药品品杂质评杂质评估一般步估一般步骤骤杂质杂质引入方式引入方式限度制定限度制定已有研究的文献报道警示结构提示计算机模拟毒性评估体外点突变和染色体畸变试验动物毒性评估起始物料及其杂质溶剂及其杂质中间体反应副产物辅料杂质降解杂质生产设备引入包装材料引入环境污染引入一般杂质致癌致畸杂质PDE控制（存在报道）PDE控制（存在报道）TTC控制ICH Q3 A/B/C/D杂质杂质毒性分毒性分类类判定判定致癌、致突变关于关

4、于PDE法与法与TTC法法PDE法适用于有阈值效应的遗传毒性杂质；已有证据表明，该物质只有在超过一定限度时才会产生遗传毒性。杂质安全性限度的确定可以参照残留溶剂限度的计算方法，根据相关动物的无可见效应剂量（No-Observed Effect Level）计算其可接受的日暴露量（Permissible Daily Exposure）,再根据药品的最大日剂量计算出杂质的接受限度。关于关于PDE法与法与TTC法法TTC法无阈值效应的遗传毒性杂质；引入了毒理学关注的阈值（Threshold of Toxicological Concern）。TTC是在接受患者终生用药的癌症发生概率不超过10万分之一

5、的基础上，从高浓度下进行的致癌性实验数据线性外推倒极低浓度得到的一个理论值。对于无阈值效应的遗传毒性杂质，如果每日摄入量低于1.5ug，那么患者因服药导致癌症发生的额外风险可以忽略不记。8按属性按属性有机有机杂质杂质无机无机杂质杂质按来源按来源工工艺杂质艺杂质降解降解杂质杂质3.药药品品杂质杂质来源途径分析来源途径分析路线1 路 线 2 路线3溶剂1，催化剂A+BC(A)时间、温度、pH(C)SI 溶剂杂质溶剂2，试剂RI 试剂杂质DS(DS)(D1,D2)(BP1,BP2)辅料制剂(D3,D4,E11,E12,)容器中的浸出物A，B=起始物料C=中间体R=试剂/催化剂 DS=药用辅料A=潜在

6、的起始物料杂质产生C和DSBP=反应副产物 D=降解产物 SIRI IE=溶剂杂质=试剂杂质=辅料杂质EI 辅料杂质9药药品品杂质杂质来源途径分析来源途径分析-容器中的浸出物来源容器中的浸出物来源10药药物物杂质杂质致癌致畸信息致癌致畸信息获获取来源取来源常见报道高毒性杂质具有警示结构杂质11药药物物杂质杂质致癌致畸信息致癌致畸信息获获取来源取来源毒理学实验毒理学计算软件各类毒理学数据库已有文献报道获取TD50、NOEL、ADI、PMTDINOEL值与致癌致畸没有必然联系查询的毒性研究文献全面性以及毒性实验数据的解读需要专家的确认The Carcinogenic Potency Databas

7、e(CPDB)联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂专家委员会评价（JECFA）加利福尼亚州65号提案(安全饮用水和有毒物质强制法令)欧洲化学品管理局（ECHA）12常常见见物物质质的的PDE数数值举值举例例在检索剂量数据前需要全面检索该物质是否有致癌致畸性，例如氯乙酸CPDB数据TD50显示阴性盐酸盐的药物在重结晶过程中的接触醇类容易产生氯代烷烃，单一卤代物在M7中有36ug/day指导规则关注环氧丙醇、环氧氯丙烷、3-氯-1,2-丙二醇三者之间的转化关系毒性数据会被不断的更新，更多的研究数据会被不断的上传NameCASPDE(ug/day)Note氯氯甲甲烷烷74-87-31361ICH

8、M7氯氯乙乙烷烷75-00-31810ICH M7氯氯异丙异丙烷烷75-29-655500ECHA氯氯乙酸乙酸79-11-83000ECHA/CPDB甲甲醛醛50-00-01.35 or 10000CPDB/ICH M7乙乙醛醛75-07-0153CPDB丙二丙二醛醛542-78-9122CPDB（钠盐）环环氧丙醇氧丙醇556-52-54ICH M7环环氧氧氯氯丙丙烷烷106-89-82.96CPDB（TD50）3-氯氯-1,2-丙二醇丙二醇96-24-2PMTDI：4ug/kg/dayWHO/FAO1,3-二二氯氯-2-丙醇丙醇96-23-110NTP13最大日最大日剂剂量量报报告限度告限度

9、鉴鉴定限度定限度界定限度界定限度2g0.05%0.10%或1.0mg（取最小值）0.15%或1.0mg（取最小值）2g0.03%0.05%0.05%报告限度最大日剂量1g1g限 度0.1%0.05%最大日剂量10mg 2g2g鉴定限度限 度1.0%或5ug(取最小值)0.5%或20ug(取最小值)0.2%或2mg(取最小值)0.10%最大日剂量100mg2g2g界定限度限 度1.0%或50ug (取最小值)0.5%或200ug (取最小值)0.2%或3mg (取最小值)0.15%原料原料药药Q3A药药物物杂质杂质的控制限度的控制限度计计算算（）制制剂剂Q3B新药与仿制药研究策略有显著差异限度=

10、PDE/日最大剂量PDE=TD50*体重/50000PDE=NOEL*体重/(F1*F2*F3*F4*F5)限度=TTC/日最大剂量由ppm推算NOEL（ICH Q3C）由LD50推算NOEL其他其他ICHQ3&M714PDE法法计计算限度算限度实实例例(以三乙胺以三乙胺浓浓度限度度限度计计算算为为例例)（错误错误案例解析案例解析）公式公式1.1.NOEL=LD5070/2000NOEL=LD5070/2000（该该公式公式来来源于源于 EMEAEMEA关关于于清清洁洁验验证证的的指指导导原原则则）公式解释：NOEL（NOAEL）数据如果能直接查到就不需要计算了，直接进入到第2个公式；其中60

11、是指的人体平均体重为60Kg；2000 是一个安全系数。查询美国TOXNET数据库，大鼠大鼠经经口的口的LD50=460mg/KgLD50=460mg/Kg，则NOEL=46070/2000=16.1 mg/Kg/day（错误推算）PDE=NOELPDE=NOEL（mg/Kg/daymg/Kg/day）WeightWeight AdjustmentAdjustment（KgKg）/(F1F2F3F4F5)/(F1F2F3F4F5)PDE=16.1PDE=16.1 mg/Kg/day50Kg/(510511)=3.22mg/daymg/Kg/day50Kg/(510511)=3.22mg/day

12、浓浓度限度限度（）度（）PDEPDE（mg/daymg/day）/（1000dose1000dose（g/dayg/day）100100对于原料药而言，dose均定为10g/day浓度限度（）=3.22/(100010)100=0.0322%（322ppm）F1F1：种种属属之之间间的的换换算算系系数，数，代代表由表由物物种差种差异异推推导导的的变变异异系系数，数，与与体表体表面面积积相关相关 F1=5:从大鼠剂量推断人用剂量的系数；F1=12:从小鼠剂量推断人用剂量的系数 F1=2:从狗剂量推断人用剂量的系数；F1=2.5:从兔剂量推断人用剂量的系数F1=3:从猴子剂量推断人用剂量的系数；F

13、1=10:从其他动物剂量推断人用剂量的系数 对于三乙胺，上述LD50是以大鼠为试验得来的数据，所以F1=5。F F2 2：代：代表表个体个体间间的的变变异异系数系数，其其值值为为F F2=2=1 10 0；F3F3：为为短短期接期接触触急性急性毒毒性研性研究究的可的可变变系数：系数：F3=1，研究时间至少为动物寿命的一半（鼠、兔1年，猫、狗、猴7年）F3=1，器官形成的整个过程的生殖研究F3=2，对啮齿类动物个月研究或非啮齿类动物3-5年的研究 F3=5，对啮齿类动物个月研究或非啮齿类动物年的研究 F3=10，更短时间的研究。在所有情况下，对研究时间介于上述时间点之间的研究，应用较大的系数，如

14、对啮齿类动物个月毒性研究，其系数用。以上大鼠经口的LD50值为急毒数据，根据欧盟数据经验，这个研究时间在3-6个月之间，因此，F3=5。F4F4：产产生生严严重重毒毒性情性情况况的系的系数数，如，如非非遗传遗传致致癌毒癌毒性性、神、神经经毒性毒性或或致畸致畸性性，研，研究生究生殖殖毒毒性性时时，用用以以下下系系数：数：F4=1 与母体毒性有关的胎儿毒性;F4=无母体毒性的胎儿毒性 F4=受母体毒性影响的致畸反应;F4=10 无母体毒性影响的致畸反应 因为三乙胺为非严重毒性，所以这里F4=1。F5F5：一一个个可可变变系系数，数，用用在无在无毒毒性反性反应应的的剂剂量量（NOELNOEL）值时值

15、时F5=1 for a NOEL；F5=1-5 for a NOAEL；F5=5-10 for a LOEL；F5=10 for a Lowest-observed-adverse-effect level(LOAEL)因为NOEL已经确定，所以这里F5=1。当研究没有区分NOAEL和NOEL，且依据确定的PDE值选择剂量时毒性不被认为是“副作用”，则使用F5等于1，NOAEL用于多数元素的口服PDE值设定。三乙胺在ICH Q 3C中属于三类溶剂，限度：0.515由由LD50推推算算PDE值值建建议议原料药工厂中清洁验证指南一文中的NOEL 的单位是mg/天，而不是上文公式中的mg/kg/天L

16、D50计算NOEL的公式：NOEL=LD5070/2000，公式中的70是欧洲人的评价体重如果需要用LD50计算NOEL用于计算PDE，推荐公式应该是NOEL=LD50/2000（见参考文献）不推荐在基因毒物质研究中使用推荐在包材研究的剂量计算中使用参考文献：D.W.Layton;B.J.Mallon;D.H.Rosenblatt;M.J.Small Deriving allowable daily intakes for systemic toxicants lacking chronic toxicity data.Regulatory Toxicology&Pharmacology,19

17、87,7(1):96-112药药品品杂质杂质引入引入风险评风险评估估常见已知杂质引入途径起始物料及已知杂质中间体试剂&溶剂&催化剂反应副产物、降解杂质常见未知杂质引入途径起始物料引入未知杂质、起始物料杂质产生的杂质、生产设备引入的杂质包材浸出物杂质环境引入杂质（生产用水等）需要重点做风险评估工作17已知已知杂质杂质研究策略研究策略讨论讨论结构已知的杂质研究：起始物料及其已知杂质、中间体、试剂、反应副产物、降解产物根据工艺路线梳理出产品待研究的杂质清单进行毒性杂质评估分类：文献报道、软件预测根据各国药典及ICH Q ABC规则分别建立有关物质和溶剂残留方法建立满足专属性和灵敏度的方法（LOQ30

18、%限度浓度），收集多批次API中目标杂质含量基于已有的有关物质方法和溶剂残留方法，增加供试品浓度或改变检测器基于杂质检出情况制定杂质添加实验，考察工艺的杂质的去除能力基于杂质分类、毒性评估、产品检出情况制定方法学验证策略及产品控制策略18潜在及未知潜在及未知杂质杂质研究策略研究策略讨论讨论潜在及未知杂质来源：起始物料引入未知杂质、溶剂中杂质、包材浸出物杂质、辅料引入杂质、生产设备引入根据供应商提供的工艺路线梳理杂质清单及潜在杂质，分别对元素杂质和有机杂质进行分类研究针对元素杂质采取ICPMS全质量数扫描（69种）和 35种元素半定量扫描针对挥发及半挥发杂质采用GCMS进行全质量数扫描（谱库匹配

19、）及半定量分析（SIM模式）针对不挥发杂质采用LCMS 或 LC-MSMS进行全质量数扫描及半定量分析（SIM模式）购买疑似或近似杂质进行分析比对，确定研究目标根据杂质结构评估杂质的毒性，确定杂质的研究限度对比多批次中起始物料及其关联的原料药中杂质的检出情况根据杂质的来源风险及检出情况，制定杂质的控制策略二、痕量二、痕量杂质杂质分析方法的建立分析方法的建立1.痕量杂质分析的挑战与目标2.基于结构特性的分析方法决策思路3.痕量分析方法建立步骤4.痕量物质定量方法的要素1.痕量痕量杂质杂质分析的挑分析的挑战战与目与目标标痕量痕量杂质杂质分析的挑分析的挑战战含量低，选择性要求高，高灵敏度的仪器（GC

20、-MS，LC-MSMS、ICPMS 等）杂质结构多样性和差异大，需要多种分析手段和方法样品基质复杂，需要合适的前处理方法进行分离，纯化，富集有些杂质具有“亚稳定性”的化学结构，在样品准备，制 备和分析过程中容易发生转化需要有经验的分析科学家好的分析方法好的分析方法简单容易操作，成本低通用性稳定性容易技术转移2.基于基于结结构特性的分析方法决策思路构特性的分析方法决策思路易易挥发挥发分子分子?是是GC条件条件稳稳定定?否否是是HPLC条件条件稳稳定定吗吗?是是HPLC/UV HPLC/MS否否化学衍生化学衍生后引入后引入质谱质谱或紫外或紫外检测仪检测仪敏感基敏感基团团:GC/MS,LC/UV,L

21、C/MS等方法等方法否否HPLC条件条件 下下稳稳定定吗吗?否否是是碱性碱性酸性酸性富含富含杂杂原中性分子原中性分子,羟羟基基,羰羰基基,醚醚,酯酯等等等等富含共富含共轭轭 键键分子分子(+)电喷电喷离离 子化子化/质谱质谱(-)(-)电喷电喷离离 子化子化/质谱质谱化学化学电电离离/质谱质谱UV/UV/质谱质谱如不能如不能达达到到检检测测灵灵敏度敏度HS/GC/FID/MS如不能达到如不能达到 检测检测灵敏度灵敏度如不能达到如不能达到 检测检测灵敏度灵敏度3.痕量分析方法建立步痕量分析方法建立步骤骤色色谱谱分离技分离技术术1)1)气相色气相色谱谱2)2)液相色液相色谱谱3)3)离子色离子色谱

22、谱4)4)毛毛细细管管电电泳泳检测检测手段手段氢氢火火焰焰(FID)紫外紫外(UV)电电子子捕捕获获(ECD)EI质谱质谱(MS)ESI/APCI质谱质谱(MS/MS)荧荧光光检检测测(FLD)氮化学氮化学检测检测器器（CND）样样品制品制备备技技术术1)1)直接溶解直接溶解2)2)溶解后析出溶解后析出3)3)化学衍生法化学衍生法4)4)液液-液萃取液萃取5)5)固相萃取固相萃取选择选择何种何种组组合的分析方合的分析方法法取决取决于于：API性性质质（溶解性、化学活性）（溶解性、化学活性）目目标标物性物性质质（极性与（极性与挥挥发发性、性、结结构特构特征征）检测检测器极限器极限杂质杂质溶液溶液

23、稳稳定性定性4.痕量物痕量物质质定量方法的要素定量方法的要素待待测测物限度物限度=对照品浓度/样品浓度符合符合资质资质的的对对照品照品：适：适合合包装包装、有有COA有代表性的有代表性的样样品品：中：中试试样样品、品、验验证证批批次次样样品品适合的适合的色色谱谱系系统统：各目：各目标标杂质杂质及及样样品品可可以有以有效效分离分离适合的适合的检测检测器器：具有高：具有高专专属性属性、高灵高灵敏敏度度适合的适合的溶溶媒媒：色：色谱谱系系统统兼兼容、容、溶溶液液稳稳定定性、性、溶溶解能力解能力具有合适的具有合适的样样品制品制备备方方式式：直：直接接溶解溶解、溶解溶解后后沉淀沉淀、液液液液萃萃取、取、

24、固固体液体液萃萃取取分析方法核心：准确度分析方法核心：准确度、耐用性耐用性三、案例分析与三、案例分析与讨论讨论5种种测测定甲磺酸定甲磺酸酯酯分析方法比分析方法比较较5种种测测定水合定水合肼肼分析方法比分析方法比较较3种种测测定定氯氯代丙醇分析方法比代丙醇分析方法比较较基因毒基因毒杂质杂质开开发实发实例例甲磺酸甲甲磺酸甲酯酯等等仪器设备样品处理及进样发生LOQ方法缺点LCMS三甲胺衍生后直接进样1 ng/ml存在基质不适用及潜在假阳性风险LC/MS/MS直接溶解进样10 ng/ml设备昂贵，不易获取GC-MS衍生后顶空进样10 ng/ml存在基质不适用及潜在假阳性风险溶解后直接进样20 ng/m

25、l灵敏度低、基质效应强、耐用性差液液萃取后直接进样20 ng/ml操作较为繁琐，局限于水溶性样品ORSOR O I+OR RSOI基因毒基因毒杂质杂质开开发实发实例例肼肼常用分析方法样品处理LOQ方法缺点IC直接进样50 ng/ml设备不通用、灵敏度低 专属性差HILIC/LC/MS直接进样1 ng/ml质量数过小，方法稳定性不好LC/MS苯甲醛衍生后直接进样5 ng/ml衍生萃取操作比较繁琐LLE+GCMS苯甲醛衍生后，液液萃取后直接进样10 ng/ml衍生萃取操作比较繁琐LLE+HPLC/UV苯甲醛衍生后，液液萃取后 直接进样5 ng/ml衍生萃取操作比较繁琐HO+H2NH2NONN+H2

26、N N H2H基因毒基因毒杂质杂质开开发实发实例例氯氯代丙醇代丙醇测测定定常用分析方法样品处理LOQ方法缺点GCMS氯代丙醇直接进样30 ng/ml氯代丙醇响应低，耐用性差衍生GC/MS七氟丁酰基咪唑衍生后直接进样5 ng/ml衍生操作繁琐衍生LC/MS二甲胺衍生后直接进样1 ng/ml衍生操作繁琐制制剂剂中两个未知中两个未知杂质杂质的分离及的分离及鉴鉴定定四、未知四、未知杂质杂质分离分离鉴鉴定案例分析定案例分析项项目介目介绍绍项目背景:某制剂样品在稳定性研究过程中出现的两个降解杂质色谱条件:C18,40mM磷酸盐水溶液/甲醇=23：77研究步骤:1.分析方法转换，置换成质谱兼容流动相2.液质

27、联用分析,获取杂质分子量及获取制备中控方法3.制剂样品提取有效成分，利用制备液相分离杂质4.结构鉴定（TOF-MS、超低温探头600M 核磁）5.杂质定向合成6.赋值-QNMR（400M核磁）7.相对校正因子测定定位MS（ESI-）分析方法分析方法转换转换甲醇萃取、过滤常温旋干甲 醇 复 溶、制 备样样品品处处理与制理与制备备分离分离冷冻干燥色谱定位、质谱确认分子量结合API结构推论杂质 结构通过TOFMS和核磁得到验证 杂质A：次甲基氧化生成醇杂质B：2号位甲甲基氧化成醛QNMR定量 杂质A：89.5%；杂质B：85.6%未知未知杂质结杂质结构构鉴鉴定定找找不准研不准研究究对对象象选选不好研

28、不好研究究方方法法写写不不细质细质量量标标准准看不懂看不懂发发补补意意见见2 23 34 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 6 1 1高比例高比例发补发补的的几几条意条意见见你有木有接到过这类令人心塞的发补通知？“请结合本产品及起始原料工艺对杂质进行补充研究”“请补充提供或说明杂质检查方法与限度修改(制订)的依 据”“请使用专属性更强灵敏度更高的方法对本品与原研的 杂质谱进行重新研究”1 1找找不不见见研研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不不细质细质量量标标准准看不懂看不懂发发补补意意见见2 24 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不

29、住外包包项项目目 6 6 3 31 1杂质研究有关物质检查！1有关有关物物质质起始原料起始原料中中间间体、副体、副产产物物 异构体异构体和聚合物和聚合物 多晶型多晶型降解降解产产物物异构体和聚合物异构体和聚合物 多晶多晶型型3外源外源污污染染物物微生物微生物微粒物微粒物质质-农药农药残留残留非法添加物非法添加物2无关无关杂质杂质试剂试剂配配位位体体、无无机机盐盐、溶、溶剂剂重金属催化重金属催化剂剂过滤过滤介介质质、活性炭、活性炭-酶酶残留残留重重组组人生人生长长激素激素红红霉素霉素/麦迪霉素麦迪霉素硫酸硫酸鱼鱼精蛋白精蛋白/肝素肝素钠钠阿奇霉素阿奇霉素/右旋糖右旋糖酐铁酐铁三三唑唑仑仑/七氟七

30、氟烷烷/十一十一烯烯酸酸重重组组发发酵酵提取提取半合成半合成合成合成更有新型生物技更有新型生物技术术/细细胞胞产产品品多多、全全大大、杂杂农药农药残留残留菌体菌体蛋白蛋白残留残留酶酶培养液培养液杂质杂质元元素素（重（重金金属）属）杂杂质质1类类金属金属杂质杂质（原料（原料药药）-1A（Pt、Pd）-1B（Ir、Rh、Ru、Os）-1C（Mo、Ni、Cr、V）修订通则新增方法2341农药农药残留量残留量测测定法定法本方法为质谱法（通则0431）测定中药材中的农药残留量。气相色谱串联质谱法 液相色谱串联质谱法提供了多品种通用的色谱及质谱条件仅仅仅仅中中药药材有材有 农药农药残留残留问题问题？各国各

31、国药药典列出的典列出的杂质杂质与你与你产产品的关系？品的关系？曾见到有企业CTD格式申报资料中杂质分析章节 让人不知所云的神段子：国内标准目前未收载指定相关杂质，USP中收载有3个杂质，EP中收载有5个特定杂质，其中2个与USP不同，国内可以购买到EP的5种杂质对照品。呃.我弱弱的问您一句您想说什么？“请结合本产品及起始原料工艺对杂 质进行补补充充研究”杂杂质质研研究究怎怎样样突突出自出自己己特色特色？-中中间间体体-副副产产物物A+BC;C+DEA+BCA+BC以合成路以合成路线为线线为线索，索，顺顺藤摸瓜列表藤摸瓜列表 自家工自家工艺杂质艺杂质！理理论论分析与分析与实验实验数据相数据相结结

32、合！合！以以终为终为始确定始确定重点！重点！-物物料料残留残留（反应物，试剂，溶剂，催化剂）A（1mol）+B（2mol）C（1mol）+B（1mol）列表自家产品中所有潜在杂质并分析来龙去脉杂质杂质名称名称 引入点引入点 去除方式去除方式 监监控方法控方法 预预估量估量 属性属性A 合成第一步 反应完全TLC 检测限 工艺杂质过程中检测以下 起始原料B合成第一步水洗3次 uv 检测限 工艺杂质过程中检测以下起始原料合成第二步完C合成第一步 HPLC 工艺杂质全过程中检测中间体B合成第一步反应结束或水洗工艺杂质 原料引入CChp.和USP中的杂质1合成第一步合成第二步HPLC过程中检测+终产品

33、标准中检查工艺杂质 副产物/热降解物“请结合本产品及起始原料工艺对杂质进行补补充充研究”1 1找找不准研不准研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不不细质细质量量标标准准看不懂看不懂发发补补意意见见2 24 4说说不清依不清依据据缘缘由由 5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 63 31 1检检测测的的方方法法因因杂杂而异而异原研原研标标准准EP7.0USP34JP15杂质谱杂质谱研究研究梯度洗脱梯度洗脱色色谱谱条件条件 210nm 254nm双波双波长检测长检测梯度洗脱梯度洗脱色色谱谱条件条件 210nm 254nm双波双波长检测长检测梯度洗脱梯度洗脱色色谱谱条件条件 210nm

34、254nm双波双波长检测长检测等度洗脱等度洗脱色色谱谱条件条件 210nm 检检测测等度洗脱等度洗脱色色谱谱条件条件210nm单单波波长检测长检测“请使用专属性更强灵敏度更高的方法对本品与原研的杂质谱进行重新研究”杂质杂质与主成与主成分分结结构性构性质质差异很大差异很大 国外使国外使用用TLCTLC补补充充检测检测怎么判定你所用的方法不够好？-根据文献怎么判定你所用的方法不够好？-根据试验物质平衡考察/灵敏度试验/专属性试验有否漏检杂质 有否需校正杂质 需否补充方法根据组成根据结构根据性质/需求/法规怎么判定你所用的方法不够好？-综合分析举举一反一反三触三触类类旁旁通通20152015年版年版

35、药药典注典注射射剂剂通通则则整合后整合后补补充充的的这这 个个项项目目给给你你什么提什么提示？示？通则中新增的仪器与技术通通则则0412电电感感耦合耦合等等离子离子体体质谱质谱法法重重金属金属及及有害元有害元素素山楂山楂照铅、镉、砷、汞、铜测定法（通则2321原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质 谱法）测定，铅不得过5mg/kg;镉不得过0.3mg/kg;砷 不得过2mg/kg；汞不得过 0.2mg/kg；铜不得过 20mg/kg。中药注射剂已经在精密测定按日服药量限定 金属杂质，连化妆品都开始用ICP-MS检测 铅汞砷镉喽！而化药的静脉注射剂重金属就 一直用目视判断总量粗测？！重金属重金属

36、杂质监杂质监控是不是控是不是该该升升升升级级啦？啦？新增通则中涉及的仪器与技术通通则则0531超超临临界界流流体色体色谱谱法法supercritical fluid chromatography,SFC超超临临界流界流体体色色谱谱仪仪很多部件类似髙效液相色谱仪以超超临临界界流流体体作为流动相。分析速度比比H PLC提提高高3-10倍倍，溶剂成本是是HPLC的的1/3-1/40，除可连接UV,DAD以及MS检测器外还可可以以连连接接气气相相的的FID检检测测器器对手性化合手性化合物物具有更好的分离能力新增通新增通则则中涉及的中涉及的仪仪器与技器与技术术0532临临界界点色点色谱谱法法Liquid

37、 Chromatography at Critical Condition，LCCC仪仪器同器同HPLC当使用多孔填充材料作为固定相时，分子排阻色分子排阻色谱谱（Size exclusionchromatography，SEC）和相互作用色相互作用色谱谱（Interaction chromatography，IC）的分离机制在分离聚合物 时同时发生作用。在某个特殊色谱条件（固定相、流动相的组成、温度）下，存在两种分离机制的存在两种分离机制的临临界点界点，被称为焓熵互补点或色 谱临界条件（critical conditions）或或临临界吸附界吸附点点（critical adsorption p

38、oint，CAP）。是对聚聚合合物物进行分离的一种色谱技术。与与时时俱俱进实进实事求是事求是接接轨轨国国际际体体现现特色特色 整体整体着眼着眼细节细节入手入手1 1找找不准研不准研究究对对象象选选不不对对研研究究方方法法写写不好不好质质量量标标准准看不懂看不懂发发补补意意见见2 23 3 4 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 6质质控控标标准准/方法方法与与质质量的关系量的关系美女与旗袍美女与旗袍肥肥与束身衣肥肥与束身衣需要严控的毒性杂质可以宽管的有效杂质校正因子差异大的杂质以以及你想及你想重重点精密点精密管管控的控的杂杂质质！结结合合试试验结验结果果写写好

39、好标标准准溶溶剂选择剂选择的依据的依据8小小时时标标准中准中一一般不般不需需提示提示4小小时时需提需提示示“临临用用现现配配”或或“立立即即进样进样”2小小时时改改换换溶溶剂剂或或明确明确给给出出“该该溶溶液液配配制制后后应应在在1小小时时内内使使用用”采用采用外外标标法法时时，通通常常取各取各品品种种项项下下的的对对照照品溶品溶液液，连续连续进进样样5 5次，除次，除另另有有规规定外定外，RSDRSD2.02.0 在在质质量量标标准中如果准中如果没没有明有明确确规规定定，就就是是2.02.0 注意注意：不不要自己要自己难为难为自自己己哦哦！应应给给予微予微量量物物质检质检测测较较宽宽松的指松

40、的指标标！特特别别是是在定在定量量限附限附近近时时！要要连续进样连续进样不不能拼能拼凑凑哦哦！重复性（重复性（RSD）的要求）的要求 原来大多原来大多药药典典标标准准取取对对照照溶溶液液20l注注入入液相液相色色谱仪谱仪，调节调节检检 测测灵灵敏敏度度，使使主主成成分分色色谱谱峰峰的的峰峰高高约约为为满满 量程量程的的20%；现现在改在改为为配定量限配定量限或或限度限度1/10溶液溶液取灵取灵敏敏度度溶溶液液20l注入液注入液相相色色谱谱仪仪，调调节节 检测检测灵灵敏度敏度，使主使主成成分色分色谱谱峰的峰的信信噪比噪比约约 为为10（或大或大于于10）；）；关于灵敏度关于灵敏度测试测试 原来大

41、多原来大多标标准准取取对对照照溶溶液液20l注注入入液相液相色色谱仪谱仪，调节调节检检 测测灵灵敏敏度度，使使主主成成分分色色谱谱峰峰的的峰峰高高约约为为满满 量程量程的的20%；现现在提倡配定量限或限在提倡配定量限或限度度1/10溶液溶液取灵取灵敏敏度度溶溶液液20l注入液注入液相相色色谱谱仪仪，调调节节 检测检测灵灵敏度敏度，使主使主成成分色分色谱谱峰的峰的信信噪比噪比约约为为10（或大或大于于10）；）；关于灵敏度关于灵敏度测试测试1 1找找不准研不准研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不不细质细质量量标标准准似是老生常似是老生常谈谈的的杂质杂质研研 究究-还有哪些困惑与问题？

42、看不懂看不懂发发补补意意见见2 23 34 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目 6 6优优秀秀的申的申报资报资料料-是能成功传递大量信息的研研发发思路思路研研发发实验实验水平水平方法方法实验实验结论结论实验实验结结果果研研发发 理念理念缺依据少过程 无数据缺缺主主观观臆断臆断别问别问我根据什么我根据什么常常见问见问题题-错错缺浅乱缺浅乱乱乱杂杂散无章散无章没没链链接没接没逻辑逻辑 慢慢品来慢慢品来细细细细找找东一句西一行 考验你浅浅蜻蜓点水蜻蜓点水想想说说信你很困信你很困难难 谁说谁说我没跟你我没跟你讲讲只能只能发补问发补问明白明白点两句藏八句 让人猜HowWhy

43、WhereHow much杂杂质质研究研究要解决要解决的的问题问题绝绝不不仅仅限于限于杂杂质检测质检测！What如何如何检测检测与与监监控？控？为为什么什么除不除不掉掉/能除能除掉？掉？怎么引入的怎么引入的？杂质杂质都是都是啥啥？限度限度订订多少？多少？创建思路摸索过程细节考究新方法新建立方法必有内容变更前缺点-必要性必要性变变更依据更依据变更的验证-正确性正确性前后的比较-优优越性越性方法与限度变更时以下内容提供了吗？杂质谱比较四方面结论你给没给？杂质组成是否一致有否新增杂质能否桥接安全性资料可否照搬方法与限度生生产质产质控水平控水平-讲难讲难度度企企业业成本利益成本利益-算己算己账账安全有

44、效与科学合理性呢？安全有效与科学合理性呢？限度限度制制订说订说明明常常见问题见问题-强强调调困困难难不不讲讲科学科学1 1找找不准研不准研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不不细质细质量量标标准准似是老生常似是老生常谈谈的的杂质杂质研研 究究-还有哪些困惑与问题？看不懂看不懂发发补补意意见见2 23 3 03034 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目6 6实验记实验记录录-不完备实验图实验图谱谱-无解析 杂杂质对质对照照-缺工艺1 1找找不准研不准研究究对对象象选选不好研不好研究究方方法法写写不不细质细质量量标标准准似是老生常似是老生常谈谈的的杂质杂质研研 究究-还有哪些困惑与问题？看不懂看不懂发发补补意意见见2 23 303034 4说说不清依不清依据据缘缘由由5 5管管不住外不住外包包项项目目6 6高比例高比例发补发补的的几几条意条意见见你有木有接到过这类令人心塞的发补通知？“请结合本产品及起始原料工艺对杂质进行补补充充研究”“请补充提供或说明杂质检查方法与限度 修改(制订)的依据”“请使用专属性更强灵敏度更高的方法对 本品与原研的杂质谱进行重新研究”发补意见你都该怎么理解如何回复？谢谢谢谢