台盼蓝染色实验原理和步骤.pdf

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1、台盼蓝染色实验原理和步骤 This manuscript was revised by JIEK MA on December 15th,2012.台盼蓝染色实验原理台盼蓝染色实验原理台盼蓝（台盼蓝（Trypan Blue)Trypan Blue)是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。分子式：色。分子式：C C3434H H2424N N6 6O O1414S S4 4NaNa4 4，分子量，分子量:，可溶于水

2、（，可溶于水（10mg/ml)10mg/ml)。实验原理：实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。台盼蓝是组织和中最借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法

3、之一。注意也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需量。台盼蓝染色只需 3-53-5 分钟即可完成，并且操作非常简单。分钟即可完成，并且操作非常简单。实验步骤：实验步骤：1 1、配制、配制 4%4%台盼蓝：称取台盼蓝：称取 4g4g 台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至 100ml100ml，用滤，用滤纸过滤，纸过滤，4 4保存。使用时用保存。使用时用 PBSPBS 稀释

4、至稀释至%。2 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。3 3、染色：细胞悬液与、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以台盼蓝溶液以 9:19:1 混合混匀。（终浓度混合混匀。（终浓度%）4 4、计数：在、计数：在 3 3 分钟内，分别计数活细胞和死细胞。分钟内，分别计数活细胞和死细胞。5 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。6 6、统计细胞活力：活细胞率（、统计细胞活力：活细胞率（%）=活细胞总数活细胞总数/（活细胞总数（活细胞总数+死细胞总死细胞总数）100%数）100%注意：注意：1.1.保存条件：室温保存。保存条件：室温保存。2.2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。