植物组织培养的基本步骤(共2页).doc
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1、精选优质文档-倾情为你奉上植物组织培养的基本步骤成熟细胞离体(脱分化)分生细胞(分裂)愈伤组织(再分化)形态建成完整植株。培养基的主要成分【水分】【无机盐】1.大量元素:N,P,K,Ca,Mg,S(由相关的无机盐提供) 2.微量元素:Fe,B,Cu,Mn,Mn,Zn,Co【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物 【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂【凝固剂】琼脂【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银培养基和组织培养用具的灭菌方式【培养基,无菌水】 高压蒸汽灭菌,0.105MPa灭菌1530分钟【移栽基质】曝晒
2、,甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌12h【接种室,缓冲室】紫外线灯照射30min,或气雾消毒剂【超净工作台】紫外线灯30min,之后打开风机过滤除菌【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭,之后用火焰灼烧灭菌【培养室】3%来苏尔喷雾,或甲醛,气雾消毒熏蒸【皮肤】先用肥皂洗手,接种前用70%乙醇擦拭【瓶口,管口】70%乙醇擦拭,用火焰封口【培养瓶表面】70%乙醇擦拭【台面,桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒植物外植体的灭菌方式【茎尖,茎段,叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒,再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡510min。 3
3、.若材料有绒毛,最好在消毒液中加入几滴吐温。4.消毒时要不断震荡,使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗35次。【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下,再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min,用无菌水冲洗23次。【种子】 用10%次氯酸钠浸泡2030min,或0.1%升汞消毒510min,然后再用无菌水冲洗35次。【花蕾】1.用70%乙醇浸泡1015秒,无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min,用无菌水冲洗23次。【根及地下部器官】 用0.1%升汞浸泡510min 或用次氯酸钠浸泡1015min,再用无菌水冲洗35次。【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】专心-专注-专业
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