平板划线试验.ppt

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1、平板划线实验平板划线实验巴州质检所阿依尼萨.艾依提相关基础理论细菌的培养相关基础理论细菌的培养一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细征。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外，掌握各种分离培养和接种的基本技养条件之外，掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环节。术，也是重要环节。培养基培养基 在土壤、水、食品、空气以及人和动、植

2、物中，在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其不同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行分离，以得中某种细菌，就必须将各种细菌进行分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯到只含有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌需要不同的培养基各种生物学性状，不同的细菌需要不同的培养基进行培养。进行培养。一、培养基一、培养基培养基按其物理性状，分为固体培养基、液体培培养基按其物理性状，分为固体培养基、液体培养基和半

3、固体培养基。养基和半固体培养基。培养基培养基按用途，分按用途，分基础培养基、加富培养基、选基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。择培养基、鉴别培养基。二、细菌的接种方法二、细菌的接种方法将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细是其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在菌在琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离某一点，生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。纯种的目的。当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和当

4、细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分为四种。方法可相应的分为四种。常见的几种细菌的培养和基接种方法举例常见的几种细菌的培养和基接种方法举例 平板划线接种平板划线接种法法斜面培养基斜面培养基接种法接种法液体培养基液体培养基接种法接种法穿刺接种法穿刺接种法菌种菌种 葡萄球菌和大葡萄球菌和大肠杆菌的混合肠杆菌的混合菌液菌液大肠杆菌培养大肠杆菌培养物物大肠杆菌培养大肠杆菌培养物枯草杆菌培物枯草杆菌培养物养物变形杆菌培养变形杆菌培养物痢疾杆菌培物痢疾杆菌培养物养物培养培养基基 普通琼脂平板普通琼脂平板琼

5、脂斜面琼脂斜面培养基培养基普通肉汤普通肉汤培养基培养基半固体琼脂半固体琼脂培养基培养基平板划线接种法平板划线接种法 常用于分离单个菌落，也可用于观察细菌的生长状况和观察某些生化反应。平板划线接种法平板划线接种法接种方法接种方法（1 1）标记）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接种种 者姓名、日期等。者姓名、日期等。4、平板划线接种法、平板划线接种法（2 2）灭菌接种环）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置

6、于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2323次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。4、平板划线接种法、平板划线接种法 图图2-4 2-4 灭菌接种环灭菌接种环平板划线接种法平板划线接种法（3 3）取菌种）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管试管，用持有接

7、种环的右手手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰塞，将试管管口迅速通过火焰2323次进行灭菌。次进行灭菌。将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰口再次通过火焰2323次灭菌，塞好试管塞，放至次灭菌，塞好试管塞，放至原来的位置。原来的位置。平板划线接种法平板划线接种法（4 4）分离划线接种细菌（四区接种法）分离划线接种细菌（四区接种法）左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的

8、细菌落入灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/101/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈面呈30403040度角，以腕力在平板表面行轻而快地度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。来回滑动动作。旋转琼脂平板旋转琼脂平板9090度，烧灼接种环，以杀灭环度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通

9、过薄膜处作连续平行划线冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板（约占平板1/51/5），此视为二区。），此视为二区。平板划线接种法平板划线接种法 旋转琼脂平板旋转琼脂平板9090度，灼烧接种环灭菌并使之度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板平板1/41/4），此为三区。），此为三区。旋转琼脂平板旋转琼脂平板9090度，接种环不必再灭菌，接度，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。四区。各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。稀释的目的。平板划线接种法平板划线接种法 四区划线四区划线平板划线接种法平板划线接种法平板划线接种法平板划线接种法（5 5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放，送进放，送进3737温箱培养。温箱培养。（6 6）培养）培养1824h1824h后将培养皿取出。观察琼脂平板后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。表面结构、透明度、颜色等性状。