正相色谱和反向色谱及C18柱子(共4页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上正相色谱和反向色谱及C18柱子反相与正相的区别在于，固定相与流动相的极性大小。反相：固定相的极性小于流动相的极性正相：固定相的极性大于流动相的极性反向色谱流动相极性大于固定相极性 测定样品时极性大的先出峰 ，正向反之在正相色谱中，一般采用极性键合固定相，硅胶表面键合的是极性的有机基团，键合相的名称由键合上去的基团而定。最常用的有氰基（-CN）、氨基（-NH2）、二醇基（DIOL）键合相。流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂，如烃类溶剂，或其中加入一定量的极性溶剂（如氯仿、醇、乙腈等），以调节流动相的洗脱强度。通常用于分离极性化合物。一般认为正相色谱的分离

2、机制属于分配色谱。组分的分配比K值，随其极性的增加而增大，但随流动相中极性调节剂的极性增大（或浓度增大）而降低。同时，极性键合相的极性越大，组分的保留值越大。 该法主要用于分离异构体，极性不同的化合物，特别是用来分离不同类型的化合物。反相键合相色谱法 在反相色谱中，一般采用非极性键合固定相，如硅胶-C18H37（简称ODS或C18）硅胶-苯基等，用强极性的溶剂为流动相，如甲醇/水，乙腈/水，水和无机盐的缓冲液等。目前，对于反相色谱的保留机制还没有一致的看法，大致有两种观点：一种认为属于分配色谱，另一种认为属于吸附色谱。 分配色谱的作用机制是假设混合溶剂（水+有机溶剂）中极性弱的有机溶剂吸附于非

3、极性烷基配合基表面，组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。吸附色谱的作用机制是把非极性的烷基键合相，看作是在硅胶表面上覆盖了一层键合的十八烷基的“分子毛”，这种“分子毛”有强的疏水特性。当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来分离有机化合物时，一方面，非极性组分分子或组分分子的非极性部分，由于疏溶剂的作用，将会从水中被“挤”出来，与固定相上的疏水烷基之间产生缔合作用。另一方面，被分离物的极性部分受到极性流动相的作用，使它离开固定相，减少保留值，此即解缔过程。显然，这两种作用力之差，决定了分子在色谱中的保留行为。. 一般地，固定相的烷基配合基或分离分子中非极性部分的表面

4、积越大，或者流动相表面张力及介电常数越大，则缔合作用越强，分配比也越大，保留值越大。在反相键合相色谱中，极性大的组分先流出，极性小的组分后流出。1.C18是连接了18烷基碳链的反相固定相的总称。ODS 是以硅胶为基质键合的C18填料，而C18还包括其他基质的填料，比如高聚物小球为基质，氧化铝为基质，氧化锆为基质等键合C18链形成的反相固定相，这些可以称为C18，但是不是ODS。 2.RP-18也是C18中的一种，不同的公司对C18填料有不同的商业名称，本质应该都是一样的。Merck公司的填料喜欢叫RP-18。 比如Merck 的LiChrospher RP-18，Superspher RP-1

5、8，Purospher RP-18。因此，我认为说RP-18是改进型的不妥当。Merck的改进表现在前边的名字上,比如LiCHrospher, Superspher, Purospher表现的是不同的性能C8是硅胶键合辛烷基，C18是硅胶键合十八烷基，C18的极性较C8的极性小，C18对分析物的保留性能强于C8，含碳量对分离效果和主要组分的保留时间起很大的影响，所以含碳量高，主要组分的保留时间越长。 C8和C18都是反相色谱柱的一种，适用于分析弱极性的物质，C8适合分析弱极性物质里极性稍强的一类物质，C18适合分析弱极性物质里极性更弱的物质。这是他们极性上的差别，但是差别并不是特别明显，一般能

6、用C8分析的物质，在C18上也能分离。 C18比C8的碳链更长，因此带来更好的保留特性。因此C8就更适合分析大分子类的物质，比如一些球蛋白等，都用C8和缓冲盐洗脱剂来配合使用。相反，分子量较小的物质，经常用C18来进行分析和分离。键合相不同，导致同种组分在不同色谱柱上的保留时间不一致，对各组分的保留能力也会不同，峰位置就变化啦。C18前面看到“ODS”的字样，ODS是英文octadecyl silane的所写，意思是十八(烷)基硅烷，是以硅胶为基质键合的C18填料，由于大部分的C18柱都是硅胶基质，因此有时你还会看到色谱柱上只标称二者之一。其中以ODS居多。有时你还会看到ODS-x，x是不同的

7、数字，这个x虽然是数字，但是不同厂家的产品代表的含义不同，一般以含碳量区分，但这也不是绝对的。有时还可能看到RP-18或RP-8，RP-18和C18意义基本一致，但是不同的厂家有不同的规定。 RPC8、RPC18，这里的RP是指Reversal Phase，就是“反相”的意思，所以RPC8、RPC18就是指反相C8和反相C18。其实C8和C18也没怎么见过用于正相，它们本身就是反相柱，只是商家为了区别其它的C8或C18做出的一个标识。键合烷基的链长对键合相的样品负荷量、溶质的容量因子及其选择性有不同的影响，当烷基键合相表面浓度相同时，随着烷基链长增加，碳含量成比例增加，溶质的何留值增加。C18C6、C8短链烷基，由于分子尺寸较小，与硅胶表面键合时可以有比长链烷基更高的覆盖和较少的残余羟基，适合极性样品或做离子抑制的样品的分析。 一般说，C18比C8的分离效果好。但是如果遇到性质差别比较大的样品，也就是说比较容易分离的样品，C8比C18的效率高专心-专注-专业