CIK细胞免疫治疗课件.ppt

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1、CIKCIK细胞免疫治胞免疫治疗1.我国肿瘤现状癌症对人类健康和生命的威胁很大，它和心血管疾患已成为医学上的两大难关，在全世界构成死亡原因的头两位。全世界52亿人口中，每年约有700万人新患癌症，每年约有500多万人死于癌症，几乎每6秒钟就有一名癌症患者死亡。我国目前每年平均约有150万人新患癌症，每年约有80万人死于癌症，其中肺癌、胰腺癌、肝癌、鼻咽癌、前列腺癌、恶性淋巴瘤等，近年来有上升的趋势，由于防癌措施的普及，宫颈癌、睾丸癌症、白血病等有下降的趋势。我国我国恶性性肿瘤瘤发病病现状及状及趋势 中国中国肿瘤，瘤，2012.22.肿瘤手手术化化疗放放疗生物治生物治疗细胞因子治疗免疫细胞治疗基

2、因治疗分子靶向治疗抗体治疗3.The Three Phases of the Cancer Immunoediting ProcessDunnGP,etal.Immunity,Vol.21,137148,August,20044.生物治疗的原理免疫系统是人体的防御体系，一方面发挥着清除细菌、病毒、外来异物的功能，另一方面消除体内衰老细胞以及发生突变的细胞(有的突变细胞会变成癌细胞)。机体免疫系统和癌细胞相互作用的结果决定了癌症的最终演变。对于健康的人来说，其免疫系统的强大足以及时清除突变的癌细胞。但对于癌细胞病人来说，普遍存在免疫系统低下，不能有效地识别、杀灭癌症细胞；另一方面，癌症细胞大量增

3、殖，会进一步抑患者的免疫功能，而且，癌症细胞有多种机制来逃脱免疫细胞的识别与杀伤，癌症的免疫治疗就是借助分子生物学技术和细胞工程技术，提高癌症的免疫原性，给机体补充足够数量的功能正常的免疫细胞和相关分子，激发和增强机体抗瘤免疫应答，提高癌症对机体抗癌症免疫效应的敏感性，在体内、外诱导癌症特异性和非特异味性效应细胞和分子，达到最终清除癌症的目的。5.Virchow,对肿瘤免疫渗透进行了描述首次报道了异基因骨髓移植Burnet,肿瘤免疫监视假说Coley,利用细菌产物治疗癌症Zinkernagel和Doherty,发现MHC 限制性CD8+细胞识别Steinman发现树突状细胞Bevan发现交叉递

4、呈首次研究膀胱癌BCGIL-2的首次研究首次研究癌细胞的过继转移治疗IFN在黑色素瘤中的首次研究Bosenberg和Boon，人类肿瘤相关抗原的表征利用TFN对黑色素瘤和肉瘤隔离灌注的首次研究Sakaguchi再次发现调节细胞发现Toll样受体的免疫功能黑色素瘤的清髓性化疗和过继性细胞转移治疗免疫调节剂被用于治疗VINVIN中人类乳头瘤病毒疫苗FDA批准sipuleucel-T治疗前列腺癌，批准Ipilimumab治疗黑色素瘤重要的基础免疫发现和关键临床试验肿瘤免疫治瘤免疫治疗的的发展展历程程6.免疫细胞类型细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）DC细胞与CIK细胞混

5、合培养诱导出来的细胞（DC-CIK）肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）自然杀伤细胞（NK）以上免疫细胞皆已临床应用介介绍Introduction介绍 Introduction7.细胞因子胞因子诱导的的杀伤细胞（胞（CIK）CIK细胞是将人体外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞，又被称为NK细胞样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤优点。CIK细胞具有以下特点：增殖能力强杀瘤活性强杀瘤谱广对正常骨髓造血前体细胞毒性小CIK细胞的杀瘤机制：对瘤细胞直接杀伤诱导肿瘤凋亡活化后产生大量细胞因子的抑制杀瘤作用激活机体免疫系统，提高机体免疫功

6、能8.CIK细胞的杀瘤机制9.CIK细胞中的效应细胞是CD3+和CD56+细胞，在正常人外周血中极其罕见，仅1%5%。在体外经多因子培养2到3周，CD3+CD56+细胞迅速增多，较培养前升幅可达1000倍以上。CIK细胞治疗属于过继细胞免疫疗法，由于CIK细胞溶瘤作用是非MHC限制性的，即不受肿瘤组织类型的限制，因此对任何一种肿瘤均有杀伤作用，但对高抗原表达的癌症疗效最好。10.11.12.13.CIK细胞治胞治疗适适应症症CIK细胞治胞治疗适适应症症：主要用于恶性黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等。适适应人群：人群：1.除个别针对儿童复发肿瘤治疗外，患者年龄16岁；2.生活

7、自理，卡氏评分60分；3.预计生存期3个月；4.签署知情同意书；5.放化疗结束2周以上（个别病例具体分析）。14.Karnofsky（卡氏，KPS，百分法）功能状态评分标准体力状况评分正常，无症状和体征100能进行正常活动，有轻微症状和体征90勉强可进行正常活动，有一些症状或体征80生活可自理，但不能维持正常生活工作70生活能大部分自理，但偶生活能大部分自理，但偶尔需要需要别人帮助人帮助60常需人照料50生活不能自理，需要特别照顾和帮助40生活严重不能自理30病重，需要住院和积极的支持治疗20重危，临近死亡10死亡015.CIK细胞治胞治疗禁忌症禁忌症自身免疫性疾病患者T细胞淋巴瘤患者对治疗中

8、所用生物制剂过敏者怀孕或哺乳期妇女器官功能衰竭及脏器移植者不可控制的感染性疾病16.细胞治疗示意图17.CIK细胞的体外来源胞的体外来源血液的来源：患者自体血或家属血（60ml）中心血站申请血库血（浓缩白细胞1U）血液的检查：血常规检查、血凝四项等血型检测-A/B/O、Rh血型检测，自体血之外的必须血型匹配常见病毒检测-HAV、HBV、梅毒、HIV等检测18.病人采血前注意事病人采血前注意事项病人清晨抽血前可以进食，但勿食用油腻食物；抽血前不能输液；抽血前病人没有任何感染及心肺肝功能异常；手术病人术前取血；放、化疗病人血象正常后取血；淋巴细胞绝对值0.8不能取血，0.8可以取血。19.20.仪

9、器：超净台或生物安全柜，离心机、水浴锅、微波炉、天平、移液枪、显微镜准备材料：剪刀、镊子、培养瓶，离心管/架，5ml/10ml/25ml移液管，滴管试剂：CIK培养基，生理盐水，硫酸庆大霉素，各种细胞因子等消毒用品：75%酒精，无菌纱布，酒精棉球21.分离分离PBMNC病人自体血或家属血血库血淋巴分离液密度梯度离心2000rpm，20min血浆单个核细胞分离液红细胞吸出单个核细胞，生理盐水洗涤23次，1500rpm，10min血浆于56灭活30min后，3000rpm，10min；4保存备用22.CIK细胞培养流程胞培养流程D0天补30ml进T75包被培养瓶24h后加细胞因子，并补液至40ml

10、D4或D5天视细胞情况一扩二或三，补液至每瓶120mlD2天进T175培养瓶补液至100mlD6或D7天一扩二D8或D9天一扩二D9或D10天取样送检并扩增一扩二D10或D11天一扩二D13或D14天回输根据细胞培养情况补液20或30ml回输23.CIK细胞回胞回输时的一些准的一些准备工作工作回回输前的准前的准备：医生填写治疗申请单，病人或家属签字知情同意书护士核对科室、病人姓名、住院号、床号、血型等回回输时的注意事的注意事项：用输血器回输，前15min缓慢滴注（2030滴/分钟），无反应后按60滴/min滴入，回输过程中观察患者有无其他反应回回输后的注意事后的注意事项：回输结束后，应留院观察

11、2h左右24.CIK细胞治疗的副反应及处理常常见的副反的副反应：1.一过性发热，常在输入后4-8h内发生，持续2-8h；2.其它的副反应：乏力和全身不适等，较少见；出现寒战可肌注25mg异丙嗪。发热的的处理：理：1.体温38.5，温水擦浴，必要时肌肉注射20mg苯海拉明或12.5mg非那根；3.回输的穿刺点如有红肿、疼痛、皮温升高、硬结予以50%Mg2SO4湿敷即可。25.26.人体外周血人体外周血单核核细胞分离胞分离（SOP）操作步骤：1.50ml离心管中加入15ml淋巴细胞分离液；2.用吸管吸取血样沿管壁缓慢加于淋巴细胞分离液液面上，注意此过程中不能把血液与分离液间的界面破坏，保持界面的清

12、晰；3.配平后，于2000rpm离心20min；4.离心结束后，管内液体分四层，从上到下分别为血浆、单核细胞、分离液和红细胞，缓慢吸取上层血浆，置于离心管内于56灭活30min后，于3000rpm离心10min，4保存备用5.将滴管插到云雾层，吸取单核细胞至另一个离心管中，加入1#试剂50ml，于1500rpm离心10min；6.倾出上清液，再用1#试剂50ml重悬细胞，洗涤23次；7.计数细胞总数和测定细胞活力，备用；8.最后将清洗干净的单核细胞转入隔天已包被好的细胞培养瓶中培养。27.注意事项：整个过程要严格无菌操作；将血加入淋巴细胞分离液时，必须保持两种液体界面清晰；用滴管吸取淋巴细胞层

13、时，要掌握好力度，在细胞层上作各方向吸取，勿吸入其他层液体；操作应轻柔，细胞悬液要充分混匀，避免损伤细胞活力及丢失细胞。28.CIK细胞制备（SOP）1.取血库浓缩白细胞血1U（或自体血60ml）；2.用人淋巴细胞分离液，11或11.5分离单核淋巴细胞，2000rpm离心20min，取上层血浆至另一50ml离心管内，于56灭活30min，3000rpm离心10min，4保存备用；3.吸取白环层单核淋巴细胞，置50ml离心管内，用1号试剂，洗涤23次，2000rpm离心10min；4.用2号试剂调节细胞浓度至2-3106/ml；5.加入已包被CIK-1的75cm细胞培养瓶内培养，每瓶30ml；6

14、.24h后，补加培养基10ml（内含CIK-3、CIK-4、CIK-5各一支）；7.再培养2448h后，视细胞状态用CIK培养基，将细胞一扩二培养；29.8.以后每23d传代一次。10d后，取细胞悬液送外检（检测细菌、真菌、支原体，结果为阴性方可用）；9.14d后，收集细胞，用于细胞治疗；10.收集治疗：将生长旺盛的CIK细胞，收集，离心，留样并进行无菌检验，洗涤23次，计数细胞数和测定细胞活力（每次输入细胞数要2109，细胞活力95%）；11.用一次性无菌滤器过滤细胞；12.将细胞悬浮于50100ml的生理盐水中IL-210万单位人白蛋白10ml，混合，封口，用输血速度给病人静脉滴注，2h内

15、输完；13.一个疗程为5次，病人可连续输入细胞，也可隔天输入（临床医生决定）。30.培养到7天的CIK31.培养到11天的CIK32.后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用33.主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！34.致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求35.感感谢您的您的观看和下看和下载The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field36.