自身抗体检测及应用课件.ppt

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1、自身抗体检测及应用自身抗体检测及应用彭彭 晓晓 东东自身免疫自身免疫(autoimmunity)机机体体免免疫疫系系统统针针对对自自身身成成分分发发生生免免疫疫应应答答反反应应，出出现现自自身身抗抗体体或或致致敏敏淋淋巴巴细细胞胞的现象。的现象。自身抗体自身抗体(autoantibody)针针对对自自身身组组织织器器官官、细细胞胞及及细细胞胞内内成成分的抗体。分的抗体。概概念念自身免疫性疾病自身免疫性疾病(autoimmunedisease，AID)因自身免疫反应导致组织器官损伤因自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。或功能障碍所致疾病。自身抗体的特性自身抗体的特性自身免疫性疾病的重

2、要标志自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤参与免疫病理性损伤检测自身抗体常用的方法检测自身抗体常用的方法间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIFIIF）ELISAELISA免疫印迹法免疫印迹法（Western-blotWestern-blot）酶免疫斑点法酶免疫斑点法 常检测的自身抗体常检测的自身抗体类风湿因子（类风湿因子（RFRF）抗核抗体（抗核抗体（ANAANA）抗可提取性核抗原抗体（抗可提取性核抗原抗体（ENAENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAANCA）抗角蛋白抗

3、体（抗角蛋白抗体（AKAAKA）抗心磷脂抗体（抗心磷脂抗体（ACAACA）类风湿因子类风湿因子（rheumatoidfactor,RF）抗变性抗变性IgGFc的自身抗体，主要类型是的自身抗体，主要类型是IgM型型致病机理：致病机理：RF与体内变性与体内变性IgG结合形成免疫复合物，激结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。检测方法：检测方法：1.胶乳颗粒凝集实验胶乳颗粒凝集实验定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定定性、半定量，敏感性和特异性不高，测

4、定IgM-RF2.速率散射比浊法（速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE）定量、准确、快速，测定定量、准确、快速，测定IgM-RF3.ELISA定量、准确，可测定不同类型的定量、准确，可测定不同类型的RF临床应用：临床应用：（1）RF在在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。疾病患者中均可被检出。疾病疾病阳性率阳性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25（2）RF滴度与滴度与RA患者临床表现呈正相关，患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。时通

5、常提示患者预后不良。（3）IgG-RF与与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关，常伴随症状密切相关，常伴随IgM-RF同时出现，同时出现，在正常人及非在正常人及非RA患者中很难检出。患者中很难检出。（4）IgA-RF与与RA患者关节症状的严重程度及骨患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。质破坏有显著相关性。临床应用：临床应用：抗核抗体抗核抗体（antinuclearantibody，ANA）以真核细胞（如以真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。抗体的总称。分类

6、和命名分类和命名1.以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗抗Sa抗体等；抗体等；2.以以相相关关疾疾病病命命名名，如如抗抗Scl-70、抗抗SS-A、抗抗SS-B抗体等；抗体等；3.以以抗抗原原的的部部位位命命名名，如如抗抗核核仁仁抗抗体体、抗抗线线粒粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；4.以以抗抗原原的的化化学学性性质质进进行行分分类类命命名名，如如抗抗DNA、抗抗RNP、抗组蛋白抗体等。抗组蛋白抗体等。抗核抗体检测方法抗核抗体检测方法间接免疫荧光法间接免疫荧光法（indirectimmunofluorescen

7、ce,IIF）酶免疫斑点法酶免疫斑点法ELISA免疫印迹法免疫印迹法（Western-blot）间接免疫荧光法间接免疫荧光法HEp-2细胞细胞肝组织切片肝组织切片荧光标记抗体荧光标记抗体病人血清（待检抗体）病人血清（待检抗体）细胞核细胞核细胞浆细胞浆细胞骨架细胞骨架细胞周期细胞周期均质型均质型核糖体型核糖体型肌蛋白型肌蛋白型中心体型中心体型斑点型斑点型线粒体型线粒体型波形纤维蛋白型波形纤维蛋白型纺缍体型纺缍体型核仁型核仁型高尔基体型高尔基体型细胞角蛋白型细胞角蛋白型纺缍丝型纺缍丝型着丝点型着丝点型溶酶体型溶酶体型原肌球蛋白型原肌球蛋白型中间体型中间体型周边型周边型颗粒型颗粒型纽带蛋白型纽带蛋白

8、型PCNA型型核点型核点型(dots)结蛋白结蛋白(桥粒桥粒)型型IIFIIF检测检测ANAANA荧光染色模型荧光染色模型斑点型（斑点型（nRNPnRNP/SmSm）高滴度的抗高滴度的抗U1-nRNP为为MCTD的特征。的特征。抗抗SmSm抗体对抗体对SLESLE具有高度特具有高度特异性。异性。斑点型（斑点型（SSA/SSBSSA/SSB）抗抗SSA最常出现于最常出现于SS及新生儿红及新生儿红斑狼疮斑狼疮（100%）。）。抗抗SSB抗体几乎仅抗体几乎仅见于女性，可出现于见于女性，可出现于SS和和SLE。均质型均质型抗抗dsDNA抗体抗体抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体(histone)抗抗ssDNA抗

9、体抗体抗核小体抗体抗核小体抗体(nucleosome)抗抗dsDNA抗体抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。特异性抗体，与病情活动度相关。周边型周边型可见于可见于胶原病、胶原病、PBC、CAH等患者等患者核点型（核点型（DOTSDOTS）见于见于SLE、SS、PBC、风湿病。风湿病。抗着丝点型抗着丝点型 PSS局限型标志抗体。局限型标志抗体。抗原纤维蛋白型抗原纤维蛋白型 仅见于仅见于5%-10%的的PSS，男性高于女性。，男性高于女性。抗抗RNARNA多聚酶多聚酶型抗体型抗体仅见于硬皮病患者，阳性率为仅见于硬皮病患者，阳性率为4%。抗抗PM-PM-SclScl（PM-1PM-1）抗体抗体见

10、于重叠综合征（多发性肌炎见于重叠综合征（多发性肌炎PM/皮肌炎皮肌炎DM/弥漫性弥漫性PSS）抗抗SclScl-70-70型型 PSS弥漫型的标志抗体。弥漫型的标志抗体。增殖细胞核抗原增殖细胞核抗原型型（PCNAPCNA）SLE特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关。特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关。抗核糖体抗核糖体P P蛋白蛋白（rib-Prib-P）抗体抗体抗线粒体抗体抗线粒体抗体（AMAAMA）SLE标志抗体标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体抗抗Jo-1Jo-1抗体抗体抗高尔基体抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（多发性肌炎（PM）标志抗体标志抗体偶

11、见于偶见于SLE和和SS抗肌动蛋白抗体抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎见于自身免疫性慢性活动型肝炎 抗抗ENAENA抗体谱抗体谱ENA(extractablenuclearantigen)：可提取核抗原的总称可提取核抗原的总称临床常检测的抗临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括：抗体谱主要包括：抗抗Sm抗抗U1-RNP抗抗SSA抗抗SSB抗抗Jo-1抗抗Scl-70抗抗rib-P蛋白蛋白检测方法检测方法双向免疫扩散（双向免疫扩散（ID）对流免疫电泳（对流免疫电泳（CIE）免疫印迹法（免疫印迹法（Western-blot）ELISA酶免疫斑点法酶免疫斑点法免疫印迹法免疫印迹法SDS-PAG

12、E电泳电泳转移电泳转移电泳酶免疫检测酶免疫检测是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。抗中性粒细胞胞浆抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）荧光染色型荧光染色型靶抗原靶抗原胞浆型胞浆型(cANCA)蛋白酶蛋白酶3（PR3）杀菌杀菌/通透性增高蛋白（通透性增高蛋白（BPI）

13、核周型核周型(pANCA)髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）组织蛋白酶组织蛋白酶G（Cath-G）乳铁蛋白（乳铁蛋白（LF）白细胞弹性蛋白酶（白细胞弹性蛋白酶（HLE）非典型型非典型型(aANCA)兼有两种特性兼有两种特性 ANCAANCA荧光染色型与靶抗原荧光染色型与靶抗原周边型抗中性粒细胞胞浆抗体周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCApANCA）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCAcANCA)主要见于主要见于Wegeners肉芽肿及微小多动脉炎肉芽肿及微小多动脉炎 ANCA

14、ANCA临床应用临床应用髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新与显微镜下多血管炎、坏死性新月体型肾小球肾炎月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关过敏性肉芽肿性血管炎相关、杀菌杀菌/通透性增高蛋白（通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病主要见于肺部炎症性疾病并与长并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系期慢性绿脓杆菌感染有一定关系蛋白酶蛋白酶3（PR3）与与Wegeners肉芽肿（肉芽肿（WG）密切相关。密切相关。仅仅cANCA诊断诊断WG的特异性大于的特异性大于90%，联合，联合PR3可超过可超过95%，活动期几乎活动期几乎100%阳性。阳性。组织蛋白酶组织蛋白

15、酶G(Cath-G)白细胞弹性蛋白酶白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白乳铁蛋白(LF)可可见于见于SLE、IBD、PBC、PSC等等AKA主要见于主要见于RA，阳性率，阳性率36%59%，特异性特异性95%99%，其，其出现可以先于临床表现；出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的高滴度可预示较严重的RA类型。类型。抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体（AKAAKA）主要见于溃疡性结肠炎主要见于溃疡性结肠炎，部分克罗恩病患者也可部分克罗恩病患者也可检出。与检出。与ANCA同时检测，对溃疡性结肠炎诊断的准确同时检测，对溃疡性结肠炎诊断的准确性可达性可达72%。抗小肠杯状细胞抗体抗小肠杯状细胞抗体（AGCA

16、AGCA）新患新患1型糖尿病时，该抗体的发生率在型糖尿病时，该抗体的发生率在90%以上。以上。2型糖尿病患者若出现该抗体，则型糖尿病患者若出现该抗体，则以后可能会发生以后可能会发生1型糖尿病。型糖尿病。抗胰岛细胞抗体抗胰岛细胞抗体（AICAAICA）ASMA为自身免疫性肝炎为自身免疫性肝炎型的血清学标志型的血清学标志抗体，阳性率大于抗体，阳性率大于90%，高滴度对疾病诊断特，高滴度对疾病诊断特异性几乎达到异性几乎达到100%。抗平滑肌抗体抗平滑肌抗体（ASMAASMA）LKM-1是自身免疫性肝炎是自身免疫性肝炎型的血清学标志型的血清学标志抗肝肾微粒体抗体抗肝肾微粒体抗体（LKMLKM）自身免疫

17、性肝炎自身免疫性肝炎型的血清标志抗体，大型的血清标志抗体，大约有约有25%的自身免疫性肝炎仅该项抗体阳性。的自身免疫性肝炎仅该项抗体阳性。抗可溶性肝抗原抗体抗可溶性肝抗原抗体（SLASLA）一一组组针针对对含含有有磷磷脂脂结结构构抗抗原原物物质质的的自自身身抗抗体体，主主要要包包括括抗抗心心磷磷脂脂抗抗体体、抗抗磷磷脂脂酸酸抗抗体体和抗磷脂酰丝氨酸抗体。和抗磷脂酰丝氨酸抗体。靶靶抗抗原原：血血浆浆中中的的磷磷脂脂结结合合蛋蛋白白，最最常常见见的的有有22糖糖蛋蛋白白、凝凝血血酶酶原原或或这这些些蛋蛋白白与与心磷脂的复合物，特点是都含有磷脂基团。心磷脂的复合物，特点是都含有磷脂基团。抗磷脂抗体抗

18、磷脂抗体（anti-anti-phospholipidphospholipid antibody,APLA antibody,APLA）致致病病机机理理：抗抗磷磷脂脂抗抗体体与与内内皮皮细细胞胞或或血血小小板板膜膜上上的的磷磷脂脂结结合合，可可破破坏坏细细胞胞功功能能，使使前前列列环环素素释释放放减减少少、血血小小板板粘粘附附凝凝集集功功能能增增强强，构构成成血血液液的的高高凝凝状状态态、引引起起血血栓栓形形成成；与与红红细细胞胞膜膜上上的的磷磷脂脂结结合合，在在补补体体参参与与下下，可可致致红红细细胞胞膜膜破破裂裂，发发生溶血性贫血。生溶血性贫血。类类型型：IgG、A、M型型，IgG型型最最

19、常常见见，其其次次是是IgM型，型，IgA型与自身免疫性疾病的关系较小。型与自身免疫性疾病的关系较小。抗磷脂抗体抗磷脂抗体（APLAAPLA）抗心磷脂抗体抗心磷脂抗体（ACLAACLA）检测方法：检测方法：常用常用ELISA临床应用：临床应用：在在SLE中中总总阳阳性性检检出出率率达达70%80%，与与病病情情活活动动显显著著相相关关；ACA阳阳性性者者发发生生血血管管炎炎、溶溶血血性性贫贫血血、心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。在在RA患者阳性率为患者阳性率为33%49%。ACA阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。与反复自

20、然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性 部分自身免疫性疾病中部分自身免疫性疾病中 自身抗体的检出率自身抗体的检出率自身免疫性疾病自身免疫性疾病ANAANA阳性率（阳性率（%）SLE80100MCTD95100RA2040PSS8595PM/DM3050SS7080溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎26慢性活动性肝炎慢性活动性肝炎3040其它风湿病其它风湿病2050ANAANA在自身免疫性疾病中的检出率在自身免疫性疾病中的检出率 疾病类型疾病类型抗原类型抗原类型阳性率阳性率%SLEdsDNA3090U1-nRNP1540Sm530SSA2060SSB1020PCNA3

21、核糖体核糖体（rib）520心磷脂心磷脂2040新生儿新生儿LESSA100药物诱导药物诱导LE组蛋白组蛋白95单链单链DNA80系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮(SLE)抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%)U1-nRNP95100单链单链DNA2050混合性结缔组织病（混合性结缔组织病（MCTDMCTD）抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）IgM-RF6590抗角蛋白抗体（抗角蛋白抗体（AKA）3659单链单链DNA8组蛋白组蛋白少见少见类风湿性关节炎类风湿性关节炎（RARA）抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）SSA4095SSB4095ssDNA3060唾液腺流出道唾液腺流出道4060RF6

22、080原发性干燥综合征（原发性干燥综合征（SSSS）PSSPSS类型类型相对应的抗原相对应的抗原 阳性率阳性率（%）弥漫型弥漫型原纤维蛋白原纤维蛋白510PM-Scl（PM-1）3Scl-702575RNA多聚酶多聚酶4局限型局限型着丝点着丝点8095进行性系统性硬化症进行性系统性硬化症（PSSPSS）抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）PM-Scl（PM-1）8Jo-12535Mi-110Mi-25Ku（重叠综合征）重叠综合征）3055单链单链DNA4050PL-74PL-123多发性肌炎多发性肌炎/皮肌炎皮肌炎(PM/DM)PM/DM)自身免疫性慢性活动性肝炎自身免疫性慢性活动性肝炎(AI

23、H)抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）肌动蛋白（肌动蛋白（Actin）4090ANA(板层素，板层素，SSA等等)3040肝肾微粒体（肝肾微粒体（LKM-1）7可溶性肝抗原（可溶性肝抗原（SLA）100线粒体线粒体2型（型（AMA-M2）510线粒体线粒体9型（型（AMA-M9）10原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化(PBC)抗原类型抗原类型阳性率（阳性率（%）线粒体线粒体2型（型（M2）95线粒体线粒体4型（型（M4）55线粒体线粒体8型（型（M8）55线粒体线粒体9型（型（M9）3585核点核点30板层素板层素2怀疑怀疑SLE，怎么办？怎么办？问题问题常规检测程序常规检测程序ANA筛选

24、筛选ENA抗体谱抗体谱抗胞浆型抗体鉴定抗胞浆型抗体鉴定其它自身抗体其它自身抗体免疫球蛋白、免疫球蛋白、补体等检测补体等检测+（）（）95%99%可排除可排除SLESLE治疗缓解治疗缓解病情特重（大量病情特重（大量IC沉积消耗抗体）沉积消耗抗体）（）（）低滴度低滴度常见于常见于RA等其它自身免疫性疾病等其它自身免疫性疾病高滴度可作为诊断高滴度可作为诊断SLE的依据的依据ENA抗体谱检测抗体谱检测（）（）不能排除不能排除抗抗dsDNA、Sm、rib抗体抗体（）（）可帮助诊断可帮助诊断ANA初筛初筛标志抗体标志抗体相关疾病相关疾病dsDNASLESmSLESSBSS着丝点抗体着丝点抗体PSS（局限型）局限型）Scl-70抗体抗体PSS（弥漫型）弥漫型）AKARAJo-1抗体抗体PM/DM高滴度高滴度RNP抗体抗体MCTD肝肾微粒体抗体肝肾微粒体抗体（LKM-1）型自身免疫性肝炎型自身免疫性肝炎平滑肌抗体（平滑肌抗体（SMA）型自身免疫性肝炎型自身免疫性肝炎AMA（M2）PBC常见自身免疫性疾病的标志抗体常见自身免疫性疾病的标志抗体