培养基适用性检查标准操作规程.pdf

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1、培养基适用性标准操作规程培养基适用性标准操作规程1 1目的目的规范培养基适应性检查的标准操作。2 2范围范围本规程适用于中华人民共和国药典中华人民共和国药典2010 年版二部规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査。3 3责任责任3.1本规程由质量保证中心主任指定人员起草。3.2 与本文件相关的部门负责人参与审阅，企业质量负责人批准本文件。3.3 质量控制中心负责具体实施本规程。4 4内容内容4.1依据4.1.1 药品生产质量管理规范药品生产质量管理规范（2010 年修订）4.1.2 中华人民共和国药典中华人民共和国药典2010 年版二部4.2试

2、验用菌株及培养基试验用培养基试验用菌株菌液配制用培养基大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌玫瑰红钠琼脂改良马丁培养基或改白色念珠菌良马丁琼脂培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基改良马丁琼脂斜面培黑曲霉养基适用性检查培养基适用性检查对照培养基营养肉汤培养基或营营养琼脂培养基养琼脂培养基对照营养琼脂培养基对照玫瑰红钠琼脂培养基对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基对照玫瑰红钠琼脂培养基培养基玫瑰红钠琼脂培养基4.3试验用仪器设备4.3.1 恒温培养箱（3035）、霉菌培养箱（2328）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.3.2 锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管

3、及塞、吸管（1ml 分度，10ml 分度）4.3.3 接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。4.4操作步骤4.4.1 菌液的制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于 3035培养 1824h。取 3035培养 1824h 的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物 1ml，用%无菌氯化钠溶液 10 倍递增稀释制成每 1ml含菌数 50100cfu 的菌悬液，备用。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于2328培养 2448h。取于2328培养 2448h 的白色念珠菌新鲜培养物 1m

4、l，用%无菌氯化钠溶液 10 倍递增稀释每 1ml 含菌数 50100cfu 的菌悬液备用。接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于 2328培养 57 天，加入 3%（ml/ml)聚山梨酸酯 80 的%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含%（ml/ml)聚山梨酸酯 80 的%无菌氯化钠溶液 10 倍递增稀释制成每 1ml 含孢子数 50100cfu 的孢子悬液备用。4.4.2 菌液的计数（每种菌液制备 2 个平皿）大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液 1ml（含菌数 50100cfu）接种至营养琼脂培养基上，3035培养 48h

5、，白色念珠菌和黑曲霉菌 1ml（含菌数 50100cfu）接种至改良马丁琼脂培养基上，2328培养 72h，计数。4.4.3 适用性检查实验操作培养基的配制：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。营养琼脂培养基的适用性检查取 7 个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各 2 皿，每皿接种 1ml 菌液（含菌 50100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于 3035倒置培养 48h，计数。被检培养基同法操作。玫瑰红钠

6、琼脂培养基的适用性检查取 5 个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各 2 皿，每皿接种 1ml 菌液（含菌 50100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于 2328倒置培养 72h，计数。被检培养基同法操作。酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的适用性检查取 3 个无菌平皿，分别接种白色念珠菌 2 皿，每皿接种 1ml 菌液（含菌 50100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于 2328倒置培养 72h，计数。被检培养基同法操作。4.5结果判断：若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。