中药药理实验方法学课件.ppt
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1、药理实验实验方法学药理实验实验方法学第二讲第二讲中药药理研究的基本知识(中药药理研究的基本知识(2)第三节第三节 实验设计实验设计主要内容主要内容五、实验数据的整理五、实验数据的整理一、基本原则一、基本原则二、实验对象二、实验对象 三、效应指标三、效应指标四、剂量设计四、剂量设计一一基本原则基本原则对照原则对照原则随机原则随机原则重复原则重复原则(一)、对照原则(一)、对照原则 常用的对照形式:常用的对照形式:(1)组间对照)组间对照(2)自身对照)自身对照(3)配对对照)配对对照(1 1)组间对照)组间对照正常对照组(空白对照、阴性对照、溶媒对正常对照组(空白对照、阴性对照、溶媒对照);照)
2、;假手术对照组假手术对照组模型对照组模型对照组 阳性对照组阳性对照组 阳性对照阳性对照阳性对照阳性对照意义:意义:意义:意义:检验实验体系是否可靠检验实验体系是否可靠检验实验体系是否可靠检验实验体系是否可靠 粗略估计受试药与对照药相比,作用强度与特点上粗略估计受试药与对照药相比,作用强度与特点上粗略估计受试药与对照药相比,作用强度与特点上粗略估计受试药与对照药相比,作用强度与特点上有哪些差异。有哪些差异。有哪些差异。有哪些差异。(2 2)自身对照)自身对照 观察同一个体给药前、后的区别观察同一个体给药前、后的区别。被检药物。被检药物和阳性药在同一个体上的作用比较。和阳性药在同一个体上的作用比较
3、。(3 3)配对对照)配对对照 差异最小的两个个体配成一对,一个给予受差异最小的两个个体配成一对,一个给予受试药,一个给予对照药。试药,一个给予对照药。(二)、(二)、随机原则随机原则目的:目的:(1)避免非研究因素影响。避免非研究因素影响。(2)除研究因素外,提高各比较组的其他除研究因素外,提高各比较组的其他因素的均衡性、可比性。因素的均衡性、可比性。随机分组的方法:随机分组的方法:(1 1)抽签随机法:)抽签随机法:例:例:3030只小鼠,要求随机分为只小鼠,要求随机分为3 3组:组:可先将可先将3030只小鼠按只小鼠按1 1至至3030编号,做编号,做1-301-30号签,号签,充分混合
4、号签后,随机各取充分混合号签后,随机各取1010枚为一组。枚为一组。(2 2)随机数字表法(或随机排列表法):)随机数字表法(或随机排列表法):1515只小鼠,要求随机分为只小鼠,要求随机分为3 3组组.在随机数字表在随机数字表中确定某个数字开始,随机选取数字方向,中确定某个数字开始,随机选取数字方向,得到一组随机数字,除以组数,得到余数,得到一组随机数字,除以组数,得到余数,根据余数编组根据余数编组:顺序号顺序号:A A组:组:1 1,9 9,1212,1313,1515B B组组:2:2,3 3,5 5,7 7,1010,1111C C组:组:4 4,6 6,8 8,1414按原随机数字顺
5、序继续抄一随机号按原随机数字顺序继续抄一随机号:08除以除以6余数余数:2,将将B组第二只,即组第二只,即3号小鼠编入号小鼠编入C组。组。调整后各组的编号调整后各组的编号:A A 组:组:1 1,9 9,1212,1313,15 15 B B 组:组:2 2,5 5,7 7,1010,11 11 C C 组组:3:3,4 4,6 6,8 8,1414 练习:练习:2020个小鼠,根据下例随机数顺序,将其随机个小鼠,根据下例随机数顺序,将其随机分成分成4 4组。组。取随机数字表中取随机数字表中随机号:随机号:22 17 68 65 81 68 95 23 92 3522 17 68 65 81
6、68 95 23 92 35 87 02 22 57 51 61 09 43 95 06 87 02 22 57 51 61 09 43 95 06 58 24 82 03 47 58 24 82 03 47鼠号:鼠号:1 2 3 4 5 6 7 8 9 101 2 3 4 5 6 7 8 9 10随机号:随机号:22 17 68 65 81 68 95 23 92 3522 17 68 65 81 68 95 23 92 35除以除以4 4余数:余数:2 1 0 1 1 0 3 3 0 32 1 0 1 1 0 3 3 0 3鼠号:鼠号:11 12 13 14 15 16 17 18 19
7、2011 12 13 14 15 16 17 18 19 20随机号:随机号:87 02 22 57 51 61 09 43 95 06 87 02 22 57 51 61 09 43 95 06 除以除以4 4余数:余数:3 2 2 1 3 1 1 3 3 23 2 2 1 3 1 1 3 3 2随机号(备用):随机号(备用):58 24 82 03 4758 24 82 03 47根据余数分组鼠号:根据余数分组鼠号:A A组组(余数(余数1 1):):2 4 5 14 16 17 2 4 5 14 16 17 B B组组(余数(余数2 2):):1 12 13 201 12 13 20C
8、C组(余数组(余数3 3):):7 8 10 11 15 18 197 8 10 11 15 18 19D D组(余数组(余数0 0):):3 6 93 6 9随机号(备用):随机号(备用):58 24 82 03 4758 24 82 03 4758/6余数为余数为4,即,即A组第组第4个动物(个动物(14号)编入号)编入B组。组。根据余数分组鼠号:根据余数分组鼠号:A A组:组:2 4 5 16 17 2 4 5 16 17 B B组:组:1 12 13 20 141 12 13 20 14C C组组:7 8 10 11 15 18 197 8 10 11 15 18 19D D组组:3
9、6 93 6 9随机号(备用):随机号(备用):58 58 24 82 03 4724 82 03 4724/7余数为余数为3,即,即C组第组第3个动物(个动物(10号)编入号)编入D组。组。根据余数分组鼠号:根据余数分组鼠号:A A组:组:2 4 5 16 17 2 4 5 16 17 B B组:组:1 12 13 20 141 12 13 20 14C C组组:7 8 11 15 18 197 8 11 15 18 19D D组组:3 6 9 10 3 6 9 10 随机号(备用):随机号(备用):58 2458 24 82 03 47 82 03 4782/6余数为余数为4,即,即C组第
10、组第4个动物(个动物(15号)编号)编入入D组。组。调整后随机分组的结果为(按动物号):调整后随机分组的结果为(按动物号):A A组:组:2 4 5 16 17 2 4 5 16 17 B B组:组:1 12 13 20 141 12 13 20 14C C组:组:7 8 11 18 197 8 11 18 19D D组:组:3 6 9 10 153 6 9 10 15学生练习题一学生练习题一30个小鼠,根据下例随机数顺序,将其随机个小鼠,根据下例随机数顺序,将其随机分成分成5 5组。组。取取随机数字:随机数字:37 56 08 18 09 77 53 84 46 4737 56 08 18
11、09 77 53 84 46 4731 91 18 95 58 24 16 74 11 5331 91 18 95 58 24 16 74 11 534444 10 13 85 57 61 65 61 68 66 10 13 85 57 61 65 61 68 663737 27 47 39 19 84 83 70 07 48 27 47 39 19 84 83 70 07 48(3 3)分层随机)分层随机先将需严格控制的主要因素,如性别、体先将需严格控制的主要因素,如性别、体重等分为不同类别,或层次;在每一类别重等分为不同类别,或层次;在每一类别或层次中分别随机分成一定组。或层次中分别随机分
12、成一定组。将每一类别或层次随机分成的组将每一类别或层次随机分成的组,组次相同组次相同的分别合并。的分别合并。(三)、(三)、重复原则重复原则 目的:目的:验证在类似的条件是否可获得结果的验证在类似的条件是否可获得结果的重现以及结果的变异情况重现以及结果的变异情况 。要点:要点:A.A.确定适当的样本数。确定适当的样本数。B.B.各组动物数目尽量相同。各组动物数目尽量相同。按动物类型确定样本数:按动物类型确定样本数:(1 1)小动物:计量)小动物:计量1010例例;计数计数20-20-3030例例(2 2)中等动物:计量)中等动物:计量8 8例例;计数计数2020例例(3 3)大动物:)大动物:
13、5-65-6例例二、实验对象二、实验对象(一一)、受试动物、受试动物1 1、按要求选择不同级别符合医学实验标准的动物、按要求选择不同级别符合医学实验标准的动物一级:普通动物(亦称常规动物或无疾病的动物);一级:普通动物(亦称常规动物或无疾病的动物);二级:清洁动物(饲养在温度恒定,普通设施中的动二级:清洁动物(饲养在温度恒定,普通设施中的动物,饲料、垫料,用具均经过高压消毒);物,饲料、垫料,用具均经过高压消毒);三级:无特殊病原体动物(三级:无特殊病原体动物(specific-pathogenfree,简称简称SPF动物);在清洁级基础上还需不带动物);在清洁级基础上还需不带干扰实验的微生物
14、,在隔离室或层流室饲养干扰实验的微生物,在隔离室或层流室饲养。四级:无菌动物(机体内外均无任何寄生虫的动物,四级:无菌动物(机体内外均无任何寄生虫的动物,一般是临产前按无菌手术一般是临产前按无菌手术剖腹取出胎仔,在无菌剖腹取出胎仔,在无菌条件下用无菌饲料繁养获得的动物)。条件下用无菌饲料繁养获得的动物)。2 2、根据实验目的选择敏感种系、根据实验目的选择敏感种系(不同种属动物对药物敏感性、药物代谢动力学不同)原则原则:选择对药物的反应与人体相近的种系。选择对药物的反应与人体相近的种系。热源实验:热源实验:家兔,对热敏感性高。家兔,对热敏感性高。测定胆汁流量:测定胆汁流量:大鼠,无胆囊,可以胆管
15、插管。大鼠,无胆囊,可以胆管插管。心血管系统心血管系统:大鼠、猫、犬等。大鼠、猫、犬等。呕吐实验:呕吐实验:鸽、猫或狗等。鸽、猫或狗等。抗肿瘤实验:抗肿瘤实验:裸鼠,免疫功能缺陷。裸鼠,免疫功能缺陷。过敏试验:过敏试验:豚鼠敏感。豚鼠敏感。组织胺:可引起豚鼠哮喘的发生,但对家可引起豚鼠哮喘的发生,但对家兔引起的是血管的收缩和右心室功能的衰兔引起的是血管的收缩和右心室功能的衰竭。竭。苯:家兔:白细胞减少及造血器官发育不家兔:白细胞减少及造血器官发育不全;犬:白细胞增多,脾脏和淋巴结增生。全;犬:白细胞增多,脾脏和淋巴结增生。3 3、性别、性别 :根据要求选择:根据要求选择 用一种性别比两种性别兼
16、用所得结果离散用一种性别比两种性别兼用所得结果离散度较小。通常优选雄性或雌雄各半。度较小。通常优选雄性或雌雄各半。4 4、年龄体重、年龄体重 每批动物的体重,年龄越接近越好每批动物的体重,年龄越接近越好 通常:通常:小鼠小鼠:18-22g:18-22g,大鼠,大鼠:200:20025g25g,豚鼠豚鼠:250-300g:250-300g,兔、猫,兔、猫:1.5-2Kg,:1.5-2Kg,犬犬:10-15kg:10-15kg。大鼠、小鼠大鼠、小鼠:6-8:6-8周龄周龄 5 5、数量、数量 计量研究:小鼠每组计量研究:小鼠每组1010只只 大鼠每组大鼠每组8 8只只 豚鼠或兔每组豚鼠或兔每组6
17、6只只 猪或犬猪或犬5 5只只 计数研究:大、小鼠每组计数研究:大、小鼠每组 20-3020-30只只 6 6、习性、习性:小鼠、大鼠均为群居动物,不宜单独饲养。小鼠、大鼠均为群居动物,不宜单独饲养。7 7 实验条件控制实验条件控制 时辰:时辰:动物生理活动有其昼夜节律,如小鼠夜动物生理活动有其昼夜节律,如小鼠夜间活动增加,白天活动减少。最好每批实间活动增加,白天活动减少。最好每批实验在每天相同的时间测定。验在每天相同的时间测定。环境温度:环境温度:室温稳定、适宜。室温稳定、适宜。饮食:饮食:有些实验需对动物禁食。有些实验需对动物禁食。适应:适应:3 37 7天。天。(二)(二)受试药受试药
18、1.1.制备情况制备情况(1)新药受试药要求:用处方固定,质量稳定、工艺、)新药受试药要求:用处方固定,质量稳定、工艺、质控指标恒定后的中试产品。质控指标恒定后的中试产品。(2)一般受试中药:生药经鉴定,科属种清楚;提取)一般受试中药:生药经鉴定,科属种清楚;提取制备工艺明确,含量确定。制备工艺明确,含量确定。(3)单体:化学结构式清楚。)单体:化学结构式清楚。(4)在注射给药或离体试验时应注意药物中杂质、不)在注射给药或离体试验时应注意药物中杂质、不溶物质、无机离子及酸碱度等因素对实验的干扰。溶物质、无机离子及酸碱度等因素对实验的干扰。2 2、给药途径给药途径 实验的给药途径与临床拟使用的途
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