刺激性、过敏性和溶血性研究试验概述.pdf

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1、刺激性、过敏性和溶血性研究试验概述刺激性、过敏性和溶血性研究试验概述1 1对试验设计和方法评价对试验设计和方法评价1.1.1.过敏试验（ASA）使用豚鼠，隔日1次，共3次腹腔注射致敏，末次注射后第14日各组分别一次快速静脉内给予相应的为致敏剂量的4倍量药激发。1.2.大鼠被动皮肤过敏试验（PCA）实验，致敏3次，隔日一次，末次致敏后12天股动脉放血，制备抗血清及其4个稀释液，在大鼠背部分别皮内注射相应的抗血清4个稀释液4个点位进行被动致敏，24小时后激发：各组静脉注射（iv）与致敏剂量相同的激发抗原加等量的0.5%伊文思兰染料，30分钟后麻醉处死大鼠，剪开背部皮肤，测量皮肤内层的斑点大小。1.

2、3.体外溶血和红细胞凝聚试验，试管内加2红细胞的混悬液（兔血制备），及不同浓度EN-9肽溶液，并设阴阳对照，370.5温育3小时。1.4.家兔注射给药部位局部刺激性试验，同体自身对比，每只左侧股部肌肉注射（im）生理盐水，右侧股部分别im EN-9肽的低剂量0.5mg/kg、高剂量2.5mg/kg。1/次/兔/天，连续7天，每天注射同一部位，分别在最后一次给药后（d7）当天和48小时（d9）每组处死2只家兔，对每组留下的2只家兔继续观察14天，对给药部位肉眼观察和组织病理学检查2.2.对结果分析和评价2.1.过敏试验（ASA）EN-9肽低剂量0.76mg/kg和高剂量3.8mg/kg组的豚鼠全

3、部呈阴性过敏反应，过敏反应发生率为0%。2.2.大鼠被动皮肤过敏试验（PCA）实验，EN-9肽低剂量0.88mg/kg和高剂量4.4mg/kg，组大鼠皮肤内层基本无斑点，全部为阴性。2.3.体外溶血和红细胞凝聚试验，EN-9肽试管内溶液3小时内上清液呈无色澄明，无絮状物，且红细胞全部下沉，表明受试物EN-9肽没发生溶血和凝聚。2.4.家兔注射给药部位局部刺激性试验，注射后期EN-9肽的低剂量（0.5mg/kg）组有部分家兔注射部位触摸有黄豆大小硬结；停药后48小时（d9）硬结消失，停药后14天恢复正常，高剂量（2.5mg/kg）组家兔注射部位触摸有黄豆大小硬结，停药后48小时（d9）仍有硬结，

4、停药后14天后硬结消失，组织病理学检查多数家兔注射部位有组织水肿，血管扩张，出血及小淋巴细胞浸润及毛细血管增生，形成局灶肉芽组织，成纤维细胞和血管内皮细胞增生，比低剂量组严重，停药后14天恢复期仅见皮下水肿，无局灶肉芽组织、成纤维细胞和血管内皮细胞增生等。受试物血清胸腺9肽在全身主动过敏试验（ASA）中无过敏反应发生，对大鼠被动皮肤过敏试验（PCA）呈阴性反应，不发生溶血和凝聚反应，可以注射使用；EN-9肽虽可造成部分家兔注射部位有硬结，组织病理学检查表明有炎症细胞浸润，血管扩张，出血及小淋巴细胞浸润及毛细血管增生，形成局灶肉芽组织，成纤维细胞和血管内皮细胞增生等，但停药 14天恢复期后硬结消失，组织病理学检查也表明上述现象减轻或消失，表明注射部位的刺激具有可逆性，随着停药可恢复正常。