常用缓冲液配置.pdf

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1、实验室常用缓冲液配置方案实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)1)1 M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1.称量 121.1 g Tris置于 1 L 烧杯中。2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH 值。PH 值浓 HCl7.4约 70ml7.6约 60ml8.0约 42ml4.将溶液定容至 1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，因为 Tris溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度

2、每升高 1，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。2)102)10TE Buffer(pH7.4,7.6,8.0)TE Buffer(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。100ml1M TrisHCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）500mM EDTA(PH8.0)20ml2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至 1 L 后，高温高压灭菌。4.室温保存。3)1.5 M Tris-HCl(pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris

3、-HCl配制量：1 L配制方法：1.称量 181.7 g Tris置于 1 L 烧杯中。2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节 pH 值至 8.8。4.将溶液定容至 1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，因为 Tris溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高 1，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。4)3 M4)3 M 醋酸钠醋酸钠(pH5.2)(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量 40.8g NaAc3H2O 置于 100-200ml 烧杯中，加入月 40ml 的去离子

4、水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节 pH 值至 5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4 高温高压灭菌后，室温保存。5)PBS Buffer5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl,2.7 mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1.称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加浓盐酸将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buff

5、er 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2。6)10 M6)10 M 醋酸铵醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵配制量：100 ml配制方法：1.称量 77.1 g 醋酸铵置于 100200 ml 烧杯中，加入约 30 ml 的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100 ml。3.使用 0.22 mm 滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7)7)苯酚苯酚/氯仿氯仿/异戊醇异戊醇(25:24:1)(25:24:1)配制方法：1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:2

6、4:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配制方法：将 Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中 4保存。8 8）1010(W/V)SDS(W/V)SDS组份浓度：10(W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1.称量 10g 高纯度的 SDS 置于 100-200ml 烧杯中，加入约 80ml 的去离子水，68加入溶解2.滴加浓盐酸调节 pH 值至 7.23.将溶液定容至 100ml 后，室温保存。9 9）2 N NaOH2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配

7、制方法：1.量取 80 ml 去离子水置于 100200 ml 塑料烧杯中（NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2.称取 8 g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待 NaOH 完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。1010）2.5 N HCl2.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法：1.在 78.4 ml 的去离子水中加入 21.6 ml 的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。2.室温保存。1111）5 M NaCl5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配

8、制方法：1.称取 292.2 g NaCl 置于 1 L 烧杯中，加入约 800 ml 的去离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至1 L 后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4保存。1111）2020(W/V)Glucose(W/V)Glucose组份浓度：20(W/V)Glucose配制量：100 ml配制方法：1.称取 20 g Glucose 置于 100200 ml 烧杯中，加入约 80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100 ml。3.高温高压灭菌后，4保存。1212）Solution I(Solution I(质粒提取用质粒提取用)组份浓度：25 m

9、M Tris-HCl（pH8.0),10 mM EDTA,50 mM Glucose配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。25ml1M Tris-HCl（PH8.0）20ml0.5M EDTA（PH8.0）45ml20Glucose（1.11M）dH2O910ml2.高温高压灭菌后，4保存。3.使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase A（20 mg/ml)。1313）Solution II(Solution II(质粒提取用质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1(W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶

10、液，置于 500ml 烧杯中10 SDS 50ml2N NaOH 50ml2.加灭菌水定容至 500ml，充分混匀3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌1414）Solution III(Solution III(质粒提取用质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc,5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：1.称量下列试剂，置于 500 ml 烧杯中。KOAc147gCH3COOH57.5ml2.加入 300 ml 去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500 ml。4.高温高压灭菌后，4保存。1515）0.5 M EDTA(pH8

11、.0)0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取 186.1 g Na2EDTA2H2O，置于 1 L 烧杯中。2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌。3.用 NaOH 调节 pH 值至 8.0（约 20 g NaOH)。注意：pH 值至 8.0 时，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1 L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。1616）1 M DTT1 M DTT组份浓度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法：1.称取 3.09 g DTT，加入到 50 ml 塑料离心管内。2.加 20 ml 的 0.0

12、1 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用 0.22 mm 滤器过滤除菌。3.适量分成小份后，-20保存。1717）10 mM ATP10 mM ATP组份浓度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1.称取 121 mg Na2ATP3H2O，加入到 50 ml 塑料离心管内。2.加 20 ml 的 25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20保存。一.常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺（Spermidine）:溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L 精胺（Spermine）：溶解 3.48

13、g 精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate）：将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至 1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加 100mg 的牛血清蛋白（组分 V 或分子生物学试剂级，无 DNA 酶）于 9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml

14、 水，分成小份贮存于-20。或转移 100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（potassium acetate）：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L 氯化钾（KCl）：溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L 乙酸钠（sodium acetate）：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中，用冰乙酸调溶液的pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和 NaOH溶液（0.5mol/L）

15、，混合后形成 EDTA的三钠盐。或称取186.1g的 Na2EDTA2H2O 和 20g 的 NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH（6.8-8.2），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl：加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT：溶解 250mg 的 IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于 10ml 水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl26H2O 于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶

16、解 174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase（无 DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使 DNA 酶失活。用 1mol/L 的 TrisHCl 调

17、 pH 至 7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L 氯化钠（NaCl）：溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N 氢氧化钠（NaOH）：溶解400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入

18、100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解 25mg 的 Xgal 于 1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100100DenhardtDenhardt 试剂（试剂（Denhardts regentDenhardts regent）成分及终浓度配制 100ml 溶液各成分的用量2聚蔗糖（Ficoll，400 型）2g2聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2g2g2BSA（组分 V）加水至总体积为 100ml水依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。1

19、010标准标准 DNADNA 连接酶缓冲液（连接酶缓冲液（standard DNA ligase bufferstandard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分的用量5ml 1mol/L 贮液0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl21ml 1mol/L 贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L 贮液2mmol/L ATP200ul 100 mmol/L 贮液5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）50ul 1 mmol/L 贮液0.5mg/ml BSA（组分 V）（可选）0.5ml 10

20、mg/mL 贮液水2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到 100mmol/L纯 dNTPs 贮液，-80可贮存至少 6 个月。10mmol/L dNTP10mmol/L dNTP混合液混合液成分及终浓度10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水配制 20ul 溶液各成分的用量2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dT

21、TP 贮液12ul20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二醇20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠2.5mol/L 氯化钠补足 100ml水加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）88.2g175.3g3mol/L 氯化钠补足 1L水溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L 水中，加几滴10N NaOH 溶液调 pH 为 7.0，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处

22、理水加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的体积分数为 0.1。在 37温浴至少 12h，然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min，以使残余的 DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应，不可用DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（phosphate bufferphosphate buffer）按照

23、下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH 的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g 于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。1mol/L1mol/L最终 pH 值磷酸二氢钠（ml）磷酸氢二钠（ml）8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.0330

24、6707.12807207.2TETE（用于悬浮和贮存（用于悬浮和贮存 DNADNA）成分及终浓度成分及终浓度10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水配制配制 100ml100ml 溶液各成分的用量溶液各成分的用量1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8mlTrisTris缓冲液（缓冲液（Tris-HCl bufferTris-HCl buffer）将 121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至 1L。

25、浓盐酸的体积（浓盐酸的体积（mlml）pHpH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2二二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液电泳缓冲液5050Tris-Tris-乙酸（乙酸（TAETAE）缓冲液）缓冲液成分及终浓度2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水配制 1L 溶液各成分的用量242g57.1 ml 的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足 1L配制 1L 溶液各成分的用量54g27.5g 硼酸20

26、 ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）55Tris-Tris-硼酸（硼酸（TBETBE）缓冲液）缓冲液成分及终浓度445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水补足 1L染料1 1溴酚蓝（溴酚蓝（bromophenol bluebromophenol blue）加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 1二甲苯青二甲苯青 FFFF（xylene cyanole FFxylene cyanole FF）溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml10mg/ml 的溴化

27、乙锭（的溴化乙锭（ethidium bromideethidium bromide）小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）66碱性凝胶上样液（室温贮存）碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠300ul 10N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）18聚蔗糖（400 型）1.8g0.15溴甲酚绿15mg25mg0.25二甲苯青 FF补足到 10ml水66聚蔗糖

28、凝胶上样液（室温贮存）聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝1.5ml 1溴酚蓝0.15二甲苯青 FF1.5ml 1二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）15聚蔗糖（400 型）1.5g水补足到 10ml66溴酚蓝溴酚蓝/二甲苯青二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.25溴酚蓝2.5ml 1溴酚蓝0.25二甲苯青 FF2.5ml 1二甲苯青 FF15聚蔗糖（400 型）1.5g补足到 10ml水66甘油凝胶上样液（甘油凝胶

29、上样液（4 4贮存）贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝1.5ml 1溴酚蓝0.15二甲苯青 FF1.5ml 1二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）50甘油3ml水3.9ml66蔗糖凝胶上样液（室温贮存）蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝1.5ml 1溴酚蓝0.15二甲苯青 FF1.5ml 1二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）40聚蔗糖4g水补足到 10ml1010十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液

30、（室温贮存）甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.2溴酚蓝20mg0.2二甲苯青 FF20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)200 mmol/L EDTA100ul 10 SDS0.1SDS5ml50甘油补足到 10ml水三三.常用培养基常用培养基1 1）LBLB 培养基培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用 1N NaOH（1ml）调整 pH 至 7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。SOB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白

31、胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每 100ml 的小份中加 1ml灭过菌的 1mol/L 氯化镁。2 2）SOCSOC 培养基培养基成分、方法同 SOB 培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到 100ml，用 0.22um的滤膜过滤除菌）。3 3）TBTB 培养基培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨12g酵母提

32、取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60，再加 100ml 灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液（2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用 0.22um 的滤膜过滤除菌）。4 4）22YTYT 培养基培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用 1N NaOH（1ml）调整 pH 至 7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。5 5）YPDYPD 培养基培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：