微生物ppt课件第1章.ppt
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1、第一章 原核生物的原核生物的形态、构造和功能形态、构造和功能古菌(Archaea)细菌(细菌(细菌(细菌(BacteriaBacteriaBacteriaBacteria)原核微原核微生物生物(prokaprokaryotes)ryotes)又称真细菌(又称真细菌(eubacteria),),包括普通细菌(狭义的)、放线包括普通细菌(狭义的)、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体和衣原体菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体和衣原体进化谱系上与真细菌及真核生物相互并列,与真核生物关系更近;细胞构造却与真细菌较为接近,同属于原核生物。原核生物原核生物原核生物原核生物(prokaryotes):一大类细胞核
2、无核膜包裹,只存在称作一大类细胞核无核膜包裹,只存在称作核区的裸露核区的裸露DNA的原始单细胞生物,包括的原始单细胞生物,包括真细菌(真细菌(真细菌(真细菌(eubacteria)eubacteria)和和古菌古菌(Archaea)两大类群。两大类群。第一节 细菌(bacteria)一、形态构造及其功能(一)形态和染色球状杆状螺旋状基本形态寄生性细菌-蛭弧菌蛭弧菌(Bdellovibrio)寄生于其他细菌,比一般细菌小,能通过细菌滤器,单细胞,弧形或逗点状,有时呈螺旋状,大小0.30.60.81.2微米,或仅为杆菌长度的1/31/4。端生鞭毛,多为一根;有的在另一端生有一束纤毛。革兰氏染色阴性
3、(2)螺旋菌:菌体回转如螺旋,螺旋数目和螺距大小因种而异。鞭毛二端生。细胞壁坚韧,菌体较硬。(3)螺旋体:菌体柔软,用于运动的类似鞭毛的轴丝位于细胞外鞘内。项目项目螺旋菌螺旋菌螺旋体螺旋体菌体特性菌体特性菌体较硬菌体较硬 菌体柔软菌体柔软运动性运动性旋转运动旋转运动伸缩运动伸缩运动鞭毛鞭毛1-1-几根,位于菌体几根,位于菌体2 2端端2-1002-100根,位于菌体根,位于菌体边缘的轴丝内边缘的轴丝内革兰氏染色反应革兰氏染色反应-_ _致病性致病性大部分无大部分无大部分有大部分有螺旋菌和螺旋体的比较螺旋菌和螺旋体的比较4、其它形状1)柄杆菌(prosthecate bacteria)细胞上有柄
4、、菌丝、附器等细胞质伸出物,细胞呈杆状或梭状,并有特征性的细柄。一般生活在淡水中固形物的表面。生菌柄的细菌种类很多,有的生星状菌柄,菌柄长短不一,因种而异,如菌柄微菌属生短刺状菌柄,臂微菌属生刺状菌柄,柄杆菌属生柄状菌柄,生丝微菌属生丝状菌柄。2)星形细菌(star-shaped bacteria)3)方形细菌(square-ahaped bacteria)(Stella)星状菌属(Haloarcula)盐盒菌属4)细菌异常形态环境条件的变化:环境条件的变化:物理、化学因子的刺激物理、化学因子的刺激培养时间过长培养时间过长阻碍细胞正常发育阻碍细胞正常发育阻碍细胞正常发育阻碍细胞正常发育细胞衰老
5、细胞衰老细胞衰老细胞衰老营养缺乏营养缺乏营养缺乏营养缺乏自身代谢产物积累过多自身代谢产物积累过多自身代谢产物积累过多自身代谢产物积累过多异常形态正常形态环环环环境境境境条条条条件件件件恢恢恢恢复复复复正正正正常常常常(nanobacteriananobacteria)(50 nm)最大和最小细菌的个体大小悬殊:(Thiomargarita namibiensisThiomargarita namibiensis)(0.75mm0.75mm)1万倍(二)细菌大小细菌的大小范围:球菌:球菌:0.5 3 m(直径)杆菌:0.2 2 m X 0.5 20 m 弧菌和螺旋菌:0.2 2 m X 0.5
6、100 m 螺旋体:0.1 3 m X 0.5 250 m 2、测量细菌大小的方法显微镜测微尺显微照相后根据放大倍数进行测算直接测量直接测量直接测量直接测量换算换算换算换算2、细菌大小测量结果的影响因素个体差异;干燥、固定后的菌体会一般由于脱水而比活菌体缩短1/3-1/4;染色方法的影响,一般用负染色法观察的菌体较大;幼龄细菌一般比成熟的或老龄的细菌大?小?大?小?环境条件,如培养基中渗透压的改变也会导致细胞大小的变化。大大大大 简单染色法简单染色法 正染色正染色 革兰氏染色法革兰氏染色法革兰氏染色法革兰氏染色法 鉴别染色法鉴别染色法 抗酸性染色法抗酸性染色法 芽孢染色法芽孢染色法 死菌死菌
7、姬姆萨染色法姬姆萨染色法 负染色:负染色:荚膜染色法等荚膜染色法等细菌染色法细菌染色法 活菌:用美蓝或活菌:用美蓝或TTCTTC(氧化三苯基四氮唑)等氧化三苯基四氮唑)等 作活菌染色作活菌染色细菌染色方法C.Gram(革兰)于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。革兰氏染色革兰氏染色(二)细菌构造特殊构造:部分细菌具有的或一般细菌在特殊环境下才有的构造一般构造:一般细菌都有的构造图1-11、细胞的一般构造位于细胞表面,内侧紧贴细胞膜的一层较为坚韧,略具弹性的细胞结构。(1)细胞壁(cell wall)机械法破裂细胞后,分离得到纯的细胞壁;细菌超薄切片的电镜直接观察;2 2)证实细胞壁
8、存在的方法:)证实细胞壁存在的方法:制备原生质体,观察细胞形态的变化;质、壁分离后染色,可以在光学显微镜下看到细胞壁;3)细胞壁的功能:)细胞壁的功能:(1)固定细胞外形和提高机械强度,免受渗透压等外力的损伤;(2)为细胞的生长、分裂和鞭毛运动所必需;(3)阻拦大分子有害物质:渗透屏障,阻拦酶蛋白和某些抗生素 等大分子物质(分子量大于800)进入细胞,保护细胞免受 溶菌酶、消化酶和青霉素等有害物质的损伤;(4)细菌特定的抗原性、致病性以及对抗生素和噬菌体的 敏感性的物质基础;1)革兰氏阳性细菌的细胞壁特点:厚度大特点:厚度大特点:厚度大特点:厚度大(2080nm)化学组分简单化学组分简单化学组
9、分简单化学组分简单,一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。A、肽聚糖(peptidoglycan)厚约2080nm,由40层左右的网格状分子交织成的网套覆盖在整个细胞上。又称粘肽、胞壁质或粘质复合物,是真细菌真细菌细胞壁中的特有成分双糖单位中的-1,4-糖苷键很容易被溶菌酶溶菌酶溶菌酶溶菌酶所水解,从而引起细菌因肽聚糖细胞壁的“散架”而死亡B B、磷壁酸磷壁酸一种酸性多糖,主要成分为甘油磷酸或核糖醇磷酸。壁磷壁酸壁磷壁酸壁磷壁酸壁磷壁酸:膜磷壁酸膜磷壁酸膜磷壁酸膜磷壁酸(脂磷壁酸)(脂磷壁酸)(脂磷壁酸)(脂磷壁酸):与肽聚糖分子间共价结合与肽聚糖分子间共价结合与肽聚糖分子间共价结合与肽聚糖分子
10、间共价结合跨越肽聚糖层并与细胞膜相交联,跨越肽聚糖层并与细胞膜相交联,跨越肽聚糖层并与细胞膜相交联,跨越肽聚糖层并与细胞膜相交联,由甘油磷酸链分子与细胞膜上的磷脂进行共价结合膜磷壁酸膜磷壁酸膜磷壁酸膜磷壁酸(又称脂磷壁酸)(又称脂磷壁酸)(又称脂磷壁酸)(又称脂磷壁酸):含量与培养条件关系不大。可用45%热酚水提取,也可用热水从脱脂的冻干细菌中提取。壁磷壁酸壁磷壁酸壁磷壁酸壁磷壁酸:一般占细胞壁重量的10%,有时可接近50%。用稀酸或稀碱可以提取。二价阳离子,特别是高浓度的二价阳离子,特别是高浓度的Mg2+的存在,对于保持膜的的存在,对于保持膜的硬度,提高细胞膜上需硬度,提高细胞膜上需Mg2+
11、的合成酶的活性极为重要。的合成酶的活性极为重要。磷壁酸主要生理功能细胞壁形成负电荷环境,浓缩细胞周围的MgMg2+2+,提高合成酶的活力;贮藏元素;增强某些致病菌对宿主细胞的粘连、避免被白细胞吞噬以及抗补体的作用;革兰氏阳性细菌特异表面抗原的物质基础;噬菌体的特异性吸附受体;调节细胞内自溶素(autolysin)的活力,防止细胞因自溶而死亡可作为细菌分类、鉴定的依据 2)革兰氏阴阴阴阴性细菌的细胞壁细胞壁薄,层次较多,成分复杂 2)革兰氏阴性细菌的细胞壁A、肽聚糖埋藏在外膜层之内,仅由12层肽聚糖网状分子组成(23nm),占细胞壁总重的10%,对机械强度的抵抗力弱。B、外膜(outer mem
12、brane)位于革兰氏阴性细菌细胞壁外层,有时也称为外壁层。由脂多糖、磷脂和若干种外膜蛋白组成。脂多糖由三部分组成:O-O-O-O-特异侧链(特异侧链(特异侧链(特异侧链(O-specific side chainO-specific side chainO-specific side chainO-specific side chain,或称O-多糖或O-抗原)核心多糖核心多糖核心多糖核心多糖(core polysaccharide)core polysaccharide)core polysaccharide)core polysaccharide)类脂类脂类脂类脂A A A A脂多糖的主
13、要功能a)负电荷较强,吸附Mg2+、Ca2+阳离子,增加其在细胞表面浓度,稳定细胞膜结构。b)决定细胞表面抗原决定簇多样性;根据LPS抗原性的测定,沙门氏菌属(Salmonella spp)的抗原型多达2107种,一般都源自O-特异侧链种类的变化。细菌躲避宿主免疫系统攻击。用血清学方法对病原菌进行鉴定c)类脂A是革兰氏阴性细菌内毒素的物质基础d)控制某些物质进出细胞的部分选择性屏障e)噬菌体在细胞表面的吸附受体v 外膜蛋白(outer membrane protein)嵌合在LPS和磷脂层外膜上的蛋白。有20余种,但多数功能尚不清楚。孔蛋白(孔蛋白(孔蛋白(孔蛋白(porinsporinspo
14、rinsporins)又称基质蛋白,其单体分子质量为28-48KD,是一类形成跨膜管道,具有渗透特性的外膜主要蛋白。非特异性孔蛋白特异性孔蛋白可通过分子量小于800900的任何亲水性分子只容许一种或少数几种相关物质通过,如维生素B12和核苷酸等。三个基质蛋白分子组成一个直径约1nm的跨膜孔道,通过孔的开、闭,可对进入外膜层的物质进行选择。脂蛋白脂蛋白脂蛋白脂蛋白(lipoprotein)lipoprotein)lipoprotein)lipoprotein):外膜中含量最丰富的蛋白,外膜中含量最丰富的蛋白,外膜中含量最丰富的蛋白,外膜中含量最丰富的蛋白,通过共价键使外膜层牢固地连接在肽聚糖内壁
15、层上,分子量约为7200。作为一种结构蛋白,稳定细菌外膜-肽聚糖复合物的功能。在细胞中的拷贝数为1105,是革兰氏阴性细菌的外膜主要蛋白之一,分子量约为3436KD,跨膜蛋白,在维持外膜结构上具有重要作用。1020种微量蛋白,已证明其中大部分都参与特异性的扩散过程,与细胞生长密切相关OmpA,又称热修饰蛋白(heat-modifiable protein)微量蛋白微量蛋白外膜蛋白的生理功能:营养物质的吸收蛋白质分泌 信号转导噬菌体和细菌素的受体细菌粘附逃避免疫防御 铁吸收 对抗微生物多肽的抗性 对血清的抗性 多药物抗性 对胆盐的抗性免疫原性 在周质空间中,存在着多种周质蛋白(periplasm
16、ic proteins)水解酶类水解酶类;合成酶类;合成酶类;结合蛋白;结合蛋白;受体蛋白;受体蛋白;周质空间是进出细胞的物质的重要中转站和反应场所v 周质空间(periplasmic space,periplasm)又称壁膜间隙。在革兰氏阴性细菌中,一般指其外膜与细胞膜之间的狭窄空间(宽约1215nm),呈胶状。革兰氏阳性和阴性细菌的比较革兰氏染色的方法与原理1 1 1 1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染初染2 2 2 2、用碘溶液进行、用碘溶液进行、用碘溶液进行、用碘溶液进行媒染媒染,提高染
17、料和细胞间的相互作用从而,提高染料和细胞间的相互作用从而,提高染料和细胞间的相互作用从而,提高染料和细胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。使二者结合得更牢固。使二者结合得更牢固。使二者结合得更牢固。3 3 3 3、用乙醇或丙酮冲洗进行、用乙醇或丙酮冲洗进行、用乙醇或丙酮冲洗进行、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色脱色。在经历脱色后仍将结晶紫。在经历脱色后仍将结晶紫。在经历脱色后仍将结晶紫。在经历脱色后仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌,而革兰氏阴性细菌的结晶保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌,而革兰氏阴性细菌的结晶保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌,而革兰氏阴性细菌的结晶保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌,
18、而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉,细胞呈无色。紫被洗掉,细胞呈无色。紫被洗掉,细胞呈无色。紫被洗掉,细胞呈无色。4 4 4 4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行复复染染。例如沙黄,它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃。例如沙黄,它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃。例如沙黄,它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃。例如沙黄,它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色,而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色红到红色,而革兰氏阳性细菌继续保持深
19、紫色红到红色,而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色红到红色,而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色缺壁细菌:缺壁细菌:缺壁细菌实验室或宿主体内形成在自然界长期进化中形成支原体缺壁突变L型细菌基本去尽原生质体(G+)部分去除球状体(G-)人工去壁(1)L型细菌(L-form of bacteria)在某些环境条件下通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷变异型。因英国李斯特(Lister)预防研究所的学者首先发现而得名(1935年,念珠状链杆菌)大肠杆菌、变形杆菌、葡萄球菌、链球菌、分枝杆菌和霍乱弧菌等20多种细菌中均有发现,被认为可能与针对细胞壁的抗菌治疗有关L型细菌特点:无完整细胞壁,细胞呈多形态有些能
20、通过细菌滤器,故又称“滤过型细菌”对渗透敏感,在固体培养基上形成“油煎蛋”似的小菌落(直径在0.1mm左右)(2)原生质体(protoplast)用溶菌酶处理或在含青霉素的培养基中培养而抑制新生细胞壁合成而形成的仅由一层细胞膜包裹的,圆球形、对渗透压变化敏感的细胞,一般由革兰氏阳性细菌形成。特点:对环境条件变化敏感;有的原生质体具有鞭毛,但不能运动,也不被相应噬菌体所感染;在适宜条件(如高渗培养基)可生长繁殖、形成菌落,形成芽孢。及恢复成有细胞壁的正常结构。比正常有细胞壁的细菌更易导入外源遗传物质,是研究遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料。(3)球状体(sphaeroplast),又称原
21、生质球采用上述同样方法,针对革兰氏阴性细菌处理后而获得的残留部分细胞壁的球形体。与原生质体相比,它对外界环境具有一定的抗性,可在普通培养基上生长。(4)支原体(Mycoplasma)在长期进化过程中形成的、适应自然生活条件的无细胞壁的原核生物。因它的细胞膜中含有一般原核生物所没有的甾醇甾醇,所以即使缺乏细胞壁,其细胞膜仍有较高的机械强度。(2)细胞膜(cell membrane)又称质膜、内膜,是紧贴在细胞壁内侧、包围细胞质的一层柔软、脆弱、富有弹性的半透性薄膜,厚约78nm。组成:磷脂(占20%30%)、蛋白质(占50%70%)细胞膜观察方法:细胞膜观察方法:质壁分离后结合鉴别性染色在光学显
22、微镜下观察;原生质体破裂;超薄切片电镜观察;在上下两暗色层之间夹着一浅色中间层的双层膜结构(细胞膜的化学组成有关)。细胞膜的化学组成与结构模型:细胞膜的化学组成与结构模型:v 磷脂亲水的极性端疏水的非极性端图1-8 磷脂在极性头的甘油3C上,不同种微生物具有不同的R基,如磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸或磷脂酰肌醇等。非极性尾则由长链脂肪酸通过酯键连接在甘油的C1和C2位上组成,其链长和饱和度因细菌种类和生长温度而异。膜的流动性很大程度上取决于不饱和脂肪酸的结构和相对含量。具运输功能的整合蛋白整合蛋白整合蛋白整合蛋白或内嵌蛋白具有酶促作用的周边蛋白周边蛋白周边蛋白周边
23、蛋白或膜外蛋白膜蛋白约占细菌细胞膜的50%50%70%70%,比任何一种生物膜都高,而且种类也多。-细胞膜是一个重要的代谢活动中心。v 膜蛋白v 甾醇类物质提高膜的稳定性真核生物细胞膜中一般含有胆固醇等甾醇,含量为5%-25%。原核生物与真核生物的最大区别就是其细胞膜中一般不含胆固醇,而是含有hopanoid的类甾醇。甾醇的一般结构细胞膜的液态镶嵌模型(fluid mosaic model)(P24)膜的主体是脂质双分子层脂质双分子层具有流动性整合蛋白因其表面呈疏水性,故可“溶”于脂质双分子层的疏水性内层中;周边蛋白表面含有亲水基团,故可通过静电引力与脂质 双分子层表面的极性头相连;脂质分子间
24、或脂质与蛋白质分子间无共价结合;脂质双分子层犹如一“海洋”,周边蛋白可在其上作“漂浮”运动,而整合蛋白则似“冰山”状沉浸在其中作横向移动。1972年,辛格(J.S.Singer)和尼科尔森(G.L.Nicolson)细胞膜的生理功能:细胞膜的生理功能:(p24p24)选择性地选择性地选择性地选择性地控制细胞内、外的营养物质和代谢产物的运送运送运送运送;维持细胞内正常渗透压的屏障屏障屏障屏障;合成合成合成合成细胞壁和糖被的各种组分(肽聚糖、磷壁酸、LPS、荚膜多糖等)的重要基地基地基地基地;膜上含有氧化磷酸化氧化磷酸化氧化磷酸化氧化磷酸化或光合磷酸化光合磷酸化光合磷酸化光合磷酸化等能量代谢的酶系
25、,是细胞的产能基地产能基地产能基地产能基地;鞭毛鞭毛鞭毛鞭毛基体的着生部位和鞭毛旋转的供能部位;间体(间体(mesosomemesosome)细胞质膜内褶而形成的囊状构造,其中充满着层状或管状的泡囊。多见于革兰氏阳性细菌青霉素酶分泌、DNA复制、分配以及细胞分裂有关“间体”仅是电镜制片时因脱水操作而引起的一种赝像细胞质的主要成分为核糖体、贮藏物贮藏物贮藏物贮藏物、多种酶类和中间代谢物、质粒、各种营养物和大分子的单体等,少数细菌还有类囊体、磁小体、羧酶体磁小体、羧酶体磁小体、羧酶体磁小体、羧酶体、气泡气泡气泡气泡或伴孢晶体等。(3)细胞质和内含物(P26P26)细胞质(cytoplasm):细胞
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