临床微生物学标本的采集课件.pptx
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1、临床微生物学标本的采集失误的不同分布分析前时期约占总失误的55%,分析时期约占总失误的4%,分析后时期约占总失误的41%。4%41%55%标本质量的好坏直截了当影响诊断结果的正误,因此在标本采集、送检、保存等各个环节都要规范操作,严格控制,是确保实验结果准确可靠的前提。标本采集的一般原则:1、早期采集:采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时,而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。2、无菌采集:采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时,应注意对局部及周围皮肤的消毒,严格进行无菌操作;关于与外界相通的腔道,如窦道标本应由窦道底部取活组织检查,而不应从窦道
2、口取标本,以免受皮肤表面正常菌群的污染,造成混淆和误诊;采集的标本均应盛于无菌容器内,盛标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌,或用一次性无菌容器,而不能用消毒剂或酸类处理。3、依照目的菌的特性用不同的方法采集:厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌,以及L型菌采纳的方法不同。如尿液标本,疑为厌氧菌感染时,应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取;若怀疑是需氧或兼性厌氧菌的感染,可通过自然导尿获取标本。4、采集适量标本:采集量不应过少,而且要有代表性,同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。如伤寒副伤寒患者,发病的第1周应采集血液,第2周应采集粪便和尿液,否则影响细菌检出率。5、安全采集
3、:采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染,同时也要注意安全,防止传播和自身感染。一 上呼吸道标本标本采集方法:嘱患者先用清水漱口,由检查者将其舌外拉使悬雍垂尽估计向外牵引,用压舌板将舌向下向外压,用无菌棉拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧,反复擦拭数次然后送检,拭子应幸免触及舌、口腔粘膜和唾液。标本采集注意事项:1 采集时间:应于抗生素应用之前。时间上可无严格限制,但咽部是呼吸和食物的通路,应晨起后采集为佳。2 送检:应马上送检。二 下呼吸道标本标本质量脓痰粘液样痰唾液oror诱导痰 (?)(?)血痰用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格痰标本10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收白细
4、胞25个/每低倍视野,鳞状上皮细胞105/ml、革兰阳性球菌104/ml、真菌103/ml时有意义,有3种或者3种以上生长时可怀疑污染。如病人有发热伴随症状可同时做血培养。四 大便标本标本的采集方法1 自然排便采集法:自然排便后,挑取有脓血、粘液部位的粪便2-3g,液状粪便取絮状物1-3ml盛于无菌的容器中送检。2 直肠拭子法:适于排便困难者或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周围洗净,用无菌盐水、保存液或增菌液湿润的无菌棉拭子插入肛门,成人约4-5cm,儿童约2-3cm,与直肠粘膜表面接触,轻轻转动,放灭菌试管内送检。标本采集注意事项1 采集时间:应在急性期采样,以提高检出率,最好在用药前。2 送检:
5、要采集新鲜标本马上送检。五 血液标本关于血培养指征只有在发热时,才需要进行血培养。想采就采怀疑患者有血流感染的症状有:不明原因的发烧(38)或体温过低(36)白细胞增多(10000/ul)粒细胞减少(1000/ul)严重的局部感染(脑膜炎,心内膜炎,肺炎,肾盂肾炎,腹部术后感染等)休克、寒颤、僵直、心率异常加快、低血压或高血压、呼吸频率加快等。关于采血时机何时采血进行血培养,无特别时间要求。细菌浓度体温血培养采血时机时间(分钟)03060关于采血套数及部位 为减轻患者痛苦,只从一个穿刺部位采一份血液标本即可。基本注意事项:成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个,也叫“一份”注意:一次穿
6、刺采血,算“一套”,采集第二套应从另一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培养,但仍需从多个部位采集多次。特别患者才考虑厌氧培养。采血套数2 23 3套血培养,有助于污染的判断。采集1 1套无法判断是病原菌依然污染菌。关于采血量每瓶采集多少血液无特别要求采血量(ml)与检出率的关系血培养物每增加一毫升,真性菌血症成年人微生物的检出率增加3 但并非越多越好,超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤,使肉汤无法有效中和血中的抑制物质(补体、抗体、抗生素)。因此血液与肉汤的最佳比例为1:51:10标本的采集方法防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养的关键问题,采血前严格执行消毒程序是十分重要的。1
7、皮肤消毒程序:严格按以下三步法进行:(1)70%酒精擦拭静脉穿刺部位30s 以上。(2)用碘酊或聚维酮碘(碘伏)棉签消毒皮肤,1-2碘酊作用30s 或聚维酮碘作用60s,从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上。(3)70酒精脱碘。对碘过敏的病人只能用70%酒精消毒,消毒60s,待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。2 培养瓶消毒程序(1)用70酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。(2)酒精作用60s。(3)在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。3 培养瓶接种程序抽取血液后,不要换针头,直截了当注入血培养瓶中,轻轻颠倒混匀,以防血液凝固。假如同时作需氧和厌
8、氧培养,应先将标本接种到厌氧瓶中,然后再注入需氧瓶,防止将空气注入厌氧瓶中。标本采集注意事项1 血培养采集的时间和频率(1)采血培养应尽量在抗菌药物使用之前,在24h 内采集2-3 份血培养(一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养),每次2 瓶。研究已证实,2-3 份血培养足以检测所有的菌血症和真菌血症。(2)入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者,可连续3 天采集,每天采集2 份,(3)对间歇性寒战或发热的患者,应在寒战或体温高峰到来之前0、5h采集血液,或于寒战或发热后1h 采集,因为发热时血液中估计没有细菌。(4)可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎的患者,
9、应在不同部位采集2-3 份血培养。(5)不明原因发热,如隐性脓肿、伤寒热和波浪热,先采集2-3 份血标本,24-36h 后估计体温升高之前,再采集2份以上。(6)可疑为菌血症或真菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培养方法,选择其它种类的培养瓶,如高渗培养瓶,中和抗生素培养瓶,结核菌培养瓶等,以获得罕见的或苛氧的微生物。(7)可疑为细菌性心内膜炎者,在1-2h 内多部位采集3 份血标本,假如24h阴性,再采取3 份以上的血标本。2 采血量成人:推荐每个血培养瓶应加的血量为5-10ml,血液和肉汤比为1:5-10(体积:体积)。骨髓采量一般为1-2ml。儿童:因特别难获得大量的血液,一般静脉采血3
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