食源性人兽共患细菌病及其控制对策-20070928.ppt

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1、食源性人畜共患细菌病及其控制对策食源性人畜共患细菌病及其控制对策焦新安焦新安黄金林黄金林扬州大学扬州大学江苏省人畜共患病学重点实验室江苏省人畜共患病学重点实验室v食源性疾病食源性疾病通过摄食进入人体导致患感染性或中毒通过摄食进入人体导致患感染性或中毒性的疾病性的疾病(WHO)。食源性疾病是食品安全的主要问题。食源性疾病是食品安全的主要问题。v美国每年有美国每年有7600万例食源性疾病患者，占人口的万例食源性疾病患者，占人口的1/3；由生物性危害因素引起的爆发起数占总发生起数的；由生物性危害因素引起的爆发起数占总发生起数的83，爆发人数占总人数的，爆发人数占总人数的99。vWHO统计报告，发达国

2、家死于食物中毒的儿童中，统计报告，发达国家死于食物中毒的儿童中，70是由微生物性食物中毒所致。是由微生物性食物中毒所致。美国沙门氏菌发病案例报告美国沙门氏菌发病案例报告 0 0100001000020000200003000030000400004000050000500006000060000700007000019601960196319631966196619691969197219721975197519781978198119811984198419871987199019901993199319961996摘自摘自:MMWRMMWR英国食源性细菌病发病报告英国食源性细菌病发病报告0

3、5000100001500020000250003000035000400004500019801982198419861988199019921994 空肠弯曲菌空肠弯曲菌 沙门氏菌沙门氏菌澳大利亚食源性细菌病发病报告澳大利亚食源性细菌病发病报告0 02000200040004000600060008000800010000100001200012000140001400019841984198519851986198619871987198819881989198919901990199119911992199219931993199419941995199519961996摘自：摘自：N

4、NDSS（国际疾病监督系统）国际疾病监督系统）空肠弯曲菌空肠弯曲菌 沙门氏菌沙门氏菌欧洲欧洲食源性食源性疾病疾病弧菌病趋势弧菌病趋势v我国也存在同样趋势，我国也存在同样趋势，19922001食物中毒案例中，食物中毒案例中，细菌性的食物中毒占细菌性的食物中毒占50.9。v加强对食源性人畜共患细菌病的研究和预防是食品加强对食源性人畜共患细菌病的研究和预防是食品安全控制的重要任务之一。安全控制的重要任务之一。一、我国食源性人畜共患细菌病的现状一、我国食源性人畜共患细菌病的现状 v20002002年，中国年，中国CDC对生肉、熟肉、乳、乳制品、对生肉、熟肉、乳、乳制品、水产品和蔬菜等进行连续主动监测，

5、微生物污染仍居首水产品和蔬菜等进行连续主动监测，微生物污染仍居首位，占位，占39.62%。v在微生物污染中，细菌性污染是涉及面最广、影响最在微生物污染中，细菌性污染是涉及面最广、影响最大、问题最多的一类污染。大、问题最多的一类污染。中国中国vWHO估计，发展中国家食源性疾病的漏报率在估计，发展中国家食源性疾病的漏报率在95%以上，发达国家也在以上，发达国家也在90%以上。以上。v我国尚没有建立起完善的食源性疾病报告系统。在我国尚没有建立起完善的食源性疾病报告系统。在我国，病原微生物，尤其是病原细菌引起的食源性疾我国，病原微生物，尤其是病原细菌引起的食源性疾病对食品安全和公众健康构成了严重威胁。

6、病对食品安全和公众健康构成了严重威胁。v新的食源性细菌感染不断出现，已成为一个不容忽新的食源性细菌感染不断出现，已成为一个不容忽视的问题。视的问题。q产单核细胞李斯特菌和大肠杆菌产单核细胞李斯特菌和大肠杆菌O157:H7引起的感引起的感染是近染是近10年出现的重要的食源性疾病。年出现的重要的食源性疾病。q空肠弯曲菌引起食源性疾病的危险性在国际范围内空肠弯曲菌引起食源性疾病的危险性在国际范围内受到广泛关注，很多发达国家，如美国、丹麦、芬兰、受到广泛关注，很多发达国家，如美国、丹麦、芬兰、瑞士和英国等，都有空肠弯曲菌病流行的报道。瑞士和英国等，都有空肠弯曲菌病流行的报道。农贸市场食品样品农贸市场食

7、品样品样品种类样品种类样品数量样品数量空肠弯曲菌空肠弯曲菌结肠弯曲菌结肠弯曲菌混合污染混合污染（率）（率）鸡肉鸡肉29256（19.2%）21（7.2%）8（2.7%）猪肉猪肉40000蔬菜蔬菜25000污水污水708（11.4%）2（2.9%）2（2.9%）弯曲菌弯曲菌7岁以下腹泻患儿岁以下腹泻患儿样品种类样品种类数量数量CJCCA医院门诊部医院门诊部394256.35%00A医院住院部医院住院部50000B医院门诊部医院门诊部788556.98%70.89%B医院住院部医院住院部43561.38%00C医院住院部医院住院部2514.00%00合计合计1647875.28%70.89%样品种

8、类样品种类数量数量CJCC门诊部门诊部1182806.77%70.59%住院部住院部46571.51%00合计合计1647875.28%70.89%各类食品及市场污水中各类食品及市场污水中Lm平均污染率比较平均污染率比较经统计分析经统计分析Lm在生猪肉中的污染率显著高于在生猪肉中的污染率显著高于Lm在其它四种食品在其它四种食品和市场污水中的污染率（和市场污水中的污染率（p0.1）熟食样品熟食样品生猪屠宰场猪肉中污染率与四大农贸市场生猪肉污染率的比较生猪屠宰场猪肉中污染率与四大农贸市场生猪肉污染率的比较市场市场A、B、C、D生猪肉的生猪肉的Lm污染率均显著高于生猪屠宰场污染率均显著高于生猪屠宰场

9、Lm污染率污染率0.95%（0.05）侯宰猪圈侯宰猪圈环境棉拭环境棉拭100运送培养基运送培养基淋浴前点红后淋浴前点红后猪毛猪毛100冰袋冰袋副产品加工区副产品加工区大肠前段大肠前段5-8cm100冰袋冰袋入冷库前入冷库前猪肉猪肉100冰袋冰袋冷冷库库猪肉猪肉100冰袋冰袋零售（扬州）零售（扬州）猪肉猪肉50冰袋冰袋苏果（南京）苏果（南京）猪肉猪肉130冰袋冰袋合计合计 680猪肉加工流通猪肉加工流通二、我国食源性人畜共患细菌病控制二、我国食源性人畜共患细菌病控制 的主要对策的主要对策 v2000年，世界卫生大会通过了食品安全决议，年，世界卫生大会通过了食品安全决议，制定了全球食品安全战略。制

10、定了全球食品安全战略。v我国是食品生产和消费大国，提高食品安全水平的我国是食品生产和消费大国，提高食品安全水平的要求越来越迫切。要求越来越迫切。1健全食品卫生法律法规与标准体系健全食品卫生法律法规与标准体系2建立和完善食源性细菌疾病监测网络建立和完善食源性细菌疾病监测网络3建立和完善食源性细菌病预警和控制体系建立和完善食源性细菌病预警和控制体系4加强生产经营的行业管理及企业自身管理加强生产经营的行业管理及企业自身管理5加强动物细菌性疫病防控工作加强动物细菌性疫病防控工作6积极开展国际合作积极开展国际合作1健全食品卫生法律法规与标准体系健全食品卫生法律法规与标准体系v结合食品卫生监督工作的实际情

11、况，对现行有关食结合食品卫生监督工作的实际情况，对现行有关食品安全的规章和规范进行系统修订，建立适应市场经品安全的规章和规范进行系统修订，建立适应市场经济规律的新的食品安全规章、规范；济规律的新的食品安全规章、规范；v采用采用“危险性评估危险性评估”的原则与方法，系统修订国家的原则与方法，系统修订国家和地方食品标准；和地方食品标准；v按照按照WTO的有关协定和相关国际标准，适时审查的有关协定和相关国际标准，适时审查和修订有关食品安全的部门规章和标准。和修订有关食品安全的部门规章和标准。2建立和完善食源性细菌疾病监测网络建立和完善食源性细菌疾病监测网络v欧美等发达国家建立了食源性疾病监测体系。欧

12、美等发达国家建立了食源性疾病监测体系。欧洲欧洲17个国家组建了沙门氏菌、产志贺样毒素大肠杆菌监个国家组建了沙门氏菌、产志贺样毒素大肠杆菌监测网（测网（Enternet），），并建立了实时沙门氏菌国际数据库。并建立了实时沙门氏菌国际数据库。美国是食源性疾病监测系统最完善，有关食源性疾病资料美国是食源性疾病监测系统最完善，有关食源性疾病资料最多和最完整的国家。最多和最完整的国家。v2000年起年起，我国建立国家食源性致病菌的监测网，我国建立国家食源性致病菌的监测网，对食品中的沙门氏菌、大肠杆菌对食品中的沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、产单核产单核细胞李斯特菌和空肠弯曲菌进行连续主动监测。细胞李斯

13、特菌和空肠弯曲菌进行连续主动监测。v2002年年，建立了食源性疾病监测网。，建立了食源性疾病监测网。v2005年年，中国，中国CDC制定了制定了5种肠道传染病监测方案，种肠道传染病监测方案，对对23个省的个省的85个点对爆发疫情、病原学、耐药性和流个点对爆发疫情、病原学、耐药性和流行因素进行监测。行因素进行监测。3建立和完善食源性细菌病建立和完善食源性细菌病预警和控制体系预警和控制体系v（1）加强食源性细菌病的）加强食源性细菌病的快速诊断快速诊断和和溯源技术溯源技术研究。研究。v（2）建立食源性细菌病）建立食源性细菌病主动监测网络主动监测网络v（3）开展食品中病原细菌危害的）开展食品中病原细菌

14、危害的危险性评估危险性评估v（1）加强食源性细菌病的快速诊断和溯源技术研究。）加强食源性细菌病的快速诊断和溯源技术研究。本室研制出沙门氏菌属特异性单抗，建立了本室研制出沙门氏菌属特异性单抗，建立了ELISA方法，方法，并同时研制出沙门氏菌并同时研制出沙门氏菌PCR检测试剂盒，构建了检测试剂盒，构建了ELISA与与PCR联合检测技术联合检测技术，将检测时间缩短到，将检测时间缩短到2天以内。天以内。快速诊断技术快速诊断技术样品样品SC选择性增菌，选择性增菌，37，18-24hWS、DHL平板平板M-肉汤增菌，肉汤增菌，37，6hTSI斜面斜面ELISA法粗选法粗选DA、生化试验生化试验PCR方法验

15、证方法验证结果分析结果分析优化的优化的沙门氏菌沙门氏菌检测程序检测程序建立了产单核细胞李斯特菌、空肠弯曲杆菌等食源建立了产单核细胞李斯特菌、空肠弯曲杆菌等食源性病原菌性病原菌PCR快速检测技术快速检测技术和和优化的检测程序优化的检测程序。产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌PCR方法方法弯曲杆菌多重弯曲杆菌多重PCR方法方法25g样品样品+225mlLEB取菌液取菌液接种接种Oxford培养基培养基挑选可疑菌落于挑选可疑菌落于BHI培养基纯培养培养基纯培养12h采用溶菌酶采用溶菌酶-蛋白酶蛋白酶k法提取摸板法提取摸板DNA按前述按前述方法进行方法进行PCR扩增鉴定扩增鉴定37,16h37,16

16、h优化的优化的LM检测程序检测程序肉类、蔬菜、鱼类样本肉类、蔬菜、鱼类样本1-3g环境污水样本环境污水样本加入加入500l 灭菌灭菌PBS浸泡浸泡30分钟分钟取取100 l 浸泡液加入含抗生素、浸泡液加入含抗生素、生长促进剂和小牛血清的布氏肉汤中生长促进剂和小牛血清的布氏肉汤中取取500 l 浸泡液加入含抗生素、浸泡液加入含抗生素、生长促进剂和小牛血清的布氏肉汤中生长促进剂和小牛血清的布氏肉汤中42 微氧微氧 振摇培养振摇培养取取500 l 菌液煮沸法提模板菌液煮沸法提模板取取2 l 做为模板进行做为模板进行PCR优化的空肠弯曲菌检测程序优化的空肠弯曲菌检测程序建立了沙门氏菌、产单核细胞李斯特

17、菌快速检测的建立了沙门氏菌、产单核细胞李斯特菌快速检测的多重多重PCR方法。方法。已获发明专利。已获发明专利。我国已初步建立了沙门氏菌、猪链球菌我国已初步建立了沙门氏菌、猪链球菌II型、产单核细型、产单核细胞李斯特菌、大肠杆菌胞李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、布鲁氏菌、结核杆菌等布鲁氏菌、结核杆菌等病原细菌的分型技术。病原细菌的分型技术。本实验室建立了产单核细胞李斯特菌、沙门氏菌、空肠本实验室建立了产单核细胞李斯特菌、沙门氏菌、空肠弯曲菌的弯曲菌的RAPD或或PFGE等分子亚分型技术。等分子亚分型技术。分子溯源技术分子溯源技术Lm03061801的的RAPD可重复性结果电泳图可重复性结果电泳

18、图.M为标准分子量（为标准分子量（Marker），），Lane1到到5为引物为引物PB1在第在第1,5,10,15,20扩增扩增Lm03061801所得的电泳图；所得的电泳图；Lane6到到10为引物为引物PB4在第在第1,5,10,15,20扩增扩增Lm03061801所得的电泳图；所得的电泳图；Lane11到到15为为引物引物HLWL74在第在第1,5,10,15,20扩增扩增Lm03061801所得电泳图。所得电泳图。M 随机引物随机引物PB1将将49株株Lm分为分为5个不同的分子亚型；个不同的分子亚型；M为标准分为标准分子量（子量（Marker），），Lane到到分别为引物分别为引物P

19、B1将将49株株Lm分分为为5个个RAPD型的电泳图型的电泳图随机引物随机引物PB4将将49株株Lm分为分为4个不同的分子亚型；个不同的分子亚型；M为为标准分子量（标准分子量（Marker），），Lanea到到d分别为引物分别为引物PB4将将49株株Lm分为分为4个个RAPD型的电泳图型的电泳图随机引物随机引物HLWL74将将49株株Lm分为分为4个不同的分子亚型；个不同的分子亚型；M为标准分子量（为标准分子量（Marker），），LaneA到到D分别为引物分别为引物HLWL74将将49株株Lm分为分为4个个RAPD型的电泳图型的电泳图p建立的建立的LmRAPD分子亚分型方法具有快速、简便、分

20、子亚分型方法具有快速、简便、辨别力强、重复性好的特点；辨别力强、重复性好的特点；p市场市场LmRAPD分析表明，分析表明，RTE食品的食品的Lm主要来自主要来自市场生食样品和市场环境污水；市场生食样品和市场环境污水；p某些组合型的某些组合型的Lm可能与人类疾病有关。可能与人类疾病有关。v（2）建立食源性细菌病主动监测网络）建立食源性细菌病主动监测网络2000年，中国年，中国CDC建立了食品中病原细菌监测体系。建立了食品中病原细菌监测体系。此次监测的细菌种类少，覆盖地区有限，资料分析不够，此次监测的细菌种类少，覆盖地区有限，资料分析不够，还不能全面反映我国食品中食源性细菌污染的真实情况。还不能全

21、面反映我国食品中食源性细菌污染的真实情况。v（3）开展食品中病原细菌危害的危险性评估）开展食品中病原细菌危害的危险性评估欧美国家在对食品中病原细菌危害的危险性评估方面进欧美国家在对食品中病原细菌危害的危险性评估方面进行了卓有成效的工作。行了卓有成效的工作。美国已经完成了蛋和蛋类制品中沙门氏菌的危险性分析，美国已经完成了蛋和蛋类制品中沙门氏菌的危险性分析，这是第一次进行的从农场到餐桌的微生物定量危险性评估这是第一次进行的从农场到餐桌的微生物定量危险性评估;对牛肉中的对牛肉中的O157:H7也进行了危险性分析也进行了危险性分析;对不同种类对不同种类即食食品中的产单核细胞李斯特菌进行了危险性评估。即

22、食食品中的产单核细胞李斯特菌进行了危险性评估。我国在食品中病原菌危害的危险性评估方面也做了我国在食品中病原菌危害的危险性评估方面也做了一些工作。一些工作。刘秀梅等开展了主要高危食品刘秀梅等开展了主要高危食品禽肉禽肉/禽类中沙门禽类中沙门氏菌、生食牡蛎中副溶血弧菌污染水平的危险性评估，氏菌、生食牡蛎中副溶血弧菌污染水平的危险性评估，建立了适合我国国情的危险性定量评估模型。建立了适合我国国情的危险性定量评估模型。本实验室以猪肉加工流通过程为平台，进行安全品本实验室以猪肉加工流通过程为平台，进行安全品质指标快速检测与监测。质指标快速检测与监测。4加强生产经营的行业管理及企业自身管理加强生产经营的行业

23、管理及企业自身管理v全面实施食品卫生规范（全面实施食品卫生规范（GHP）或良好生产规范或良好生产规范（GMP），），积极推行危害分析关键控制点积极推行危害分析关键控制点（HACCP）方法，以加强食品生产经营的行为及自方法，以加强食品生产经营的行为及自身管理，保证食品安全。身管理，保证食品安全。5加强动物细菌性疫病防控工作加强动物细菌性疫病防控工作v国际动物卫生组织国际动物卫生组织(OIE)总干事总干事Vallat博士指出，在人博士指出，在人类新出现的疫病中，类新出现的疫病中，75%是动物源性的，世界各国都是动物源性的，世界各国都正面临着严峻挑战。他强调了兽医服务在人兽共患病正面临着严峻挑战。他

24、强调了兽医服务在人兽共患病中中突出的关键地位突出的关键地位。v积极开展动物细菌性疫病，如沙门氏菌病、猪链球积极开展动物细菌性疫病，如沙门氏菌病、猪链球菌病、李斯特菌病、大肠杆菌病、布鲁氏菌病、结核菌病、李斯特菌病、大肠杆菌病、布鲁氏菌病、结核病等病原生态学与流行病学研究、功能基因组学与蛋病等病原生态学与流行病学研究、功能基因组学与蛋白组学研究、分子诊断与基因工程疫苗研究等，做好白组学研究、分子诊断与基因工程疫苗研究等，做好动物细菌性疫病防控工作，从源头控制动物源致病菌动物细菌性疫病防控工作，从源头控制动物源致病菌对食品的污染。对食品的污染。6积极开展国际合作积极开展国际合作v贯彻贯彻“专利战略专利战略”、“标准战略标准战略”和和“人才战略人才战略”原则，开展多边国际合作和双边合作。尤其与原则，开展多边国际合作和双边合作。尤其与WHO、FAO和和OIE的合作。的合作。v选派优秀专业人员参加国际食品安全选派优秀专业人员参加国际食品安全标准制定标准制定，举，举办各类办各类国际会议国际会议，开展，开展合作研究合作研究项目，促进我国食品项目，促进我国食品安全研究工作。安全研究工作。