实验五影响酶活性的因素精品文稿.ppt

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1、实验五影响酶活性的因素第1页，本讲稿共10页 酶的活性受环境酶的活性受环境pHpH的影响极为显著。通常，的影响极为显著。通常，各种酶只有在一定的各种酶只有在一定的pHpH范围内才表现它的活性。范围内才表现它的活性。一种酶表现其活性最高时的一种酶表现其活性最高时的pHpH值，称为该酶的最值，称为该酶的最适适pHpH。低于或高于最适。低于或高于最适pHpH时，酶的活性逐渐降时，酶的活性逐渐降低。唾液淀粉酶的最适低。唾液淀粉酶的最适pHpH值约为值约为6.86.8。停止反应。停止反应。当酶促反应速度达到最大值时的温度，当酶促反应速度达到最大值时的温度，称为酶作用的最适温度。称为酶作用的最适温度。唾液

2、淀粉酶的唾液淀粉酶的最适最适温度温度为为3737。第2页，本讲稿共10页 酶的活性常常受某些物质的影响，有些物酶的活性常常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。ClCl-是唾是唾液淀粉酶的激活剂，而液淀粉酶的激活剂，而CuCu2+2+为其抑制剂。为其抑制剂。本实验以唾液淀粉酶为例，此酶只能催化本实验以唾液淀粉酶为例，此酶只能催化淀粉的水解，最终产物为麦芽糖淀粉的水解，最终产物为麦芽糖和少量的葡萄糖和少量的葡萄糖；淀粉水解程度不同，遇碘呈色反应不同。因此，

3、；淀粉水解程度不同，遇碘呈色反应不同。因此，可以通过呈色反应，了解淀粉水解的程度，从而可以通过呈色反应，了解淀粉水解的程度，从而间接判断唾液淀粉酶活力间接判断唾液淀粉酶活力第3页，本讲稿共10页 的大小。淀粉水解如下：的大小。淀粉水解如下：淀粉淀粉 紫色糊精紫色糊精 红色糊精红色糊精 麦芽糖麦芽糖及少量葡萄糖及少量葡萄糖 蓝色蓝色 紫色紫色 红色红色 无色无色三、操作三、操作 1.1.稀释唾液的制备：先用自来水漱口以稀释唾液的制备：先用自来水漱口以清洁口腔清洁口腔，然，然后取后取20mL20mL蒸馏水含于口中，并蒸馏水含于口中，并做咀嚼动作做咀嚼动作，2min2min后吐后吐入小入小烧杯中烧杯

4、中，加倍稀释备用。，加倍稀释备用。附附:pH5.0、6.8、8.0三种缓冲液的配制三种缓冲液的配制锥形瓶号锥形瓶号pH值值0.2mol/LNa2HPO4（mL）0.1mol/L柠檬酸柠檬酸（mL）15.010.309.7026.815.454.5538.019.450.55遇碘遇碘呈色呈色第4页，本讲稿共10页项项目目试管编号试管编号123稀释唾液稀释唾液(mL)111pH6.8的缓冲液（的缓冲液（mL）222温度预处理温度预处理5min()0371000.2%淀粉溶液淀粉溶液(mL)22（冷却后加淀粉液）（冷却后加淀粉液）2反应温度反应温度()03737检查淀粉水解程度检查淀粉水解程度每隔每

5、隔1min,从从2号管中取出号管中取出1滴反应液置于白瓷板上，滴反应液置于白瓷板上，用碘液检查淀粉水解程度，直至反应液不再变色（为用碘液检查淀粉水解程度，直至反应液不再变色（为橙黄色）橙黄色），取出所有试管，冷却。，取出所有试管，冷却。碘液（滴）碘液（滴）222摇匀观察结果并解释摇匀观察结果并解释2 2温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响 取取3 3支试管编号，按下表操作支试管编号，按下表操作第5页，本讲稿共10页 项项 目目试管编号试管编号1 12 23 3pH5.0pH5.0的缓冲溶液的缓冲溶液(mL)(mL)2 2 pH6.8pH6.8的缓冲溶液的缓冲溶液(mL)(mL)2 2 pH8.

6、0pH8.0的缓冲溶液的缓冲溶液(mL)(mL)2 20.2%0.2%淀粉溶液（淀粉溶液（mLmL）2 22 22 2 稀释唾液（稀释唾液（mLmL）1 11 11 1检查淀粉水解程度检查淀粉水解程度将上述各管溶液混匀后在将上述各管溶液混匀后在3737水浴中保温，水浴中保温，然后每隔然后每隔1min,1min,从从2 2号管中取出号管中取出1 1滴滴反应反应液置于白瓷板上，液置于白瓷板上，用碘液检查淀粉水解程度，用碘液检查淀粉水解程度，直至反应液直至反应液不再变色（为橙不再变色（为橙黄色）黄色），取出所有试管，冷却。，取出所有试管，冷却。碘液（滴）碘液（滴）2 22 22 2摇匀观察结果摇匀观

7、察结果并解释并解释3 3pHpH值对酶活性的影响值对酶活性的影响 取取3 3支试管编号，按下表操作。支试管编号，按下表操作。第6页，本讲稿共10页4 4激活剂和抑制剂对酶活性的影响激活剂和抑制剂对酶活性的影响 取取3 3支试管编号，按下表操作。支试管编号，按下表操作。项项 目目试管编号试管编号1 12 23 3蒸馏水（蒸馏水（mLmL）1 1 0.9%NaCl0.9%NaCl溶液（溶液（mLmL）1 1 1%CuSO1%CuSO4 4溶液（溶液（mLmL）1 10.1%0.1%淀粉溶液（淀粉溶液（mLmL）3 33 33 3 稀释唾液（稀释唾液（mLmL）1 11 11 1检查淀粉水解程度检查

8、淀粉水解程度将上述各管溶液混匀后，在将上述各管溶液混匀后，在3737水浴中保温，水浴中保温，然后每隔然后每隔1min,1min,从从2 2号管中取出号管中取出1 1滴反应液置于白瓷板上，滴反应液置于白瓷板上，用碘液检查淀粉水解程度，用碘液检查淀粉水解程度，直至反应液直至反应液不再变色（为不再变色（为橙黄色）橙黄色），取出所有试管，冷却。，取出所有试管，冷却。碘液（滴）碘液（滴）2 22 22 2摇匀观察结果摇匀观察结果并解释并解释第7页，本讲稿共10页锥形瓶号锥形瓶号pH值值0.2mol/LNa2HPO4（mL）0.1mol/L柠檬酸柠檬酸（mL）15.010.309.7026.815.454

9、.5538.019.450.55四、结果四、结果 观察记录实验结果，观察记录实验结果，并解释之。并解释之。附附:pH5.0、6.8、8.0三种缓冲液的配制三种缓冲液的配制第8页，本讲稿共10页试剂试剂和器材和器材1.试剂：试剂：（1）0.2%淀粉溶液（含淀粉溶液（含0.3%氯化钠）氯化钠）称取称取0.2g淀粉溶于淀粉溶于100mL0.3%氯化钠溶液中，煮沸氯化钠溶液中，煮沸23min。（2）碘液）碘液将碘化钾将碘化钾20g及碘及碘10g溶于溶于100mL水中，使用前稀释水中，使用前稀释10倍。倍。（3）0.2mol/L磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液（4）0.1mol/L柠檬酸溶液柠檬酸溶液（5）0.1淀粉溶液淀粉溶液(不含不含NaCl)（6）0.9氯化钠溶液氯化钠溶液（7）1硫酸铜溶液硫酸铜溶液 第9页，本讲稿共10页2.器材器材：(1)试管与试管架试管与试管架（2）恒温水浴锅）恒温水浴锅（3）冰浴）冰浴（4）沸水浴）沸水浴（5）吸管）吸管（6）烧杯）烧杯（7）锥形瓶）锥形瓶（8）滴管滴管 （9）白瓷板等。）白瓷板等。附附:pH5.0、6.8、8.0三种缓冲液的配制三种缓冲液的配制锥形瓶号锥形瓶号pH值值0.2mol/LNa2HPO4（mL）0.1mol/L柠檬酸柠檬酸（mL）15.010.309.7026.815.454.5538.019.450.55第10页，本讲稿共10页