临床医学尿液微量蛋白检测的临床意义.pptx
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1、会计学1临床医学临床医学(ln chun y xu)尿液微量蛋尿液微量蛋白检测的临床意义白检测的临床意义第一页,共48页。第1页/共48页第二页,共48页。“五项”还是(hi shi)“六项”过敏原过敏原4 项目(xingm)清楚:“定性(dng xng)”还是“定量”最好能写出单个项目名称!最好能写出单个项目名称!第2页/共48页第三页,共48页。HPV HPV检测检测 :HPV6-11 HPV6-11、HPV16-18HPV16-18需要需要(xyo)(xyo)取取2 2管分泌物标本管分泌物标本C C肽肽/胰岛素释放胰岛素释放(shfng)(shfng)试验试验 :需要抽需要抽5 5管血管
2、血5标本标本(biobn)(biobn)少送:少送:第3页/共48页第四页,共48页。主要主要(zhyo)内容内容尿微量白蛋白尿IgG尿尿2微球蛋白微球蛋白尿转铁蛋白尿转铁蛋白尿1微球蛋白尿视黄醇结合(jih)蛋白第4页/共48页第五页,共48页。分子量:分子量:6900069000分子直径分子直径(zhjng)(zhjng):3.6nm3.6nmPI:4.9PI:4.9肾小球滤过膜:不滤过肾小球滤过膜:不滤过肾小管重吸收:少量肾小管重吸收:少量 一、尿微量白蛋白一、尿微量白蛋白 理化(lhu)性质:第5页/共48页第六页,共48页。分子量:分子量:7700077000分子直径分子直径(zhj
3、ng)(zhjng):3.8nm3.8nmPI:5.2PI:5.2肾小球滤过膜:不滤过肾小球滤过膜:不滤过肾小管重吸收:少量肾小管重吸收:少量 二、尿转铁蛋白二、尿转铁蛋白 理化(lhu)性质:第6页/共48页第七页,共48页。分子分子(fnz)(fnz)量:量:150000150000分子分子(fnz)(fnz)直径:直径:10-50nm10-50nmPI:5.8-7.2PI:5.8-7.2肾小球滤过膜:不滤过肾小球滤过膜:不滤过肾小管重吸收:少量肾小管重吸收:少量 三、尿免疫三、尿免疫(miny)(miny)球蛋白球蛋白IgG IgG 理化(lhu)性质:第7页/共48页第八页,共48页。
4、分子量:分子量:1180011800分子直径:分子直径:3.4-3.8nm3.4-3.8nmPI:4.9PI:4.9肾小球滤过膜:自由肾小球滤过膜:自由(zyu)(zyu)滤过滤过肾小管重吸收:几乎全部肾小管重吸收:几乎全部 四、尿四、尿22微球蛋白微球蛋白 理化(lhu)性质:第8页/共48页第九页,共48页。分子分子(fnz)(fnz)量:量:26000-3300026000-33000分子分子(fnz)(fnz)直径:直径:3.6nm3.6nmPI:3.6-4.4PI:3.6-4.4肾小球滤过膜:自由滤过肾小球滤过膜:自由滤过肾小管重吸收:肾小管重吸收:99.999.9 五、尿五、尿11
5、微球蛋白微球蛋白 理化(lhu)性质:第9页/共48页第十页,共48页。分子量:分子量:2100021000分子直径分子直径(zhjng)(zhjng):3.8nm3.8nmPI:4.4-4.8PI:4.4-4.8肾小球滤过膜:自由滤过肾小球滤过膜:自由滤过肾小管重吸收:肾小管重吸收:95-9995-99 六、尿视黄醇结合六、尿视黄醇结合(jih)(jih)蛋白蛋白 理化(lhu)性质:第10页/共48页第十一页,共48页。尿微量蛋白尿微量蛋白(dnbi)的检测方法的检测方法传统测定微量蛋白的方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫分析法(RIA)等,其检测精度较差,操作繁杂。免疫散射比
6、浊法操作简便,测量精度较高,结果更准确,但是必须使用特定蛋白分析仪,仪器和试剂(shj)昂贵,给使用带来一定的影响,而透射比浊法则可用于各种自动化分析仪,具有速度快、省试剂(shj)、适于批量检测的优点为临床上高血压和糖尿病肾损害的早期诊断提供了一个更为快速、简便的方法。第11页/共48页第十二页,共48页。免疫免疫(miny)透射比浊法透射比浊法原理:利用(lyng)抗原(白蛋白)和特异性抗体(羊抗人白蛋白抗血清)相结合,形成不溶性免疫复合物,使反应液产生混浊,其浊度高低即透光度减少、吸光度增加反映血清样本中白蛋白的浓度,可由校准品所作的浓度吸光度相应曲线算出。第12页/共48页第十三页,共
7、48页。免疫免疫(miny)透射比浊法透射比浊法影响免疫比浊测定的主要因素影响免疫比浊测定的主要因素抗原、抗体比例与浊度关系:抗原过抗原、抗体比例与浊度关系:抗原过量,出现量,出现“带现象带现象”,IC分子分子(fnz)小,小,且可发生再解离,浊度下降,光散射减少。且可发生再解离,浊度下降,光散射减少。抗体过量,抗体过量,IC形成随抗原量增加到抗原抗形成随抗原量增加到抗原抗体最适比例时达高峰。抗体须过量但又必体最适比例时达高峰。抗体须过量但又必须适量,抗体浓度是测定关键。须适量,抗体浓度是测定关键。第13页/共48页第十四页,共48页。免疫免疫(miny)透射比浊法透射比浊法影响免疫比浊测定的
8、主要因素影响免疫比浊测定的主要因素 抗体质量:特异性、效价、亲和力、抗体质量:特异性、效价、亲和力、R型抗体型抗体 高亲和性抗体的抗原高亲和性抗体的抗原(kngyun)结合点结合点与抗原与抗原(kngyun)表位的空间构型上非常表位的空间构型上非常适合,两者结合牢固,不容易解离。反之,适合,两者结合牢固,不容易解离。反之,低亲和性抗体与抗原低亲和性抗体与抗原(kngyun)形成的复形成的复合物较易解离。合物较易解离。第14页/共48页第十五页,共48页。免疫免疫(miny)透射比浊法透射比浊法影响免疫比浊测定的主要因素影响免疫比浊测定的主要因素 R型抗体以家兔免疫血清为代表,型抗体以家兔免疫血
9、清为代表,具有较宽的抗原具有较宽的抗原(kngyun)抗体合适比例抗体合适比例范围,只在抗原范围,只在抗原(kngyun)过量时,才易过量时,才易出现溶性免疫复合物,大多数动物的免疫出现溶性免疫复合物,大多数动物的免疫血均属此型。血均属此型。H型抗体以马免疫血清为代表,其抗型抗体以马免疫血清为代表,其抗原原(kngyun)与抗体的合适比例范围较窄,与抗体的合适比例范围较窄,抗原抗原(kngyun)或抗体过量,均可形成可或抗体过量,均可形成可溶性免疫复合物。人和许多大动物的抗血溶性免疫复合物。人和许多大动物的抗血清皆属清皆属H。第15页/共48页第十六页,共48页。免疫免疫(miny)透射比浊法
10、透射比浊法影响免疫影响免疫(miny)比浊测定的主要因素比浊测定的主要因素反应溶液:反应溶液:pH6.58.5,适当浓度,适当浓度电解质(中和抗原抗体复合物表面电荷,电解质(中和抗原抗体复合物表面电荷,促进凝聚)、离子强度(大,促进凝聚)、离子强度(大,IC形成快);形成快);一般常用磷酸盐缓冲液。一般常用磷酸盐缓冲液。第16页/共48页第十七页,共48页。免疫免疫(miny)透射比浊法透射比浊法影响免疫比浊测定的主要因素影响免疫比浊测定的主要因素(yn s)增浊剂:非离子型亲水剂如聚乙二增浊剂:非离子型亲水剂如聚乙二醇(醇(PEG)、吐温)、吐温-20等,以等,以PEG6000最好,浓度一般
11、为最好,浓度一般为3%4%。浓度过高。浓度过高可致非特异沉淀。可致非特异沉淀。第17页/共48页第十八页,共48页。免疫免疫(miny)透射比浊法透射比浊法免疫比浊法测定的注意事项:免疫比浊法测定的注意事项:1.标本标本 3.定标定标(dn bio)2.试剂试剂 4.线性线性 第18页/共48页第十九页,共48页。免疫免疫(miny)(miny)透射比浊法透射比浊法 尿微量白蛋白检测尿微量白蛋白检测(jin c)(jin c)方法方法 检测(jin c)方法:原理:利用抗原(白蛋白)和特异性抗体(羊抗人白蛋白抗血清)相结合,形成不溶性免疫复合物,使反应液产生混浊,其浊度高低即透光度减少、吸光度
12、增加反映血清样本中白蛋白的浓度,可由校准品所作的剂量相应曲线算出。第19页/共48页第二十页,共48页。微量蛋白微量蛋白(dnbi)检测临床意义检测临床意义 正常肾小球基底膜具有正常肾小球基底膜具有34nm的微孔的微孔,并带并带有一层负电荷有一层负电荷,即具有孔径屏障和电荷屏障即具有孔径屏障和电荷屏障,使血浆使血浆(xujing)中带负电荷的中等分子及大分子蛋白中带负电荷的中等分子及大分子蛋白质不易通过。在正常情况下质不易通过。在正常情况下,肾小球滤液中的小分肾小球滤液中的小分子蛋白质子蛋白质95%99%可通过肾小管重吸收可通过肾小管重吸收,因而因而尿液中蛋白质含量很少。正常生理情况下尿液中蛋
13、白质含量很少。正常生理情况下,尿中这尿中这些蛋白质含量仅为微克或毫微克水平些蛋白质含量仅为微克或毫微克水平,在各种致病在各种致病因子作用下因子作用下,肾小球滤过膜和肾小管发生结构和功肾小球滤过膜和肾小管发生结构和功能损伤能损伤,使尿液中蛋白质过高使尿液中蛋白质过高,超过了肾小管的重吸超过了肾小管的重吸收功能而出现蛋白尿。收功能而出现蛋白尿。第20页/共48页第二十一页,共48页。n n(1 1)标标本本由由临临床床运运送送至至实实验验室室要要尽尽可可能能 快快,必必须须分分离离出出血清(浆)后运送;血清(浆)后运送;n n(2 2)标标本本运运送送要要注注意意防防止止(fngzh)(fngzh
14、)标标本本外外溢溢、蒸蒸发发和和污染(标本管要盖盖子);污染(标本管要盖盖子);n n(3 3)足量。)足量。四、标本四、标本(biobn)(biobn)保存与运送:保存与运送:每一个标本都是唯一的,不可替代的!每一个标本都是唯一的,不可替代的!每每一一个个标标本本都都是是危危险险(wixin)(wixin)的的,具具有有潜在传染性!潜在传染性!第21页/共48页第二十二页,共48页。肾肾小小球球滤滤过过膜膜示示意意图图 第22页/共48页第二十三页,共48页。第23页/共48页第二十四页,共48页。微量白蛋白检测微量白蛋白检测(jin c)临床意义临床意义 微量清蛋白尿对早期肾损害诊断具有重
15、要意义。实践证明,单一指标有其局限性。因为早期肾损害不仅是肾小球损害,有的可以是肾小管功能的受损,也可以是两者同时受损。正常尿中蛋白质以白蛋白为主,而分子量低于50 000的蛋白质大部分被肾小管重吸收,而尿中含量极微。健康人尿中mAlb95%可信限95%可信限,即为早期肾小球损伤。这类患者处于疾病早期,及时检出进行治疗,可阻断病情向不可逆蛋白阶段发展,对提高病人今后(jnhu)的生存质量和减轻社会医疗经济负担具有重大意义。第24页/共48页第二十五页,共48页。微量白蛋白检测微量白蛋白检测(jin c)临床意义临床意义 进十年来,mAlb检测方法经过放射免疫法,酶免疫法和免疫浊度法3个阶段,已
16、逐渐成熟起来。目前,免疫浊度测定技术已得到推广(tugung)。速率散射浊度法灵敏度,准确度,精密度均较好,但需用高质量的特种蛋白分析仪。而透射比浊法则可用于各种自动化分析仪,具有速度快、省试剂、适于批量检测的优点。第25页/共48页第二十六页,共48页。转铁蛋白检测转铁蛋白检测(jin c)临床意义临床意义 转铁蛋白和白蛋白一样均属小分子带负电荷蛋白。前者分子量为77000,直径为3.8nm,后者为66000,分子直径为3.6nm。虽然转铁蛋白分子量略大于白蛋白,但所带的负电荷明显小于白蛋白。由于漏出肾小球基底膜的蛋白质除了要受基底膜网孔大小屏障的影响外,还要受到电荷屏障的影响。肾小球基底膜
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