任务培养基制备技术.ppt

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1、会计学1任务培养基制备任务培养基制备(zhbi)技术技术第一页，共34页。n n培养一种大肠杆菌的培养基配方如下：培养一种大肠杆菌的培养基配方如下：培养一种大肠杆菌的培养基配方如下：培养一种大肠杆菌的培养基配方如下：n n 葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g 0.5g K2HPO4 1g n n MgSO4 0.2g MgSO4 0.2gn n NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g 水水水水 1000mL 1000mLn n大肠杆菌的营养类型大肠杆菌的营养类型大肠杆菌的营养类型大肠杆菌的营养类型(lixng)(lixng)？

2、n n 化能异养型。化能异养型。化能异养型。化能异养型。n n培养基的基本要求？培养基的基本要求？培养基的基本要求？培养基的基本要求？n n 至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖第2页/共33页第1页/共33页第二页，共34页。培养基类型培养基类型合成培养基合成培养基半合成培养半合成培养天然培养基天然培养基基本培养基基本培养基富集培养基富集培养基鉴别培养基鉴别培养基固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基按成分不同划分按成分不同划分按用途划分按用途划分按物

3、理按物理(wl)形态划分形态划分二、培养基的分类二、培养基的分类(fn li)第3页/共33页第2页/共33页第三页，共34页。(一一)按成分按成分(chng fn)(chng fn)划分：划分：n n天然(tinrn)培养基n n合成培养基n n半合成培养基第4页/共33页第3页/共33页第四页，共34页。优点：原料来源充足优点：原料来源充足(chngz)(chngz)、营养丰富、经济简便、营养丰富、经济简便 缺点：成分和含量不确定，重复性差缺点：成分和含量不确定，重复性差 用途：适用于实验室粗放性实验和大规模生产之用。用途：适用于实验室粗放性实验和大规模生产之用。举例：麦芽汁培养基举例：麦

4、芽汁培养基天然天然(tinrn)(tinrn)培养基培养基第6页/共33页第5页/共33页第六页，共34页。b.b.合成培养基：用化学成分和量都确切合成培养基：用化学成分和量都确切(quqi)(quqi)知知道的纯化学试剂制成的培养基。道的纯化学试剂制成的培养基。优点：成分优点：成分(chng fn)(chng fn)精确、稳定、重复性好精确、稳定、重复性好 缺点：价格较贵，微生物生长缓慢缺点：价格较贵，微生物生长缓慢用途：适用于做分类鉴定，生物测定、选种育种等要用途：适用于做分类鉴定，生物测定、选种育种等要 求较高的研究工作。求较高的研究工作。举例：高氏一号培养基，查氏培养基等举例：高氏一号

5、培养基，查氏培养基等 第7页/共33页第6页/共33页第七页，共34页。(一一)按照培养基成分按照培养基成分(chng fn)(chng fn)来源分：来源分：c.c.半合成半合成(hchng)(hchng)培养基：用天然有机物和化学药品制培养基：用天然有机物和化学药品制成的培养基。成的培养基。特点：能充分满足微生物的营养要求特点：能充分满足微生物的营养要求(yoqi)(yoqi)，适合于大多数，适合于大多数微生物的培养。微生物的培养。举例：牛肉膏蛋白胨培养基举例：牛肉膏蛋白胨培养基第8页/共33页第7页/共33页第八页，共34页。可溶性淀粉可溶性淀粉(dinfn)20.0克克KNO3 1.0

6、克克K2HPO4 0.5克克MgSO47H2O 0.5 克克NaCl 0.5克克FeSO4 7H2O 溶液溶液2滴（滴（10%）蒸馏水蒸馏水 1000毫升毫升牛肉膏牛肉膏 3.0 克克蛋白胨蛋白胨 10.0 克克食盐食盐(shyn)5.0 克克蒸馏水（自来水）蒸馏水（自来水）1000毫升毫升合成合成(hchng)培养基培养基 天然培养基天然培养基 第9页/共33页第8页/共33页第九页，共34页。天然的固体培养基天然的固体培养基 如马铃薯块、麸皮、米糠、胡萝如马铃薯块、麸皮、米糠、胡萝 卜条、木屑等；卜条、木屑等；凝固剂凝固剂(1.52琼脂琼脂)，可用于微生物的分离、鉴定、计数，可用于微生物的

7、分离、鉴定、计数(j sh)、保藏等、保藏等凝固剂凝固剂(0.30.6琼脂琼脂)。常用于观察细菌运动。常用于观察细菌运动(yndng)特特征，噬菌体效价鉴定等。征，噬菌体效价鉴定等。微生物能充分接触养料，有利于生长繁殖及代谢产物微生物能充分接触养料，有利于生长繁殖及代谢产物(chnw)(chnw)积累，积累，常用于微生物大规模工业发酵生产。常用于微生物大规模工业发酵生产。固体培养基固体培养基(solid medium)半固体培养基半固体培养基(semi-solid medium)液体培养基液体培养基(liquid medium)（二）按照培养基的物理性状分（二）按照培养基的物理性状分第10页/

8、共33页第9页/共33页第十页，共34页。不被微生物液化、分解和利用；不被微生物液化、分解和利用；在微生物生长的温度范围内保持在微生物生长的温度范围内保持(boch)固体固体状态；状态；凝固点温度对微生物生长无害；凝固点温度对微生物生长无害；不因灭菌而被破坏；不因灭菌而被破坏；透明度好、黏着力强；透明度好、黏着力强；配制方便，价格低廉。配制方便，价格低廉。理想的凝固剂应具备以下理想的凝固剂应具备以下(yxi)条件：条件：琼脂：胶体多糖(du tn)，熔点96，凝固点40-50 第11页/共33页第10页/共33页第十一页，共34页。第12页/共33页第11页/共33页第十二页，共34页。n n

9、基础(jch)培养基n n加富培养基n n选择培养基n n鉴别培养基n n生产用培养基(三三三三)按照按照按照按照(nzho)(nzho)(nzho)(nzho)培养用途分：培养用途分：培养用途分：培养用途分：第13页/共33页第12页/共33页第十三页，共34页。b.b.加富培养基：根据待分离微生物的特殊营养要求加富培养基：根据待分离微生物的特殊营养要求(yoqi)(yoqi)配制的营养物质。使目标微生物能在其中旺盛生长，配制的营养物质。使目标微生物能在其中旺盛生长，逐步占优势，从而达到与杂菌分离的目的。逐步占优势，从而达到与杂菌分离的目的。培养时要同时考虑营养成分和培养环境两个因素，才能培

10、养时要同时考虑营养成分和培养环境两个因素，才能达到预期的目的达到预期的目的a.a.基本基本(jbn)(jbn)培养基：能满足一般微生物生长繁殖所培养基：能满足一般微生物生长繁殖所需要培养基。需要培养基。(三三)按照按照(nzho)(nzho)培养培养用途：用途：第14页/共33页第13页/共33页第十四页，共34页。C.C.选择培养基选择培养基 在培养基中加入抑在培养基中加入抑制剂以杀死或抑制不制剂以杀死或抑制不需要的菌种，而目标需要的菌种，而目标微生物因对该抑制剂微生物因对该抑制剂有抗性而正常有抗性而正常(zhngchng)(zhngchng)生长繁生长繁殖的一类培养基。殖的一类培养基。(三

11、三)按照按照(nzho)(nzho)培养基的用培养基的用途分：途分：第16页/共33页第15页/共33页第十六页，共34页。抑制剂：抑制剂：抑制剂：抑制剂：青霉素（抑制青霉素（抑制青霉素（抑制青霉素（抑制 G+G+细菌）细菌）细菌）细菌）分离分离分离分离G-G-细菌细菌细菌细菌 抗生素抗生素抗生素抗生素 氯霉素，链霉素（抑制细氯霉素，链霉素（抑制细氯霉素，链霉素（抑制细氯霉素，链霉素（抑制细 菌菌菌菌 分离酵母、霉菌分离酵母、霉菌分离酵母、霉菌分离酵母、霉菌 染料染料染料染料 胆盐：抑制胆盐：抑制胆盐：抑制胆盐：抑制G+G+分离分离分离分离G-G-孟加拉红：抑制孟加拉红：抑制孟加拉红：抑制孟加

12、拉红：抑制 分离分离分离分离 用于选择性的物理用于选择性的物理用于选择性的物理用于选择性的物理(wl(wl)因素有：温度，氧气，因素有：温度，氧气，因素有：温度，氧气，因素有：温度，氧气，pHpH值，渗透值，渗透值，渗透值，渗透压等压等压等压等第17页/共33页第16页/共33页第十七页，共34页。目的：增殖少数目的：增殖少数 手段：手段：“投其所好投其所好”混合样品混合样品 富集培养基富集培养基 成成为为(chngwi)(chngwi)中劣势菌中劣势菌 选择培养基选择培养基 优势菌优势菌 目的：抑制多数菌目的：抑制多数菌 手段：手段：“取其所抗取其所抗”第18页/共33页第17页/共33页第

13、十八页，共34页。d.d.鉴别培养基：利用微鉴别培养基：利用微生物的代谢生物的代谢(dixi)(dixi)产产物与指示剂的显色反应，物与指示剂的显色反应，快速鉴别不同微生物的快速鉴别不同微生物的营养基质。营养基质。(三三)按照按照(nzho)(nzho)培养基的培养基的用途：用途：第19页/共33页第18页/共33页第十九页，共34页。鉴别(jinbi)培养基(differential medium)伊红伊红-美蓝培养基（美蓝培养基（EMBEMB）：伊红和美蓝二种染料，可用）：伊红和美蓝二种染料，可用于鉴别食品、水源、乳制品等待检样品中是否含有大肠于鉴别食品、水源、乳制品等待检样品中是否含有大

14、肠杆菌杆菌(d chn n jn)(d chn n jn)。如果有大肠杆菌如果有大肠杆菌(d chn n jn)(d chn n jn)，则其代谢产物能，则其代谢产物能与伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。与伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。第20页/共33页第19页/共33页第二十页，共34页。三、培养基应具备三、培养基应具备(jbi)的条件的条件n n具有合适具有合适(hsh)(hsh)的营养物质，满的营养物质，满足微生物对六大营养物质的需求；足微生物对六大营养物质的需求；n n应始终保持在微生物发育的应始终保持在微生物发育的pHpH值范值范围内；围内；n n任何

15、培养基一旦配成，须立即灭菌任何培养基一旦配成，须立即灭菌后才能使用。后才能使用。第22页/共33页第21页/共33页第二十二页，共34页。（一）目的(md)明确（二）营养协调（三）营养适宜（四）条件适宜（五）经济节约四、配制四、配制(pizh)培养基的原培养基的原则则第23页/共33页第22页/共33页第二十三页，共34页。（一）目的（一）目的(md)明确明确培养何物？培养何物？积累代谢产物？积累代谢产物？实验室或大规模发酵？实验室或大规模发酵？培养菌体？培养菌体？第24页/共33页第23页/共33页第二十四页，共34页。生理特点不生理特点不同同细菌细菌放线放线菌菌霉菌霉菌营养要求不同营养要求

16、不同（）培养基）培养基（）培养基）培养基（）培养基）培养基（二）营养（二）营养(yngyng)(yngyng)适宜适宜自养自养(z yn)(z yn)微生物微生物简单的无机物简单的无机物异养微生物异养微生物至少提供一种有机物至少提供一种有机物培养培养(piyng)自生固氮自生固氮微生物？微生物？培养乳酸菌？培养乳酸菌？无无氮培养基氮培养基添加生长因子添加生长因子第25页/共33页第24页/共33页第二十五页，共34页。（三）营养（三）营养(yngyng)(yngyng)协调协调营养物质的浓度及配比营养物质的浓度及配比(pi b)(pi b)合适合适 浓度过小浓度过小 浓度过高浓度过高水碳源氮源

17、水碳源氮源P P、S SK K、MgMg生长因子生长因子第26页/共33页第25页/共33页第二十六页，共34页。（三）营养（三）营养（三）营养（三）营养(yngyng)(yngyng)(yngyng)(yngyng)协调协调协调协调一般一般(ybn)培养基中培养基中C/N比为（比为（100:0.52）但谷氨酸生产中较特殊：但谷氨酸生产中较特殊：C/N 4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；C/N3/1 时，菌体生长受抑制，而谷氨酸大量增加。时，菌体生长受抑制，而谷氨酸大量增加。第27页/共33页第26页/共33页第二十七页，共34页。1.渗透压渗透压等渗溶液等

18、渗溶液(rngy)高渗溶液高渗溶液(rngy)细胞发生（细胞发生（）低渗溶液低渗溶液(rngy)细胞（细胞（）（四）条件（四）条件(tiojin)适宜适宜第28页/共33页第27页/共33页第二十八页，共34页。细细 菌：菌：7.08.0放线菌：放线菌：7.58.5酵母菌：酵母菌：3.86.0霉霉 菌：菌：4.05.82.pH pH 内源调节 缓冲液：K2HPO4/KH2PO4（pH 6.47.2）调节方式(fngsh)固体碳酸盐：CaCO3 外源调节：流加酸或碱第29页/共33页第28页/共33页第二十九页，共34页。加入加入CaCO3 “备用碱备用碱”：CO32 HCO3 H2CO3 CO

19、2+H2O+H+H+H+H磷酸磷酸(ln sun)缓冲液：缓冲液：pH值从值从6.7.之间之间K2HPO4+HCl KH2PO4+KClKH2PO4+KOH K2HPO4+H2O2.pH第30页/共33页第29页/共33页第三十页，共34页。n n价格低廉价格低廉n n货源充足货源充足n n运输方便运输方便(fngbin)n n无毒环保无毒环保（五）经济（五）经济(jngj)(jngj)节约节约第32页/共33页第31页/共33页第三十二页，共34页。总总 结结6大类营养物质：大类营养物质：4大类营养类型：大类营养类型：常用的培养基分类别包括：常用的培养基分类别包括：培养基应具备培养基应具备(jbi)的的3个条个条件：件：配制培养基的配制培养基的5大原则：大原则：第33页/共33页第32页/共33页第三十三页，共34页。内容(nirng)总结会计学。自养微生物简单(jindn)的无机物。异养微生物至少提供一种有机物。浓度过小。浓度过高。水碳源氮源P、SK、Mg生长因子。+H+。H。磷酸缓冲液：pH值从6.7.之间。入还原剂（半胱氨酸、巯基乙酸钠、Na2S和抗坏血酸）。配制培养基的5大原则：第三十四页，共34页。