淀粉酶检测学习教案.pptx

《淀粉酶检测学习教案.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《淀粉酶检测学习教案.pptx（35页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、会计学1淀粉酶检测淀粉酶检测(jin c)第一页，共35页。Outlinen nFeature of saliva and salivary stainn nObjective&requirementn nConfirmatory testn nIndividual identification第1页/共34页第二页，共35页。Feature of saliva and salivary stainSalivary glands第2页/共34页第三页，共35页。Saliva secretion 唾液(tuy)的分泌第3页/共34页第四页，共35页。Saliva composition 唾液(t

2、uy)成分第4页/共34页第五页，共35页。正常纯净唾液正常纯净唾液(tuy)(tuy)：无色无味接近中性液体：无色无味接近中性液体,低渗低渗 通常情况为泡沫状、稍混浊粘稠液体通常情况为泡沫状、稍混浊粘稠液体 正常分泌量：成人每日正常分泌量：成人每日1.01.5L1.01.5L 分泌量及性质受精神因素、刺激强度等影响分泌量及性质受精神因素、刺激强度等影响 Physical&Chemical Properties唾液(tuy)的理化性质第5页/共34页第六页，共35页。唾液唾液清水清水(qn shu)(qn shu)漱口漱口自然流出自然流出试管试管/唾液斑唾液斑/灭活酶灭活酶口腔拭子口腔拭子棉签

3、棉签/纱布浸湿纱布浸湿反复擦拭口腔粘膜反复擦拭口腔粘膜 无创，简便，对照无创，简便，对照样本样本Collect of saliva 新鲜唾液(tuy)收集第6页/共34页第七页，共35页。什么情况会留下什么情况会留下(li xi)唾液斑？唾液斑？第7页/共34页第八页，共35页。唾液斑提取唾液斑提取:整件提取整件提取/二步转移二步转移(zhuny)性侵犯案皮肤咬痕、舔舐痕提取性侵犯案皮肤咬痕、舔舐痕提取第8页/共34页第九页，共35页。Objective&requirement 检验目的(md)与要求Is it salivary stain?Is it human salivary stain

4、 or animal salivary stain?Individualize of salivary stain第9页/共34页第十页，共35页。Confirmation of Salivary Stain Confirmation of Salivary Stain 唾液唾液(tuy)(tuy)斑的证明斑的证明检出淀粉酶口腔(kuqing)脱落上皮细胞确证(qu zhn)唾液斑第10页/共34页第十一页，共35页。Detection of amylase 淀粉酶检测(jin c)n nHigh levels of amylase in the saliva.n nCan be found

5、in other body fluids saliva:263 000-376 000 U/Lsaliva:263 000-376 000 U/L Urine:263-940 U/L Urine:263-940 U/L Blood:110 U/L Blood:110 U/L Semen:35 U/L Semen:35 U/L Nasal secretion:undetectable levels Nasal secretion:undetectable levels Sweat:undetectable levels Sweat:undetectable levels第11页/共34页第十二页

6、，共35页。l Amylase enzyme can break down starch(淀粉(dinfn)l Two kinds of test:l Starch-iodine assay 淀粉(dinfn)碘实验l Phadebas Reagent Phadebas 试剂Detection of amylase 淀粉酶检测(jin c)第12页/共34页第十三页，共35页。Starch-Iodine Test Starch-Iodine Test 淀粉淀粉(dinfn)(dinfn)碘碘实验实验principleIodine+starch turn blueAmylase breaks d

7、own starch淀粉酶检测starch3737Iodine阴性阴性(ynxng)蓝色蓝色无淀粉酶无淀粉酶/失活失活阳性阳性(yngxng)(yngxng)：无色无色/淡黄色淡黄色有淀粉酶有淀粉酶设置已知阳性和阴性对照！设置已知阳性和阴性对照！假阳性假阳性 假阴性假阴性第13页/共34页第十四页，共35页。生成(shn chn)糖的证明淀粉淀粉(dinfn)(dinfn)碘碘 阳性阳性反应反应(fnyn(fnyng)g)液液碱性铜氯化三苯基四氮唑液短时加热阳性 红色沉淀阴性 无色/浅红色阴性 无沉淀阳性 红色沉淀第14页/共34页第十五页，共35页。Starch-Iodine Test St

8、arch-Iodine Test 淀粉淀粉(dinfn)(dinfn)碘实验碘实验Gel diffuse 凝胶法:Gel containing starch is stained blue with iodine Sample is added to well in gel.If amylase(saliva)is present,the blue color begins to vanishORbeforenegativepositive含碘淀粉含碘淀粉(dinfn)(dinfn)凝胶凝胶无淀粉酶无淀粉酶有淀粉酶有淀粉酶淀粉酶检测第15页/共34页第十六页，共35页。Phadebas Rea

9、gent 菲德倍斯试剂(shj)法nStarch linked to a colored dye nPresence of amylase releases the dyen 淀粉包裹染料(rnlio)制成微球，淀粉酶能将淀粉分解，染料(rnlio)释放使溶液呈蓝色反应。Two methods for using Phadebas Reagent:Press Test 按压(ny)法Tube Test 试管法淀粉酶检测第16页/共34页第十七页，共35页。The PhadebasThe Phadebas Forensic Press test Forensic Press testStep 1

10、:Place item to be tested on a flat and clean surface.Dampen the item with waterStep 2:Cover testing area with Phadebas paper,reagent side down.Dampen Phadebas paper with water第17页/共34页第十八页，共35页。Step 3:Trace an outline of the testing area on the Phadebas paperStep 4:Cover the Phadebas paper with a cl

11、ean glass board.Weigh down the ArrangementStep 5:Start a timer and observe the test frequently during 40 minutes.Record the time of positive reaction(distinct area of diffuse blue color).第18页/共34页第十九页，共35页。The PhadebasThe Phadebas Forensic Tube Test Forensic Tube TestSmall piece containing stain is

12、placed in tubeWater and Phadebas reagent added,incubated in 37CentrifugedAmount of color in top liquid is measured by a spectrophotometer.第19页/共34页第二十页，共35页。n n灵敏、特异，羊、马、牛、猪、猫、狗等动物唾液灵敏、特异，羊、马、牛、猪、猫、狗等动物唾液灵敏、特异，羊、马、牛、猪、猫、狗等动物唾液灵敏、特异，羊、马、牛、猪、猫、狗等动物唾液（斑）检测结果为阴性，尿液、血液（斑）检测结果为阴性，尿液、血液（斑）检测结果为阴性，尿液、血液（斑）检

13、测结果为阴性，尿液、血液(xuy)(xuy)(xuy)(xuy)、精、精、精、精液、汗液、鼻腔分泌物等反应不敏感液、汗液、鼻腔分泌物等反应不敏感液、汗液、鼻腔分泌物等反应不敏感液、汗液、鼻腔分泌物等反应不敏感 n n干扰：粪便污染（淀粉酶含量与唾液接近）干扰：粪便污染（淀粉酶含量与唾液接近）干扰：粪便污染（淀粉酶含量与唾液接近）干扰：粪便污染（淀粉酶含量与唾液接近）Phadebas Reagent 菲德倍斯试剂(shj)法第20页/共34页第二十一页，共35页。Oral epithelial cells口腔(kuqing)脱落上皮细胞HE染色：形态(xngti)以多角形为主，胞质呈粉红色，胞核

14、圆形，较小，蓝染不特异第21页/共34页第二十二页，共35页。Immunochromatographic strip(ICS)testImmunochromatographic strip(ICS)test免疫免疫(miny)(miny)层析试剂条层析试剂条原理：原理：免疫胶体金技术检测人唾免疫胶体金技术检测人唾液液-淀粉酶（淀粉酶（-amylase amylase）灵敏灵敏(ln mn)(ln mn)（1 1微微升唾液），具有高度种属升唾液），具有高度种属特异性，不受尿液、汗液特异性，不受尿液、汗液等干扰。等干扰。第22页/共34页第二十三页，共35页。Individualize of sa

15、livary stainIndividualize of salivary stain唾液斑个人唾液斑个人(grn)(grn)识别识别ABO血型(xuxng)蛋白(dnbi)多态性酶型DNADNA分析分析第23页/共34页第二十四页，共35页。Absorption-inhibition testAbsorption-inhibition test凝集抑制凝集抑制(yzh)(yzh)试验试验-ABO-ABO血型测定血型测定无A抗原(kngyun)抗A A抗体(kngt)不结合效价不变A红细胞凝集第24页/共34页第二十五页，共35页。Absorption-inhibition testAbsor

16、ption-inhibition test凝集抑制凝集抑制(yzh)(yzh)试验试验含A抗原(kngyun)抗A A抗原抗体结合，游离A抗体减少(jinsho)效价下降A红细胞凝集减弱或不凝集关键：抗血清的标化关键：抗血清的标化第25页/共34页第二十六页，共35页。抗血清的标化抗血清的标化抗血清的标化抗血清的标化n n效价：产生明显凝集反应的最大抗血清稀释效价：产生明显凝集反应的最大抗血清稀释(xsh)(xsh)倍数倍数n n标化抗血清标化抗血清n n 按照最大抗血清稀释按照最大抗血清稀释(xsh)(xsh)倍数稀释倍数稀释(xsh)(xsh)抗血清原液抗血清原液第26页/共34页第二十七

17、页，共35页。DNA AnalysisnWith some biological stains,DNA testing is more important than identifying the stain.nIf a test destroys cells,it may not be done before DNA testing第27页/共34页第二十八页，共35页。样本(yngbn)预处理PCR 扩增毛细管电泳荧光(ynggung)检测有 机 法Chelex-100法DNA提取(tq)STR 分型DNADNA分析分析PAGE电泳银染检测第28页/共34页第二十九页，共35页。某市多家单

18、位发生盗窃。犯罪嫌疑人作案时均戴手套某市多家单位发生盗窃。犯罪嫌疑人作案时均戴手套作案，无法取到有价值的指掌纹，虽然作案手法相似，作案，无法取到有价值的指掌纹，虽然作案手法相似，但无并案依据。现场勘验时发现在多个案发现场提取的但无并案依据。现场勘验时发现在多个案发现场提取的烟头或嫌疑人在现场喝过水的纸杯。烟头或嫌疑人在现场喝过水的纸杯。问题：如何正确提取烟蒂及水杯以尽量避免唾液斑的问题：如何正确提取烟蒂及水杯以尽量避免唾液斑的污染和损失？盗窃案中生物污染和损失？盗窃案中生物(shngw)(shngw)样本的意义？样本的意义？第29页/共34页第三十页，共35页。某年某月某日，某地旅馆发现一具女

19、尸，提取死者阴道拭子及现场卫生纸。一房客未退房就离开，其住处卫生间遗留1把牙刷。问题：性侵犯案件(njin)中，应该如何发现提取生物样本？如何进行牙刷上脱落细胞检测？第30页/共34页第三十一页，共35页。某年某月某日，某市某一居民小区发生入室抢劫案，某年某月某日，某市某一居民小区发生入室抢劫案，勘验现场时发现卧室地上一口香糖胶，系嫌疑人所留。勘验现场时发现卧室地上一口香糖胶，系嫌疑人所留。问题：如何问题：如何(rh)(rh)进行口香糖类检材的提取？如何进行口香糖类检材的提取？如何(rh)(rh)处理口香糖以获取尽可能多的脱落细胞？处理口香糖以获取尽可能多的脱落细胞？第31页/共34页第三十二页，共35页。第32页/共34页第三十三页，共35页。summary第33页/共34页第三十四页，共35页。感谢您的观看感谢您的观看(gunkn)。第34页/共34页第三十五页，共35页。