《病原微生物》PPT课件.ppt
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1、第十三章第十三章常见的病原微生物常见的病原微生物在在日日常常生生活活中中,一一些些人人畜畜共共患患病病的的病病原原微微生生物物经经常常可可以以随随畜畜产产品品及及其其加加工工的的动动物物食食品品传传染染给给人人类类,给给人人类类的的健健康康带带来来影影响响。因因此此,对对肉肉制制品品的的原原料料,甚甚至至宰宰前前的的畜畜禽禽进进行行病原微生物的检查具有非常重要的意义。病原微生物的检查具有非常重要的意义。本本章章着着重重介介绍绍一一些些人人畜畜共共患患病病的的病病原原微微生物的生物学特性及其检验技术。生物的生物学特性及其检验技术。第一节第一节结核分枝杆菌结核分枝杆菌该该菌菌是是引引起起人人及及畜
2、畜禽禽结结核核病病的的重重要要病病原原菌菌,它它是是由由柯柯霍霍氏氏于于1882年年发发现现的的。通通过过患患结结核核病病牛牛的的乳乳汁汁经经消消化化道道传传染染给给人人,是是一一个个重重要要的的传传染染途途径径。分分为为三三个个种种,即即结结核核分分枝枝杆杆菌菌、牛牛结结核核分分枝枝杆杆菌菌(简简称称牛牛结结核核菌菌)和和禽禽结结核核分分枝枝杆杆菌菌(简简称称禽禽结结核核菌菌)。结结核核分分枝枝杆杆菌菌主主要要侵侵害害人人,对对禽禽畜畜的的毒毒力力较较低低。牛牛结结核核菌菌主主要要使使牛牛致致病病,也也能能感感染染人人,尤尤其其是是儿儿童童。常常因因喝喝含含菌菌牛牛奶奶而而被被感感染染致致病
3、病。禽禽结结核核菌菌可可使使禽禽类类患患结结核核病病,偶偶使使猪和牛感染,人感染很少。猪和牛感染,人感染很少。一、生物学特性一、生物学特性(一)形态与染色特性一)形态与染色特性本菌为长本菌为长1.54.0um,宽,宽0.20.6um的细的细长、正直或微弯曲的杆菌,有时菌体末端有不长、正直或微弯曲的杆菌,有时菌体末端有不同的分枝,有的两端钝圆,无鞭毛,无荚膜,同的分枝,有的两端钝圆,无鞭毛,无荚膜,无芽孢,没有运动性。一般单在或成双,间或无芽孢,没有运动性。一般单在或成双,间或成丛排列。在人工培养基上,由于菌型、菌株成丛排列。在人工培养基上,由于菌型、菌株和环境条件不同,可出现多种菌体形态,如近
4、和环境条件不同,可出现多种菌体形态,如近似球形、棒状、或丝状。似球形、棒状、或丝状。结核分支杆菌(1000)该该菌菌为为革革兰兰氏氏阳阳性性菌菌。一一般般苯苯胺胺染染料料难难以以着着色色,若若加加入入媒媒染染剂剂(如如石石碳碳酸酸)或或加加热热处处理理使使之之染染色色后后,可可以以抵抵抗抗酒酒精精的的脱脱色色作作用用。萋萋尼尼二二氏氏对对结结核核杆杆菌菌的的抗抗酸酸染染色色法法,就就是是根根据据这这个个道道理理进进行行的的。因因为为结结核核杆杆菌菌中中含含有有脂脂类类,染染料料一一旦旦进进入入细细胞胞内内部部很很难难脱脱出出。用用上上述述方方法法染染色色,结结核核杆杆菌菌被被染染成成红红色色,
5、而而其它非抗酸菌和细胞杂质均呈蓝色。其它非抗酸菌和细胞杂质均呈蓝色。(二)培养特性及生化特性二)培养特性及生化特性该该菌菌为为专专性性需需氧氧菌菌,生生长长最最适适pH值值6.5-6.8,最最适适生生长长温温度度为为37-37.5。其其生生长长速速度度很很慢慢,尤尤其其是是初初代代分分离离。在在人人工工培培养养基基上上最最快快分分裂裂速速度度为为18小小时时一一代代,一一般般12周周才才看看见见开开始始生生长长,34周周才才能能旺旺盛盛的的发发育育。过过早早出出现现的的菌菌落落即即使使具具有有抗抗酸酸性性,也也不不是是结结核核杆杆菌菌,而而是是抗抗酸性腐生菌。酸性腐生菌。结结核核杆杆菌菌对对营
6、营养养要要求求极极高高,必必须须在在含含有有血血清清、鸡鸡蛋蛋、甘甘油油、马马铃铃薯薯及及某某些些无无机机盐盐特特殊殊培培养养基基上上,才才能能良良好好生生长长。初初代代分分离离培培养养更更是是如如此。此。在在固固体体培培养养基基上上,菌菌落落呈呈灰灰黄黄白白色色、干干燥燥颗颗粒粒状状、显显著著隆隆起起,表表面面粗粗糙糙皱皱缩缩,菜菜花花状状的的菌落。菌落。在在液液体体培培养养基基内内,于于液液面面形形成成粗粗纹纹皱皱膜膜,培培养养基基保保持持透透明明。若若加加入入吐吐温温-80于于培培养养基基中中,可使结核杆菌呈分散均匀生长。可使结核杆菌呈分散均匀生长。本菌不发酵糖类。过氧化物酶阳性。人型本
7、菌不发酵糖类。过氧化物酶阳性。人型菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐。某些菌株能产生菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐。某些菌株能产生少量硫化氢。少量硫化氢。V-P试验及甲基红试验均为阳性。试验及甲基红试验均为阳性。在牛乳中生长,乳汁无变化,这样对传染结核在牛乳中生长,乳汁无变化,这样对传染结核病尤为危险。病尤为危险。(三)抵抗力三)抵抗力该该菌菌由由于于含含有有大大量量的的类类脂脂和和腊腊质质成成分分,对对外外界界的的抵抵抗抗力力较较强强。它它在在干干燥燥状状态态可可存存活活23个个月月,在在腐腐败败物物和和水水中中可可存存活活5个个月月,在在土土壤壤中中可可存存活活7个个月月到到一一年年。该该菌菌在在冰冰点点
8、以以下下还还能能存存活活45个个月月,在在190时时还还保保持持活活力力。室室温温下下在在乳乳中中能能存存活活910天天,在在奶奶油油中中存存活活一一周周,在在干干酪酪中中为为4个个月月。结结核核杆杆菌菌对对某某些些理理化化因因子子的的抵抵抗抗力力较较强强。在在干干痰痰中中存存活活68个个月月,若若粘粘附附于于尘尘埃埃上上,保保持持传传染染性性810天天。但但对对湿湿热热、紫紫外外线线、酒酒精精的的抵抵抗抗力力弱弱。在在液液体体中中加加热热626315分分钟钟,直直射日光下射日光下23小时,小时,75%酒精内数分钟即死亡。酒精内数分钟即死亡。此此菌菌对对湿湿热热抵抵抗抗力力较较差差,因因此此鲜
9、鲜乳乳经经巴巴氏氏消消毒毒法法消消毒毒后后即即无无这这方方面面的的危危险险性性。一一般般消消毒毒药药物物对对结结核核杆杆菌菌杀杀伤伤力力不不强强,在在消消毒毒药药品品(5石石碳碳酸酸、2来来苏苏尔尔)作作用用下下,一一般般经经1214小时死亡。小时死亡。它对酸碱、低浓度的结晶紫和孔雀绿有抵它对酸碱、低浓度的结晶紫和孔雀绿有抵抗力,因此,在实验室培养该菌时,常用酸碱抗力,因此,在实验室培养该菌时,常用酸碱处理病料,在培养基中加入染料,以达到控制处理病料,在培养基中加入染料,以达到控制杂菌生长提高检出率的目的。杂菌生长提高检出率的目的。二、诊断与检验技术二、诊断与检验技术根根据据诊诊断断与与检检验
10、验对对象象不不同同可可采采取取不不同同的的诊诊断断与与检检验方法。现分述如下:验方法。现分述如下:(一)对患病和可疑病畜的诊断(一)对患病和可疑病畜的诊断主要采取微生物学检查方法。包括可疑病料的涂主要采取微生物学检查方法。包括可疑病料的涂片镜检、纯培养物的分离及实验动物感染等。涂片镜片镜检、纯培养物的分离及实验动物感染等。涂片镜检是按萋尼二氏抗酸性染色后进行的,在利用病料制检是按萋尼二氏抗酸性染色后进行的,在利用病料制备的涂片上见到单在或成丛的红色小杆菌。接种豚鼠备的涂片上见到单在或成丛的红色小杆菌。接种豚鼠进行感染试验,接种含有病原性结核杆菌的豚鼠经进行感染试验,接种含有病原性结核杆菌的豚鼠
11、经24个月死亡。剖检时可见到肝、脾及其它脏器有典个月死亡。剖检时可见到肝、脾及其它脏器有典型的结核病变,呈栗粒状小结核。型的结核病变,呈栗粒状小结核。(二)对大群动物的检疫或疫场假定健康群的检疫方法(二)对大群动物的检疫或疫场假定健康群的检疫方法主主要要采采用用变变态态反反应应的的方方法法,即即利利用用结结核核菌菌素素诊诊断断的的方方法法。早早在在1890年年柯柯霍霍氏氏曾曾提提出出过过用用结结核核菌菌素素治治疗疗,但但后后来来大大量量实实践践工工作作证证明明,本本制制剂剂可可成成功功的的作作为为本本病病的的诊诊断断液液。目目前前我我国国做做牛牛结结核核(尤尤其其在在牛牛场场)检检疫疫时时主主
12、要要采采用用这这种种方方法法。应应用用时时具具体体有有三三种种形形式式:即即皮皮内内法法、点点眼眼法法和和皮皮下下法法,我我国国目目前前主主要要采采用用的的方方法法是是皮皮内内法法和和点点眼眼法法(鹿鹿结结核核病病的的检检疫疫也也是如此)。是如此)。应应用用此此法法可可检检出出牛牛群群内内9598的的结结核核病病牛牛。结结核核菌菌素素和和干干制制的的结结核核菌菌素素的的具具体体使使用用方方法法可可参参照照动物检疫规程的有关部分。动物检疫规程的有关部分。(三)屠宰畜禽及其有关产品(乳及乳制品)的检验(三)屠宰畜禽及其有关产品(乳及乳制品)的检验屠屠宰宰畜畜禽禽的的检检验验,取取其其结结核核病病灶
13、灶部部分分,可可直直接接涂涂片片、染染色色后后镜镜检检或或做做培培养养及及动动物物实实验等。验等。畜畜禽禽产产品品及及其其制制品品采采样样方方法法见见国国家家食食品品卫生检验标准。卫生检验标准。(四)其它检验方法(四)其它检验方法1.玻片快速培养法玻片快速培养法取取无无菌菌脱脱纤纤血血1份份,加加入入无无菌菌蒸蒸馏馏水水3份份,使使混混合合溶溶血血后后,将将处处理理过过的的检检样样涂涂于于载载玻玻片片上上,制制成成涂涂片片(不不固固定定),将将此此涂涂片片投投入入溶溶血血血血液液中中进进行行培培养养三三天天后后用用显显微微镜镜观观察察,可可见见细细菌菌生生长长,在在玻玻片片上上有有抗抗酸酸性性
14、染染色色的的微微菌菌落落。一一般般培培养养57天后最后观察结果。天后最后观察结果。2.小鼠快速诊断试验小鼠快速诊断试验将将检检验验材材料料以以4的的氢氢氧氧化化钠钠及及1的的明明矾矾消消化化浓浓缩缩后后,给给小小鼠鼠静静脉脉注注射射。将将接接种种的的小小鼠鼠于于第第5、10、15及及20日日后后分分别别杀杀死死一一只只,取取其其脾脾脏脏作作压压印印涂涂片片,或或磨磨碎碎后后涂涂片片,以以抗抗酸酸性性染染色色法法染染色色后后镜镜检检。凡凡脾脾脏脏肿肿大大,且且涂涂片片中中发发现现结结核核杆杆菌菌者者为为阳阳性性。结结果果比比培培养养法法阳阳性性率率高高,且且510日日即即有有95呈呈阳阳性性,1
15、5日日阳阳性性率率可可达达99.4。3.中性红试验中性红试验该该方方法法利利用用致致病病性性结结核核杆杆菌菌一一种种特特有有的的细细胞胞化化学学性性质质,即即在在甲甲醇醇洗洗过过的的结结核核菌菌落落内内加加入入碱碱性性缓缓冲冲溶溶液液、中中性性红红染染料料,借借以以鉴鉴定定结核杆菌。结核杆菌。(1)将将固固体体培培养养基基上上生生长长良良好好的的结结核核杆杆菌菌落落,以以白白金金耳耳刮刮取取数数个个,放放入入盛盛有有50甲甲醇醇溶液溶液5毫升的灭菌试管内。毫升的灭菌试管内。(2)置)置37水浴中保温水浴中保温1小时,去掉上清液。小时,去掉上清液。(3)加加入入新新配配制制的的碱碱性性缓缓冲冲溶
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