《生化分析方法》PPT课件.ppt

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1、Company Logo一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念二：实验室生化、免疫试验的标本二：实验室生化、免疫试验的标本三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础五：微生物检验基础五：微生物检验基础六：止血、血栓的实验室试验基础六：止血、血栓的实验室试验基础七：糖化血红蛋白（七：糖化血红蛋白（HBA1C)实验室检查概述实验室检查概述临床检验基础临床检验与医学的关系及基本临床检验与医学的关系及基本概念概念Company Logo一：临床检验与医学的关系一：临床检验与医学的关系（一）、提供准确诊断；为准确诊断、及时治疗提

2、供依据1、白血病：血象和骨髓象（诊断）2、肿瘤：骨髓瘤（诊断）3、贫血：RBC和Hb （为准确诊断）4、细菌培养：准确的细菌 （为准确诊断）5、药敏实验，（为及时治疗）一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo（二）、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据 在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化1、肝功能项目检查：分析病情（急性肝炎、慢性肝炎 肝硬化）2、胆红素检查：观测疗效（黄疸减轻或消失）3、血脂项目检测：判断心血管疾病、冠心病预后 HBA1C检查：判断糖尿病并发症的发生、预后 （HbA1c)水平7%者发生卒中的危险

3、是HbA1c水平5%者的2.83倍）一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo（三）、为预防疾病提供资料1、流行病学情况调查：结核抗体普查2、地方病普查：克山病（血硒检查）3、职业病：血铅检查4、脱落细胞检查：肿瘤普查5、血象：营养状况调查（Fe筛查，缺铁性贫血）一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo二、实验室检查的一般方法：二、实验室检查的一般方法：1、目视检查：直接观察标本颜色、透明度、性状，有无凝块或寄生虫2、理学检查：液体的相对密度、血液比、粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化3

4、、显微镜检查：观察有型成分的数量和形态等病理变化4、化学和免疫学检查：定性和定量检测标本化学、生物成分的病理变化5、其他检查：基因扩增、电子荧光、芯片等一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo临床检验（临床检验（ClinicalLaboratoryTechnologyorScience)近代医学诊断体系的形成源于近代医学诊断体系的形成源于19世纪初叶法国世纪初叶法国Laennec奠定的胡典诊断学。奠定的胡典诊断学。二次大战后，随着基础医学的飞速发展，实验诊二次大战后，随着基础医学的飞速发展，实验诊断学也有了迅速发展，逐渐形成临床生化、临床断学

5、也有了迅速发展，逐渐形成临床生化、临床免疫、临床微生物、临床血液等新的分支学科免疫、临床微生物、临床血液等新的分支学科我国称谓我国称谓临床检验临床检验一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo检验工作（分散型）检验工作（分散型）中心化中心化检验科检验科我国第一个建立的比较完整的检验科于我国第一个建立的比较完整的检验科于1960年年在南京军区总医院设立在南京军区总医院设立我国医院检验科所属专业通常包括：临床检验学、我国医院检验科所属专业通常包括：临床检验学、临床化学、免疫血清学、血液学、微生物学和分临床化学、免疫血清学、血液学、微生物学和分子生物

6、学，但每个专业的内涵近年有很大的发展，子生物学，但每个专业的内涵近年有很大的发展，例如临床化学按其涉及内容又可分为酶、脂类、例如临床化学按其涉及内容又可分为酶、脂类、电解质、气体分析、微量元素、糖及含氮化合物、电解质、气体分析、微量元素、糖及含氮化合物、治疗药物临测（治疗药物临测（TDM）、毒理检测等。）、毒理检测等。一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo检验科专业分类检验科专业分类一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo初诊后的初诊后的项目选择项目选择解释解释开医嘱开医嘱标本标本准备标本

7、准备标本测定测定报告报告计算计算准备病人准备病人检验医学全流程图检验医学全流程图一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo临床检验对医生的建议：临床检验对医生的建议：1、合理选择检验项目并知晓其方法及特点、合理选择检验项目并知晓其方法及特点2、与实验室沟通并合作，确保准确、快速、与实验室沟通并合作，确保准确、快速时机的把握病人的准备严格监督标本的采集（SOPs）3、客观评价检验结果、客观评价检验结果一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关

8、系及基本概念Company Logo实验方法的分级实验方法的分级推荐常规使用推荐常规使用有足够的精密度，准有足够的精密度，准确，特异，经济适用确，特异，经济适用c.常规方法常规方法（实验室常用方法实验室常用方法）鉴定常规，质控定鉴定常规，质控定值值标定，干扰少，结果标定，干扰少，结果可靠可靠b.参考方法参考方法（制定部分金标准制定部分金标准）标准品，参考方法标准品，参考方法评价评价准确，误差小，接近准确，误差小，接近真值真值a.决定性方法决定性方法（制定金标准、朔源制定金标准、朔源用用）用途用途特点特点分类分类一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company

9、Logo“金标准金标准”“金标准金标准”主要指活体组织检查、病原学检主要指活体组织检查、病原学检查、细胞学检查、特殊影像诊断、长期随访及临床医学专查、细胞学检查、特殊影像诊断、长期随访及临床医学专家共同制订的公认的综合诊断标准。家共同制订的公认的综合诊断标准。如：如：1 1、肿瘤：病理切片报告、肿瘤：病理切片报告 2 2：酶联免疫法：酶联免疫法PCR:PCR:罗氏罗氏AmplicoreAmplicore检查的检查的HCV/TBHCV/TB等结果等结果 3 3、HBA1CHBA1C：HPLCHPLC（高压液相色谱法）测定的结果高压液相色谱法）测定的结果4、甲功五项检查：目前的金标准是甲功五项检查

10、：目前的金标准是RIA（放射免疫法）（放射免疫法）测定的结果等。测定的结果等。一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo实验方法评价的有关指标实验方法评价的有关指标敏感性=（TP/（TP+FN）100%特异性=（TN/（TN+FP）100%阳性预测值=TP/（TP+FP）100%阴性预测值=TN/（TN+FN）100%（TP-真样性；FP假阳性；FN假阴性；TN真阴性）一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo试验方法选择试验方法选择筛查：敏感性高的项目，防止假阴性筛查：敏感性高的项目，防止假阴

11、性诊断：特异性高的项目，防止假阳性诊断：特异性高的项目，防止假阳性一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo正常值：正确应为正常值：正确应为”参考值参考值“参考值范围一般为参考值范围一般为“平均值平均值 1.96SD”即包即包括括95%的入选人群测试结果的入选人群测试结果 注意注意:1：参考值内外均有生理和病理的可能，只是概率大小而已 2：不可过分依赖和机械使用“参考值”3：任何检查项目均存在个体差异 4：在参阅检验结果时应充分考虑一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo常用的名词常用的名词标

12、准品：标准品：由一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可被用来校由一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可被用来校正仪器或证实某种实验方法的物质。可分为：正仪器或证实某种实验方法的物质。可分为：1、一级标准品（原级参考物）、一级标准品（原级参考物）特点：特点：a:值是唯一的值是唯一的b:杂质已经定量杂质已经定量c:由国际组织或国家标准委员会发给证书由国际组织或国家标准委员会发给证书（如美国的（如美国的NBS；中国国家临床检验标准委员会；中国国家临床检验标准委员会CCCLS；CRM470；NCCLS等）等）一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Log

13、o例：例：CRM470一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company LogovCRM470并非直接应用到常规实验室，更多情况下首先是作为诊断并非直接应用到常规实验室，更多情况下首先是作为诊断产品厂商制备标准母液和母定标曲线的参考标准。对提高不同实验室产品厂商制备标准母液和母定标曲线的参考标准。对提高不同实验室和不同方法所得结果的一致性、控制不同试剂批号的批间差异有重要和不同方法所得结果的一致性、控制不同试剂批号的批间差异有重要意义。意义。v由于不同方法的方法学（散射或透射比浊测定）差异、不同厂家试剂由于不同方法的方法学（散射或透射比浊测定）差异、不同厂家试

14、剂抗体选择和试剂抗干扰（脂血、溶血）能力的差异。抗体选择和试剂抗干扰（脂血、溶血）能力的差异。CRM470并非并非可以完全消除差异，但是通过可以完全消除差异，但是通过CRM470标准化，可以最大限度地提标准化，可以最大限度地提高检测结果的可比性。高检测结果的可比性。罗氏特定蛋白标准的优势：罗氏特定蛋白标准的优势：v血清以正常人血清为基质血清以正常人血清为基质v液体即用型标准液体即用型标准v稳定性好，被测蛋白不降解（内含蛋白分解酶抑制剂）稳定性好，被测蛋白不降解（内含蛋白分解酶抑制剂）v去除了标准血清中的脂质去除了标准血清中的脂质v空白本底小空白本底小v基质效应少基质效应少一：临床检验与医学的关

15、系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo同意参考范围的厂商同意参考范围的厂商 Hoffmann-LaRocheBecton ABIONDako Diagnostic Abbott Dade diagnostikc DuPont Beckman Instruments Bayer Diagnostics Human Gesellschaft fur Biochemica Behringwerke Johnson&Johnson Clinical Diagnostics BioMerieux Orion Diagnostica Boehringer Mannheim

16、Wako一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo2、二级标准品（次级标准品）、二级标准品（次级标准品）:特点：特点：a:值是唯一的值是唯一的b:物质的量由参考方法定值或用一级标准品物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。比较而确定。b:定值物质与测定物质基质相似。定值物质与测定物质基质相似。例：罗氏；例：罗氏；特定蛋白定标液特定蛋白定标液一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo3、控制物（值控品）：、控制物（值控品）：特点：特点：a:分为定值与未定值两种分为定值与未定值两种b:定值的

17、值有一定范围定值的值有一定范围c:由一、二级标准品以参考方法定值由一、二级标准品以参考方法定值例：例：罗氏罗氏PPN；PPU等。等。一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo各级分析方法与标准品的相互关系各级分析方法与标准品的相互关系决定性方法：评价参考方决定性方法：评价参考方法及一级标准品法及一级标准品参考方法：为二级标准品及参考方法：为二级标准品及值控品定值，评价常规方法值控品定值，评价常规方法常规方法：服务性实验室常规方法：服务性实验室的常规定量分析的常规定量分析值控品：质量保证值控品：质量保证二级标准品：常规方法的工作标准二级标准品：常

18、规方法的工作标准及为值控品定值及为值控品定值一级标准品：发展及评价参考方法，一级标准品：发展及评价参考方法，校正决定性方法及参考方法，产生校正决定性方法及参考方法，产生二级标准品二级标准品一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo溯源性溯源性v溯源性(可追溯性）Traceabilityv通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。v说明结果准确的依据。（寻根问源）(ISO17511、ISO18153）一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及

19、基本概念Company Logo罗氏溯源罗氏溯源一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念真真值值参考性方法参考性方法 比较分析方法比较分析方法 原始标定母液原始标定母液 ID-MS,HPLC,CRM470,原子吸光法测定不同项目的不同靶值所有酶的项目的靶值采用手工方法用比色计在37度得出的ABS与摩尔消光系数计算得出标准验室标准验室Company Logo质量控制（质量控制（QualityControl。值控。值控)：实验室为保证实验结果的有效性和改进工作质实验室为保证实验结果的有效性和改进工作质量所需的全部活动。量所需的全部活动。一、室内质量控制（一、室内质量控制

20、（InternalQualityControl)为保证质量的实验室内工作全过程。包括为保证质量的实验室内工作全过程。包括1、分析前的质量控制、分析前的质量控制2、分析中的质量控制、分析中的质量控制3、分析后的质量控制、分析后的质量控制一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company LogoIQC常用的值控图：常用的值控图：XSD（常用）：均值值控图（常用）：均值值控图解释：解释：1、95%结果都在结果都在2SD内内2、均数两侧分布的点几乎相等，不能、均数两侧分布的点几乎相等，不能有连续有连续5点在均数同一侧点在均数同一侧3、不能有连续、不能有连续5次测定值渐

21、增或渐降次测定值渐增或渐降4、不能有连续、不能有连续2点在点在2SD以外以外5、不应该有落在、不应该有落在3SD以外的点以外的点MONICA值控图，不常用。值控图，不常用。3SD-3SD2SD-2SDX一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo二、室间质量评价（室间值评、二、室间质量评价（室间值评、ExternalQualityAssessment）是由本实验室以外的某机构（临床检验中心、是由本实验室以外的某机构（临床检验中心、罗氏公司）所执行的客观地评价实验室测定结果罗氏公司）所执行的客观地评价实验室测定结果的一种体系（罗氏的一种体系（罗氏Q

22、CS).注意：注意：1、EQA是回顾性的，即对过去工作质量是回顾性的，即对过去工作质量的评价的评价2、是以调查的方式、是以调查的方式3、是评价，不是控制、是评价，不是控制V=(X-T)/T*100%VI=V/CCV*100一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo我国的我国的CCV值选用值选用WHO在国际室在国际室EQA中使用的中使用的CCV值（如：值（如：Glu7.7；TP3.9；Cre8.9等）等）1985年全国生化值控会议采用的年全国生化值控会议采用的EQA分级为：分级为：VIS80为优秀，为优秀，80VIS150为良好为良好VIS150

23、为不合格为不合格注：注：VIS是在统计中降VI50全部视为0后对VI的“称呼”一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo罗氏罗氏QCSQCS（Quality Control Service）的基础和优点一、实现基础一、实现基础检测系统检测系统校准品定值溯源性校准品定值溯源性控制品定值溯源性控制品定值溯源性全球性比较全球性比较二、优点二、优点在控：检测系统对患者标本检测结果实现了在控：检测系统对患者标本检测结果实现了溯源性溯源性一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo检测系统检测系统一：临床检验

24、与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo临床实验室管理办法v第二十五条第二十五条 医疗机构临床实验室应当对开展医疗机构临床实验室应当对开展的临床检验项目进行室内质量控制，绘制质的临床检验项目进行室内质量控制，绘制质量控制图。出现质量失控现象时，应当及时量控制图。出现质量失控现象时，应当及时查找原因，采取纠正措施，并详细记录。查找原因，采取纠正措施，并详细记录。v第二十九条第二十九条 医疗机构临床实验室参加室间质医疗机构临床实验室参加室间质量评价应当按照常规临床检验方法与临床检量评价应当按照常规临床检验方法与临床检验标本同时进行，不得另选验标本同时进行，不

25、得另选检测系统检测系统，保证，保证检验结果的真实性。检验结果的真实性。一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念Company Logo第二十七条医疗机构临床实验室定量测定项目的医疗机构临床实验室定量测定项目的室内质量控制标准按照室内质量控制标准按照临床实验室定量测定室临床实验室定量测定室内质量控制指南内质量控制指南（GB/20032302-T-361）执行。）执行。一：临床检验与医学的关系及基本概念一：临床检验与医学的关系及基本概念二：实验室生化、免疫试二：实验室生化、免疫试验的标本验的标本Company Logo一、生化、免疫检验一般用血清、血浆。一、生化、免疫检

26、验一般用血清、血浆。二、特殊标本有尿液、脑脊液、炎性积液（胸腹二、特殊标本有尿液、脑脊液、炎性积液（胸腹水、关节积液）等水、关节积液）等三、特殊项目检查用抗凝全血三、特殊项目检查用抗凝全血1、血气检查用抗凝动脉全血、血气检查用抗凝动脉全血2、HBA1C检查用抗凝静脉全血检查用抗凝静脉全血二：实验室生化、免疫试验的标本要求二：实验室生化、免疫试验的标本要求Company Logo二：实验室生化、免疫试验的标本二：实验室生化、免疫试验的标本Company Logo标本因素对结果的影响标本因素对结果的影响二：实验室生化、免疫试验的标本二：实验室生化、免疫试验的标本1、静脉采血时，止血带使用时间过长一

27、分钟开始蛋白浓度开始升高3-5分钟约升高5%10-15分钟高达15%左右Company Logo二：实验室生化、免疫检查的标本二：实验室生化、免疫检查的标本2、采血时握拳可导致血钾增高握拳一分钟可使血钾增高3、检测项目包括静脉给予的物质时应注意5%的右旋糖苷中葡萄糖浓度为5000 mg/dl内置导管常使用肝素，这种情况采血进行凝血试验结果显然不可靠一边输液一边采血，既可能被污染又可能被稀释Company Logo4、抗凝剂的影响（污染）二：实验室生化、免疫检查的标本二：实验室生化、免疫检查的标本不同项目有不同的保护剂或抗凝剂如EDTA钾可使钾升高，钙、镁、CK等降低5、凝血试验的标本不宜先取合

28、理次序：无添加剂、少量抗凝剂、其他Company Logo标本采集的影响 除了急诊或其它特殊原因外，一般主张空腹12小时以后取血 影响检验结果的常见因素影响检验结果的常见因素二：实验室生化、免疫检查的标本二：实验室生化、免疫检查的标本Company Logo6、药物对检测结果的影响、药物对检测结果的影响二：实验室生化、免疫检查的标本二：实验室生化、免疫检查的标本维生素C是一种还原剂，可干扰葡萄糖氧化酶法测定血糖 口服含黄体酮成分的避孕药引起血清胆固醇的升高 利尿药增加血钠和血钾浓度 非那西酊、别瞟吟醇、氨基水杨酸、雄性激素、环磷酸胺、红霉素、消炎痛、异烟肼、6一巯基瞟吟、阿的平、烟酸、保泰松、

29、磺胺药、吩噻嗪等。这些药物可使血清碱性磷酸酶、胆红素、丙氨酸氨基转移酶（ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)浓度或活性升高Company Logo 吗啡可使血清淀粉酶、脂肪酶、氨基转移酶、碱性磷酸酶、胆红素等升高，使胰岛素、去甲肾上腺素等降低。大麻可使血钾、钠、氯、尿素和胰岛素等升高，而使肌酐、尿酸、血糖降低。二：实验室生化、免疫检查的标本二：实验室生化、免疫检查的标本三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础生物化学检验生物化学检验(biochemistrytest）是以健康和疾病时的生物化）是以健康和疾病时的生物化

30、学过程为研究目的，通过测定组织、体液的成分，揭示疾病变化和药学过程为研究目的，通过测定组织、体液的成分，揭示疾病变化和药物治疗对机体生物化学过程和组织、体液成分的影响，以提供疾病诊物治疗对机体生物化学过程和组织、体液成分的影响，以提供疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防有用信息的一门学科。断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防有用信息的一门学科。生物化学检验是医学的一个分支，它主要以化学和医学知识为基础，生物化学检验是医学的一个分支，它主要以化学和医学知识为基础，同时应用生物学、药理学、分子生物学、仪器学、计算机电子学等学同时应用生物学、药理学、分子生物学、仪器学、计算机电子学

31、等学科知识，它的独特研究领域、性质和作用，使其成为一门理论和实践科知识，它的独特研究领域、性质和作用，使其成为一门理论和实践性强的边缘性的应用学科。性强的边缘性的应用学科。Company Logo临床生物化学的主要任务临床生物化学的主要任务:三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础阐述疾病的生物化学基础疾病发生发展的生物化学过程 药物对疾病发生发展的生物化学过程的影响 生物化学检验则以检验方法、新技术的开发应用开发应用和检验检验质量的保证质量的保证为主，并对检验结果及其临床意义作出评评价价，为临床提供正确、有用的实验实验室信息室信息。Company Logo生物化学检验包括生物化学检验包括

32、:普通生化检验 特殊生化检验 急诊生化检验 床旁生化检验 其提供的检验项目可满足临床多种疾病的诊断需要，可对这些项目按不同类别进行编组 技术条件要求较高，并非在每个实验室都能开展，可通过中心实验室提供此类服务 开展临床紧急需求的、小规模的检验项目，能迅速地回报检验结果 一些小型的生化分析仪放置在病人床旁或医疗现场,使得能快捷、方便地得到检验结果 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logov化学比色法化学比色法v免疫比浊法免疫比浊法v离子选择性电极电位法离子选择性电极电位法v电泳法电泳法 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo 化学比色法化

33、学比色法基本原理：根据朗伯比尔定律，特定波长的光基本原理：根据朗伯比尔定律，特定波长的光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。待测物经过一定的化学反应生成的产物，对特定待测物经过一定的化学反应生成的产物，对特定波长的光具有吸收峰，从而对物质进行定量检测。波长的光具有吸收峰，从而对物质进行定量检测。这是最常用的一种方法。这是最常用的一种方法。例：总蛋白，白蛋白、例：总蛋白，白蛋白、Glu、TG、TCH等的测等的测定定 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo免疫比浊法免疫比浊法基本原理：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗

34、基本原理：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，浊度亦增加。如检测散射光强度则为散射增加，浊度亦增加。如检测散射光强度则为散射比浊，如检测透过光则为透射比浊。一般生化仪比浊，如检测透过光则为透射比浊。一般生化仪所用为透射比浊所用为透射比浊例：前白蛋白，载脂蛋白等蛋白的测定例：前白蛋白，载脂蛋白等蛋白的测定 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo 离子选择性电极电位法离子选择性电极电位法基本原理：根据

35、能斯特方程，离子选择性电极法基本原理：根据能斯特方程，离子选择性电极法通过检测电极表面电位的改变，比较测定电极与通过检测电极表面电位的改变，比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算样本中参比电极表面电位变化的差值大小来计算样本中离子的含量。离子的含量。例：钾、钠、氯、例：钾、钠、氯、PH的测定的测定 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo电泳法电泳法基本原理：在直流电场中，带电粒子具有向带相基本原理：在直流电场中，带电粒子具有向带相反电极移动的现象。血清中的蛋白质为双性离子，反电极移动的现象。血清中的蛋白质为双性离子，在碱性环境中带负电荷，在电场中向正极

36、移动。在碱性环境中带负电荷，在电场中向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷，带电荷不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷，带电荷多，分子量小则泳动快，反之则慢，从而将不同多，分子量小则泳动快，反之则慢，从而将不同蛋白分离。蛋白分离。例例:血清蛋白电泳血清蛋白电泳 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo肝胆疾病的生物化学检测肝胆疾病的生物化学检测 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo肝功能实验的内容蛋白质代谢功能检查（TP、Alb、PAB）胆红素代谢检查（TB、DB）胆汁酸代谢检查（TBA）血清肝酶谱的检查（ALT、AST、GGT

37、、ALP、CHE）三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo肾脏疾病的生物化学检查肾脏疾病的生物化学检查肾脏的功能肾脏的功能 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础 排泄水分、代谢产物、废物，保留有用物质 调节水分和渗透压 调节电解质及酸碱平衡 制造某些重要的生理活性物质Company Logo肾功检查：肾功检查：三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础尿素尿素尿素尿素(UREA)肌酐肌酐肌酐肌酐(CREA)血尿血尿酸（酸（酸（酸（UA）2-微球蛋白Company Logo1、血浆脂类包括游离胆固醇（FC）、胆固醇酯(CE)、磷脂（PL）、甘油三酯（TG）、

38、糖脂和游离脂肪酸（FFA）等2、血浆中最多的脂质为胆固醇、PL和TG，游离胆 固醇和胆固醇酯称为总胆固醇3、血浆脂类以脂蛋白复合体的形式存在4、血浆脂蛋白分类：CM、VLDL、IDL、LDL、HDL和Lp(a)三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础血清脂类及脂蛋白检测血清脂类及脂蛋白检测Company Logo超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白图谱超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白图谱 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo急性心肌损伤的生物化学标志物急性心肌损伤的生物化学标志物近几年，一致认为肌红蛋白和CK-MB亚型是急性心肌梗死早期标志物，肌钙蛋白是心肌损伤

39、的确诊标志物。具体包括心肌酶学（AST、LDH、LDH1-5、CK、CK-MB、-HBDH）心肌肌钙蛋白（包括cTnT和cTnI）肌红蛋白Mb 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo糖代谢及糖尿病检测糖代谢及糖尿病检测血糖（血糖（Glu)果糖胺（果糖胺（FRA）（糖化血清蛋白）（糖化血清蛋白GSP）糖化血红蛋白（糖化血红蛋白（HBA1c)酮体（乙酰乙酸、酮体（乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮）羟丁酸和丙酮）三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo无机离子的生物化学检测无机离子的生物化学检测v血清钾的测定v血清钠的测定v血清氯的测定v血清二氧化碳

40、的测定v血清钙的测定v血清磷的测定v血清铁的测定v血清镁的测定 三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础Company Logo其它检查项目：其它检查项目：三：实验室生化试验基础三：实验室生化试验基础CRP C3,C4 1 Acid glycoproteinsIgA,G,M ASLO,RF Transferrin Ferritin,sTfR*Prealbumin MAU a1-Antitrysin Myoglobin1-Microglobin b 2-Microglobulind-Dimer Urine/CSF ProteinsCRP(HS)*LpaseAmy P-Amy四：实验室免疫试验

41、基础四：实验室免疫试验基础Company Logov免疫是机体的一种特殊的保护性生理免疫是机体的一种特殊的保护性生理功能功能.v通过免疫通过免疫,机体能够识别机体能够识别“自己自己”,排排除除“非己非己”,以维持内环境的平衡和以维持内环境的平衡和稳定稳定.免疫又分为：免疫又分为：一、非特异性免疫一、非特异性免疫二、特异性免疫二、特异性免疫 四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo非特异性免疫：非特异性免疫：指机体先天存在的免疫特性,是人类在长期进化过程中建立的天然防御功能.人人生来就有,不针对某一种特定的病原体.皮肤、黏膜等屏障作用(第一道防线)体液中的杀菌物质和吞

42、噬细胞的作用(第二道防线)四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo特异性免疫：特异性免疫：指机体与外来侵害抗原物质接触后获得的、具有针对性(即对某一特定病原体或异物起防御作用)的免疫特性.包括体液免体液免疫疫和细胞免疫细胞免疫。第三道防线 中国古人种人痘中国古人种人痘 詹纳接种牛痘詹纳接种牛痘 四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logov免疫器官 骨髓、胸腺、脾、淋巴结、扁桃体等v免疫细胞 淋巴细胞、吞噬细胞、NK细胞等v免疫物质 各种抗体、淋巴因子等特异性免疫的物质基础特异性免疫的物质基础人体的免疫系统人体的免疫系统 四：实验室免疫试验基

43、础四：实验室免疫试验基础Company Logo抗原：抗原抗原：抗原(antigen，Ag)是指能刺激机体免疫是指能刺激机体免疫系统诱导免疫应答并能与应答（如抗体或致敏淋系统诱导免疫应答并能与应答（如抗体或致敏淋巴细胞）发生特异反应的物质。巴细胞）发生特异反应的物质。特点：特点：1、免疫原性、免疫原性(immunogenicity)指诱导宿主产生指诱导宿主产生免疫应答的能力，具有这种能力的免疫应答的能力，具有这种能力的物质称为免疫原物质称为免疫原(immunogen)2、免疫反应性免疫反应性(immunoreactivity)指抗原与指抗原与抗体或致敏淋巴细胞发生特异抗体或致敏淋巴细胞发生特异

44、性结合的能力，亦称为反性结合的能力，亦称为反应原性应原性半抗原：半抗原半抗原：半抗原(hapten)：在独立存在时只具有：在独立存在时只具有反应原性而无免疫原性反应原性而无免疫原性。四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo抗原的性质：抗原的性质：异物性异物性 一般指外来物质，也包括体内异常细胞大分子性大分子性 通常相对分子质量大于10000特异性特异性 一种抗原只能与相应的抗体或效应T细胞 发生特异性结合。取决于抗原决定簇。四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础蛋白质或蛋白质或多糖多糖抗原决定簇抗原决定簇 抗原物质表面具有的某些特定的化学基团.它是免疫细胞识别

45、抗原的重要依据Company Logo抗体抗体（anti-body)：指机体受抗原刺激后,由效应B细胞产生的、具有与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。如：抗毒素和凝集素.化学本质化学本质:免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)分布分布:存在于血液和其他体液（包括组织液和外分泌液）中，约占血浆蛋白总量的20；还可分布在B细胞表面。Ig的结构具有不均一性，可分为不同的类型；多数Ig具有抗体活性，可以特异性识别和结合抗原，并引发一系列生物学效应.四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo体液免疫和细胞免疫体液免疫和细胞免疫体液免疫体液免疫:由存在于体液中的抗体发挥

46、免疫效应的免疫细胞免疫细胞免疫:主要由效应 T 细胞发挥免疫效应的免疫.体液免疫和细胞免疫的关系体液免疫和细胞免疫的关系体液免疫细胞免疫作用对象体液作用方式被抗原侵入的宿主细胞效应B细胞产生的抗体与相应的抗原特异性合。1、效应T细胞与靶细胞密切接触。2、效应T细胞释放淋巴因子，促进细胞免疫作用，再体液免疫。四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo实验室免疫实验实验室免疫实验(Laboratoryimmunitytests)是在实验室内，模拟人体内环境，用生物学、分是在实验室内，模拟人体内环境，用生物学、分子生物学、化学、仪器学、计算机电子学等学科知识子生物学、化学、

47、仪器学、计算机电子学等学科知识检测机体在正常或疾病情况下的免疫机制和免疫调节检测机体在正常或疾病情况下的免疫机制和免疫调节的一门综合性学科。的一门综合性学科。四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo临床检验实验室免疫试验分为临床检验实验室免疫试验分为1、细胞免疫实验、细胞免疫实验2、血液、体液免疫实验、血液、体液免疫实验一、细胞免疫实验：一、细胞免疫实验：1、E花环形成实验花环形成实验2、白细胞移动抑制试验、白细胞移动抑制试验3、淋巴细胞转化试验、淋巴细胞转化试验4、NK细胞活性测定细胞活性测定5、流式细胞仪检测技术、流式细胞仪检测技术6、杀伤细胞功能的检测、杀伤细

48、胞功能的检测7、吞噬功能试验、吞噬功能试验 四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo二、血液、体液免疫实验二、血液、体液免疫实验（一）、凝集反应 1、直接凝集反应 玻片凝集试验ABO血型鉴定 试管凝集试验ASO稀释凝集试验 2、间接凝集试验 间接血球凝集试验血清类风湿因子测定 间接凝集抑制试验妊娠试验 3、协同凝集试验 四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo（二）沉淀反应（二）沉淀反应1、单向琼脂扩散试验、单向琼脂扩散试验Ig琼脂扩散试验琼脂扩散试验2、双向琼脂扩散试验、双向琼脂扩散试验C3、C4琼脂扩散试验琼脂扩散试验 四：实验室免疫

49、试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo（三）、免疫电泳试验（三）、免疫电泳试验1、对流免疫电泳试验（已知抗体、未知抗原）、对流免疫电泳试验（已知抗体、未知抗原）斯氏肺吸虫诊断斯氏肺吸虫诊断2、火箭免疫电泳试验、火箭免疫电泳试验AFP电泳电泳3、交叉免疫电泳试验、交叉免疫电泳试验早期的肿瘤标志物检查早期的肿瘤标志物检查 四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo（四）、标记免疫试验四）、标记免疫试验1、免疫印迹（染料标记）试验、免疫印迹（染料标记）试验HIV确证试验确证试验2、胶体金标记试验、胶体金标记试验早孕纸条早孕纸条cTnT定性、半定量试条定性、半

50、定量试条3、放射免疫法、放射免疫法4、酶联免疫法、酶联免疫法5、荧光标记免疫、荧光标记免疫6、发光标记免疫、发光标记免疫 四：实验室免疫试验基础四：实验室免疫试验基础Company Logo几种重要的标记免疫检测方法及代表仪器几种重要的标记免疫检测方法及代表仪器分 类 名 称 缩 写 仪 器放射免疫 放射免疫 RIA r-计数器 免疫放射定量分析 IRMA r-计数器酶 免 疫 发 色 ELISA SR1、ES300 荧 光 EILA IMX、AXSYM、VLDAS 发 光 EILA Amerlite、Access荧光免疫 荧光偏振 FPIA TDX、AXSYM 时间分辨荧光 DELFIA A