薄层板的铺制活化点板展层显色及Rf的计算.pdf

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1、薄薄层层板板的的铺铺制制活活化化点点板板展展层层显显色色及及 R Rf f 的的计计算算 Hessen was revised in January 2021实验项目一1、实验项目名称：薄层板的铺制、活化、点板、展层、显色及 Rf的计算。2、实验项目性质：验证性。3、实验要求：必修。4、计划学时数：6 学时。5、实验内容：（1 1）硅胶薄层板的铺制）硅胶薄层板的铺制薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。把欲分离的样品点在薄层板的一端，然后将点样端浸入适宜的展开剂中,在密闭的层析缸中展开，使混合物得以分离的方法。由于层析在薄层上进行故而得名。薄层层析是一种

2、微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定，还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。先做一下准备工作：玻板（约 106cm）羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液 配成%溶液，CMC-Na 一般是要煮的，煮的时候应该缓缓加入 CMC-Na，否则容易结成团块，影响浓度；煮好后一般放个两三天后，取上层清液使用，如果急着使用，也可以用过滤的方法。硅胶 H（小于 260 目）硅胶：CMC-Na=1g：3mL研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度

3、，进一步影响上样量。铺好的板，用手捏起来，平着一放，摔一摔，让玻板上的硅胶铺得更均匀。（2 2）硅胶薄层板的活化）硅胶薄层板的活化铺好的硅胶板，放置过夜，就可使用，想活化的也可活化。即移入烘箱，缓慢升温至 105-110恒温活化半小时，取出放入干燥器中备用。（3 3）硅胶薄层板的展层）硅胶薄层板的展层用点样毛细管取少量溶液点于硅胶板（离板底部大约）。将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点 2-3mm 为宜（切勿将样点侵入展开剂中），密封顶盖，待展开至溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干。（4 4）硅胶薄层板的显色及）硅胶薄层板的显色及 R Rf f的计算的计算分离

4、的化合物若有颜色，很容易识别出来各个样点。但多数情况下化合物没有颜色，要识别样点，必须使样点显色。通用的显色方法有显色剂显色（碘蒸气显色）、紫外线显色和荧光薄层板显色和硫酸-乙醇溶液显色。碘蒸气显色碘蒸气显色：将展开的薄层板挥发干展开剂后，放在盛有碘晶体的封闭容器中，升华产生的碘蒸气能与有机物分子形成有色的缔合物，完成显色。紫外线显色紫外线显色：用掺有荧光剂的固定相材料（如硅胶 F，氧化铝 F 等）制板，展开后在用紫外线照射展开的干燥薄层板，板上的有机物会吸收紫外线，在板上出现相应的色点，可以被观察到。荧光薄层板检测荧光薄层板检测：荧光薄层是在硅胶中掺入少量荧光物质制成的板，在254nm 紫外

5、灯，整个薄层板显黄绿色荧光，被测物质由余吸收了部分照射在此斑点位置的紫外线，而呈现各种颜色。硫酸乙醇溶液显色剂硫酸乙醇溶液显色剂：用乙醇-硫酸液显色时，配制方法为把 10ml 浓硫酸加入在 90ml 乙醇中。注意要少量地慢慢混合。均匀喷在薄层板上，然后通过加热，不同的化合物则显示不同的颜色。比移值比移值 R Rf f的计算的计算：Rf=原点至组分点中心的距离/原点至流动前沿的距离组分 1 的 Rf=d1/d组分 2 的 Rf=d2/d柱层析条件的选择柱层析条件的选择：以薄层层析第一个点的 Rf 为左右的展开系统为柱层析的洗脱条件。6、项目需用仪器设备名称：涂布器、层析缸、紫外灯、喷雾器、加热烤板。7、所需主要元器件及耗材：薄层层析硅胶、柱层析硅胶、层析柱、层析缸、点样毛细管、硫酸、乙醇。8、实验项目目的和任务：掌握薄层板的铺制、活化以及点样技术，掌握利用薄层层析筛选柱层析条件，熟悉薄层层析的原理、显色原理等。思考题：1.吸附层折的基本原理是什么2.展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响